基因工程的基本操作程序
1.基因表达载体的构建是基因工程的核心，一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有启动子、终止子以及标记基因等。
2．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法。 3．将目的基因导入动物细胞常用显微注射技术，导入微生物细胞常用感受态细胞法(Ca2＋处理法)。
4．检测目的基因是否导入受体细胞常用DNA分子杂交技术；检测是否转录，常用分子杂交技术；检测是否翻译，常用抗原一抗体杂交技术。
一、基因工程的基本操作程序
目的基因的获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定。
二、目的基因的获取 1．从基因文库中获取
(1)基因文库的含义：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。
(2)基因文库的种类：
①基因组文库：包含一种生物的所有基因。 ②部分基因文库：包含一种生物的一部分基因。 2．利用PCR技术扩增 (1)原理：DNA双链复制。 (2)过程：
3．人工合成
(1)条件：基因比较小，核苷酸序列又已知。 (2)方法：通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。 三、基因表达载体的构建 1．构建基因表达载体的目的
(1)使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代。 (2)使目的基因能够表达和发挥作用。 2．基因表达载体的组成[填图]
四、将目的基因导入受体细胞 1．导入植物细胞 (1)农杆菌转化法：
①原理：农杆菌Ti质粒上的T-DNA可整合到受体细胞的染色体DNA上。 ②适用范围：主要适用于双子叶植物和裸子植物。 (2)基因枪法：常用于单子叶植物。
(3)花粉管通道法：目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 2．导入动物细胞
(1)常用方法：显微注射技术。 (2)受体细胞：受精卵。 3．导入微生物细胞
(1)方法：感受态细胞法，即用Ca处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态(这种细胞称为感受态细胞)。
(2)常用原核生物作为受体细胞的原因：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。 五、目的基因的检测与鉴定 1．分子水平的检测[连线]
2＋
2．个体水平的鉴定 (1)抗虫或抗病的接种实验。
(2)对基因工程产品与天然产品的功能进行活性比较。
1．基因工程主要操作步骤的顺序是( )
①基因表达载体的构建 ②将目的基因导入受体细胞 ③目的基因的检测与鉴定 ④目的基因的获取
A．③②④① B．②④①③ C．④①②③ D．③④①②
解析：选C 基因工程的主要操作步骤顺序是：目的基因的获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测和鉴定。
2．基因工程的核心是( ) A．目的基因的获取 B．基因表达载体的构建 C．将目的基因导入受体细胞 D．目的基因的检测与鉴定
解析：选B 基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤。
3．如图为基因表达载体的模式图，下列有关基因工程中载体的说法错误的是( )
A．基因表达载体的构建是在生物体外完成的 B．任何基因表达载体的构建都是一样的，没有差别
C．图中启动子位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位
D．抗生素抗性基因的作用是作为标记基因，用于鉴别受体细胞中是否导入了目的基因 解析：选B 由于受体细胞有植物、动物和微生物之分，以及目的基因导入受体细胞的方式不同，所以基因表达载体的构建也会有所差别，不可能千篇一律。
4．下列关于目的基因导入受体细胞的描述，错误的是( ) A．基因枪法导入植物体细胞的方法比较经济和有效 B．显微注射技术是转基因动物中采用最多的方法
C．大肠杆菌最常用的转化方法，是使细胞的生理状态发生改变 D．农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞最常用的方法
解析：选A 不同受体细胞导入目的基因的方法不同，每种方法都有利弊。目的基因导入植物细胞常用的方法是农杆菌转化法，该方法比较经济和有效；目的基因导入动物细胞常用的方法是显微注射法；目的基因导入大肠杆菌细胞最常用的转化方法就是用钙离子处理细胞，使细胞的生理状态发生改变，完成转化。