实验二 药物中残留有机溶剂的的气相色谱分析测定
——乙酸正丁酯中杂质的含量测定
一、目的要求
1.学习内标标准曲线法定量的基本原理和测定试样中杂质含量的方法。 2.复习并巩固气相色谱分析原理及其操作步骤。 3.掌握药物中常见有机残留溶剂的测定原理及其方法。
二、实验原理
对于试样中少量杂质的测定，或仅需要测定试样中某些组分时，可采用内标法定量。由实验二可知：当假定内标物的校正因子fs=1时，待测组分的含量可由下式求得。
wi?msfiAi×100％
m试样As从公式可知，若想求得待测组分的含量，需先求出待测组分的校正因子fi。
而内标标准曲线法，即配制一系列的标准溶液，测得相应的Ai/As，mi/ms。以Ai/As对mi/ms作标准曲线。这样就可以在无需预先测定fi的情况下，称取一定量的试样m由标准曲线求得mi/ms，再根据公式wi?求得待测组分的质量分数wi。
试样
和内标物ms，混合进样，根据Ai/As之值
msmi×100％
m试样ms三、仪器与试药
1.FL9500气相色谱仪
2.微量进样器（1 ?L，0.5 ?L， 5 ?L） 3.移液管（0.5 mL、1 mL、2 mL） 4.高纯氮、高纯氢、低噪声空气净化源
5.异丙醇(?=0.785 g/cm3)、正庚烷(?=0.68 g/cm3)、环己烷(?=0.779 g/cm3)、甲醇(?=0.7914 g/cm3)、乙酸乙酯(?=0.901 g/cm3)、乙酸正丁酯(?=0.8824 g/cm3)均为分析纯
6.标准溶液按下表配制，分别置于5支25 mL的容量瓶中，用乙酸正丁酯稀释，混匀备用。
编号 1 2 3 4 5 m正庚烷/g 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 m甲醇/g 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 m异丙醇/g 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 m环己烷/g 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 m乙酸乙酯/g 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 7.未知试样25 mL（含1.0 g正庚烷）。
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四、实验条件
1. 固定液：聚甲基硅烷（非极性）；色谱柱：毛细管0.32×30 mm/m 2. 柱温：70 oC；气化室（辅助I）温度：150 oC；检测器温度：150 oC 3. 载气：氮气； 检测器：氢火焰离子化检测器（FID） 4. 进样量：标准溶液1 ?L；未知试样0.5 ?L；纯物质：0.2 ?L。
五、实验内容及步骤
1. 根据实验条件，按仪器操作步骤将色谱仪调节至可进样状态，待仪器的电路和气路系统达到平衡，色谱工作站的基线平直时，即可进样。
2. 吸取各纯物质0.2 ?L进样，记录各纯物质的保留时间。
3. 吸取标准溶液1 ?L进样，记录各组分的保留时间和色谱峰面积。
4. 在同样条件下，吸取未知试液0.5 ?L进样，记录各组分的保留时间和色谱峰面积。
六、数据记录及处理
1. 记录纯物质的保留时间
保留时间（min） 甲醇 异丙醇 乙酸乙酯 正庚烷 环己烷 乙酸正丁酯 2. 记录标准溶液及未知试样各色谱图上各组分色谱峰面积
编号 1 2 3 4 5 未知 A甲醇（mV.s） A异丙醇（mV.s） A乙酸乙酯（mV.s） A环己烷（mV.s） A正庚烷（mV.s） ３．以正庚烷为内标物质，计算mi/ms，Ai/As值
４．以Ai/As 对 mi/ms 作图（Origin软件），绘制各组分的标准曲线，得到线性回归方程和线性相关系数。 5. 根据未知试样Ai/As的值，由标准曲线计算出相应的mi/ms的值。 6. 计算未知试样中甲醇、异丙醇、乙酸乙酯、环己烷的质量分数。
七、实验注意事项
进样前一定要将微量注射器用相应试剂清洗干净，清洗干净的微量注射器应该专用，不能与准备进样别的试剂的微量注射器混用；
八、思考题
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1. 简要说出气相色谱的主要仪器部件，并画出其简易流程图。
2. 实验中是否需要严格控制进样量，实验条件若有变化是否会影响测定结果，为什么？ 3. 内标标准曲线法中，是否需要校正因子，为什么？
4. 根据纯物质的保留时间，确定各物质的沸点大小，并说明理由。
附录： FL9500气相色谱仪操作步骤
1 . 开N2钢瓶：1逆时针转动减压阀手柄至放松位置，此时减压阀处于关闭状态. 2逆时针打开钢瓶上的总阀门，并记录瓶中余气压力. 3顺时针旋紧减压阀，直至分压值达所需压力0.5 Mpa. 2. 接通电源，开净化器，三个全打开.
3. 调节毛细管柱前压(主机顶上表压力)为0.06 Mpa，开色谱仪上的两电源. 4. 设置参数，选择优化条件：1.柱温(柱箱键). 2. 汽化室(辅助I). 3. FID(检测器).
5. 待所设参数达到设置条件时(显示键查看)，开H2钢瓶. H2钢瓶的开法：1.逆时针转动减压阀手柄至放松位置. 2.逆时针打开钢瓶上的总阀门.
3.逆时针打开减压阀左边的小通道（使用阀）. 4. 顺时针旋紧减压阀直至分压值达所需压力0.2 Mpa. 6. 调色谱仪主板上H2表Ⅱ的压力为0.1 Mpa.
7. 开低噪声空气净化源， 调色谱仪主板上空气压力为0.03 Mpa.
8. 点火，若点火困难，可先调高氢气至0.15 Mpa，点火后调回至0.1 Mpa. 9. 打开电脑，点桌面上的FL9500色谱工作站图标进入系统，点通道1或2。
10. 待基线平直后，即可进样，进样后按工作站的通道A或B上的按时器或在工作界面上点击开始按钮即
进行进样分析。（注意：进样前一定要将微量注射器用相应试剂清洗干净，清洗干净的微量注射器应该专用，不能与准备进样别的试剂的微量注射器混用）.
11. 采样结束后点停止，若想处理色谱图点进样后处理，点转入再处理，打印结果，待所有样品采样结束
后，关色谱程序窗，关电脑.
12. 关H2，先关总阀(顺)—减压阀(逆)—使用阀(顺)—稳压阀. 13. 关低噪声空气净化源.
14. 设置气化室，FID，柱箱温度为50℃，到达后关主机.
15. 关N2， 先关总阀(顺)—减压阀(逆)—稳压阀，关净化器，随后关掉一切电源.
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