液相色谱常见问题及处理办法

一、问：用HPLC进行分析时，保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？

关于漂移问题：

1．温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定。 2．流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等。 3．柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。关于快速变化问题：

1．流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定。 2．泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

3．流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合。二、问：色质联用中毛细柱的选择应注意什么问题？ 1．柱效要高 2．热稳定性好 3．化学惰性强具体选择应注意：

1．柱极性。根据分析样品选择不同极性的柱子进行分析。 2．柱子内径。内径大小决定柱容量。

3．液膜厚度。分析样品温度不一样，对膜厚有不同要求，温度高液膜要厚，温度低液膜要薄。

4．柱长度。柱越长，柱效越高，分离效果越好，但也存在吸附问题，柱子过长，分析时间长，因此要根据样品考虑柱子长度。

5．外涂层（柱体）的选择。

6．另外还有仪器型号、分析对象等因素。

三、问：液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？

1．筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。 2．存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子。四、问：从那些方面可以简单判别毛细管柱子的热稳定性好坏？

1．分配容量（或容量因子）K，好的柱子在高温运行后，分配容量K不应有明显的下降，否则，说明柱子的热稳定性不好。

2．理论塔板数n，热稳定性好的柱子经受高温后，理论塔板数应基本保持恒定。 3．柱子的极性。热稳定性好的柱子，高温前后极性变化不大，具体表现为保留指数I值没有大的变化。

4．噪声。热稳定性好的柱子在高温下使用后，噪声不能增加。

5．柱子的去活层，毛细管柱子涂固定液前内部一般要用去活性试剂去活以增加惰性。质量好的毛细管柱子高温后，去活层不应该变化，表现在对强极性样品或酸碱性样品的吸附性不能增加。

五、问：为什么进样器内的玻璃衬套会对色谱行为造成影响？进样器内的玻璃衬套主要有下列作用：

1．提供一个温度均匀的汽化室，防止局部过热。

2．玻璃的惰性较不锈钢好，减少了在汽化期间样品分解的可能性。

3．易于拆换清洗，以保持清洁的汽化室表面，一些痕量非挥发性组分会逐渐积累残存于汽化室，高温下会慢慢分解，使基流增加，噪声增大，通过清洗玻璃衬套可以消除这种影响。

4．可根据需要选择管壁厚度及内径适宜的玻璃衬套，以改变汽化室的体积，而不用更换整个进样加热块。

从以上几个方面可以知道玻璃衬套对色谱行为造成影响的原因。六、问：毛细管色谱分流进样时，非线性分流的主要原因是什么？ 1．进样器温度太低，样品汽化不完全，发生分级分流。

2．进样器温度太高，某些组分可能发生热分解，也有的样品可能发生催化分解，或样品部分地被吸附在进样器内表面上。

3．在分流点以前样品没有混合均匀或混合不充分。 4．系统的进样垫、柱接头等地方漏气。

七、问：HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法。 1．样品量不足，解决办法为增加样品量。

2．样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子。 3．样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器。 4．检测器衰减太多。调整衰减即可。

5．检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数。 6．检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。 7．检测池中有气泡。解决办法为排气。 8．记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。 9．流动相流量不合适。调整流速即可。

10．检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。八、问：做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？原因可能有：

1．泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理。