以免吸水。
称样量的计算： W=
VC P式中 W为需称取标准品或供试品的重量（mg）；
V为溶解标准品或供试品制成浓溶液时用容量瓶的体积量 C为标准品或供试品的浓度（单位μ/ ml或μg/ml）； P为标准品的纯度或供试品的估计效价（单位μ/mg或μg/mg） 6.2 稀释 稀释操作应遵照容量分析的操作规程。
6.2.1 从冰箱中取出的标准品溶液，必须先在室温放置，使其温度达到室温后，方可量取。
6.2.2 标准品与供试品溶液的稀释应采用容量瓶，每步稀释，取样量不得少于2 ml为宜，稀释步骤一般不超过3步。
举例：取浓溶液1000μ/ ml。
第一步：取5ml（1000μ/ ml）→50ml量瓶中→100u/ml。 第二步：取5ml（100μ/ ml）→50ml量瓶中→10u/ml（H）。 取5ml（100μ/ ml）→100 ml量瓶中→5u/ml（L）
6.2.3 每次吸取溶液用密刻度玻璃吸管，量取溶液前要用被量液流洗吸管2～3次，吸取样品溶液后，用滤纸将外壁多余液体擦去，从起始刻度开始放溶液。
6.2.4 稀释标准品与供试品用的缓冲液应同一批和同瓶，以免因PH或浓度不同影响测定结果。
6.2.5 稀释时，每次加液至容量瓶近刻度前，稍放置片刻，待瓶壁的液体完全流下，再准确补加至刻度。
6.2.6 （2.2）法，标准品与供试品高、低溶液浓度之比为2：1或4：1。（3.3）法，标准品与供试品高、中、低溶液浓度之比为1：0.8。但所选用的浓度必须在剂量反应直线范围内。
6.3 双碾的制备在半无菌室内进行，应注意微生物及抗生素的污染，培养基应在水浴中或微波炉中融化，避免直火加热。
6.3.1 底层用灭菌大口吸管（20ml）或其它灭菌分装器,吸取已融化的培养基20ml注入双碟内，等凝固后更换干燥的陶瓦盖，放于35-37℃培养箱中保温，使易于摊布菌层。
6.3.2 菌层 取出试验用菌悬液，按已试验妥的菌量[（2.2）法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径在18-22mm，（3.3）法标准品溶液的中心浓度所致的抑菌直径在15-18mm]，
用灭菌吸管吸取菌悬液加入已融化并保温在水浴中（一般细菌48-50℃，芽孢可至60℃）的培养基内，摇匀作为菌层用。用灭菌大口10ml吸管或其它分装器，吸取菌层培养基5ml，使均匀摊布在底层培养基上，置水平台上，用陶瓦圆盖覆盖，放置20-30分钟，待凝固，备用。
6.3.3 放置钢管用钢管放置器，将干热灭菌的镊子或适宜方法将钢管装于玻璃管中，放于钢管放置器上，将双碟打开，放入双碟台上，托起双碟台，使钢管平稳落在培养基上，注意使各个钢管下落的高度基本一致。钢管放妥后，应使双碟静置5-10分钟，使钢管在琼脂内稍下沉稳定后，再开始滴加抗生素溶液。
6.4 滴加抗生素溶液
6.4.1 每批供试品取4-10个双碟,滴加溶液用毛细滴管或定量加样器,在滴加之前须用滴加液洗2-3次。
6.4.2 滴加标准品与供试品溶液，因实验设计方法不同而异。（2.2）法,在双碟的4个钢管中分别成对角滴加标准品(S)及供试品(T)高(H)、低（L）两种浓度的溶液。（3.3）法的6个钢管中间隔3个钢管分别滴加标准品及供试品高、中（M）、低3种浓度溶液，并使相同浓度成对角。滴加溶液的顺序：（2.2）法SH→TH→SL→TL；（3.3）法SH→TH→SM→TM→SL→TL。滴加溶液至钢管口平满，注意滴加溶液间隔不可过长，因溶液的扩散时间不同影响测定结果。
6.4.3 每份滴加的溶液为1单位，但双碟数每次不超过5个，如1份溶液滴加双碟数目多，可分次滴加。每种溶液各用1支毛细滴管。
6.4.4 滴加完毕，用陶瓦盖覆盖双碟，平稳置于双碟托盘内，双碟叠放不可超过3个，避免受热不均，影响抑菌圈大小，以水平位置平稳移入培养箱中间位置，35-37℃或30-32℃培养至所需时间。
6.5 抑菌圈测量
6.5.1 将培养妥的双碟取出，打开陶瓦盖，将钢管倒入盛有1：1000新洁尔灭溶液或其它消毒液内，换以玻璃盖，按样品号排妥；测量抑菌圈前应检查抑菌是否圆整，如有破圈或圈不圆整应将该碟弃之，切忌主观挑选抑菌圈及双碟，使结果造成偏倚。
6.5.2 测量换菌圈可用抑菌圈自动测量分析系统，也可用游标卡尺；使用游标卡尺测量时，眼睛视线应与读数刻度垂直，用游标卡尺的尖端与抑菌圈直径的切点成垂直方向测量。
7 记录与计算
7.1 试验记录应包括抗生素的品种、剂型、标示量、生产厂、批号、检验目的、检验依据、检验日期、温度、湿度，标准品与供试品的称量、稀释步骤与核对人，抑菌圈测量结果。当用游标卡尺测量抑菌圈直径时，应将测试数据以框图方式顺双碟数记录清。当用测量
仪测量面积或直径时，电脑测试、计算、统计分析的打印纸贴附于上。
7.2 计算
7.2.1 剂量法计算公式
T2+T1-S2-S1
P=log-1[————————×I]×100%
T2+S2-T1-S1
式中 P为供试品效价（相当于标示量或估计效价的百分数）； S2为标准品高浓度溶液所致抑菌圈直径（面积）的总和； S1为标准品低浓度溶液所致抑菌圈直径（面积）的总和； T2为供试品高浓度溶液所致抑菌圈直径（面积）的总和； T1为供试品低浓度溶液所致抑菌圈直径（面积）的总和；
I为高、低剂量之比的对数值，2：1时，I=0.301。4：1时，I=0.602。 举例 乳糖酸红霉素效价测定结果计算（见表1）。 估计效价（Ar）=6.03u/mg 剂距（I）=0.301
15532+12528-15491-12472
P=log[——————————————×0.301]×100%=101.12%
15491+15532-12472-12528
-1
效价（Pr）=P×Ar=603 u/mg×101.12%=609.75 u/mg
表1 抑菌圈面积结果
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 ∑ 8 结果判断
8.1 可靠性测验 该法的设计是根据量反应平行线原理，在实验所用的剂量范围内，对数剂量和反应呈直线关系，供试品和标准品的直线应平行。当用卡尺测量后的结果，将参数输入电脑，有专用(2.2)法和(3.3)法的软件程序进行统计学处理。用测量仪测量抑菌圈时，测量与统计学处理一次完成，统计学分析按药典生物检定统计规定进行F的显著性测验。(2.2) 此法要求直线回归、剂间P＜0.01，偏离平行P＞0.05；（3.3）法除(2.2)法的规定外,尚考查二次曲线和反二次曲线P＞0.05，试验结果认为可靠，方可进行效价和可信限率计算。
8.2 可信限率 考核实验的精密度，除兽药典各论另有规定外，本法的可信限率杆菌不得超过7%，球菌不得超过8%。
上述各项规定都能符合者，试验结果成立。
8.3 实验计算所得效价低于估计效价的90%或高于估计效价的110%，则检验结果仅作为初试，应调整供试品估计效价，予以重试。
8.4 原料药效价测定一般需双份样品，平行实验以便核对。对不符合规定的样品应至少有2次符合规定的结果，才能发出报告。
8.5 效价结果的数字按药学规定取舍小数位。
9 供试品测定操作要点
SH 1571 1481 1523 1518 1573 1546 1495 1530 1605 1649 15491 SL 1276 1199 1302 1214 1237 1219 1260 1237 1256 1272 12472 TH 1581 1523 1497 1533 1543 1580 1526 1548 1593 1608 15532 TL 1268 1173 1263 1226 1268 1224 1240 1263 1293 1320 12528
9.1 原料药品 是指大包装或半成品干燥粉末或结晶性粉末，不含辅料，一般测定纯度（u/mg或μg/mg），根据抗生素品种及厂方提供的效价进行估计单位，称取样品，估计效价尽量接近真实效价，如估计效价与真实效价距离较远时，可先作初测试验，然后按初测结果来估计效价，再作精密测定。
原料药品一般皆以干燥品或无水物计算效价，先测其含水的供试品效价，再根据供试品的水分或干燥失重的结果折算成干燥品或无水物的效价。
湿品效价（u/mg）
干燥品效价（u/mg）= ——————————
1-供试品干燥失重量%
9.2 水针剂 水针剂系抗生素无菌水溶液，标示量以每亳升含效价单位数计，效价测定时启开安瓿或小瓶塞后，用干燥的标准吸管吸取一定量供试品，将吸管外壁用滤纸擦净，再弃去过多的供试品，沿着容量瓶口内壁缓缓放入已盛有一定溶剂的容量瓶内，以免抗生素结晶析出，振摇，继续加溶液至刻度，摇匀，再稀释至规定的浓度。