天然药物化学 验 与 指
编者：杨长水 于红艳
实 导
扬州大学医学院药学系
目 录
实验室安全守则……………………………………………………………………1 实验一 掌叶大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定……………………………3 实验二 槐花米中芦丁的提取、分离和鉴定………………………………………8 实验三 人参皂苷的提取、分离与结构鉴定……………………………………11 实验四 粉防己生物碱的提取、分离与结构鉴定………………………………14 附录………………………………………………………………………………18 1. 常用有机溶剂及有关数据表…………………………………………………18 2. 常用层析材料及有关数据表……………………………………………………21
实验室安全守则
天然药物化学实验是天然药物化学课程的重要组成部分，是更好掌握天然药物有效成分提取、分离和检验的基本操作技能，是提高学生分析和解决问题能力，使同学进一步理论联系实际，养成严密科学态度和良好工作作风必不可少的教学环节，为此，提出如下实验须知：
1. 遵守实验制度、维护实验室安全。不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、漏电等事故的发生。若发生事故应立即报告指导教师。
2. 实验前做好预习，明确实验内容，了解实验的基本原理和方法，安排好当天的计划，争取准时结束，实验时应养成及时记录的习惯，凡是观察到的现象以及有关的重量、体积、温度或其他数据，应立即如实记录。实验完毕后认真总结，写好报告，提取纯化所得单体产物包好，贴上标签（写下日期、样品名称、纯度、m.p.、b.p.、TLC、重量）交给老师。
3. 实验室中保持安静，不许大声喧哗，不许抽烟，不迟到，不随便离开。实验台面应保持清洁，使用过的仪器及时清洗干净后，存放在指定位置。废弃的固体和滤纸等丢入废物缸内，绝不能丢入水槽和窗外，以免堵塞和影响环境卫生。
4. 公用仪器及药品用完后立即归还原处，破损仪器应填写破损报告单、注明原因。将实验台、地面打扫干净，倒清废物缸，检查水、电（是否关闭水龙头，拔下电插头）。关闭门窗。
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实验一 掌叶大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
【简介】
药典收载的正品大黄为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L.）、唐古特大黄（R.tanguticum Maxim.ex Balf.）及药用大黄（R. officinale Baill.）的根及根茎。大黄始载于《本经》，列为下品。历代本草均有记载。大黄性寒、味苦，具泻热毒、破积滞、行淤血等功效。多用于便秘、谵语发狂、痢疾初起、血热吐衄、淤血经闭等。现代药理研究发现，大黄具泻下、抗菌、降血压、收缩血管、止血、降低血管脆性的作用，而且对小鼠的黑色素瘤、乳腺瘤及腹水型艾氏癌有抑制作用。大黄中的主要成分为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。 OHOOH大黄酸 R1 = H R2 = COOH 大黄素 R1 = CH3 R2 = OH芦荟大黄素 R1 = H R2 = CH2OH
大黄素甲醚 R1 = CH3 R2 = OCH3R1R2 【目的】
O大黄酚 R1 = CH3 R2 = H1. 熟悉蒽醌类成分的提取分离方法。
2. 掌握pH梯度提取法的原理和操作技术。 3. 学习用硅胶柱色谱法分离精制大黄素。 4. 学习羟基蒽醌类化合物的鉴定方法。
【基本原理】（大黄中主要羟基蒽醌类化合物的理化性质）
1. 大黄酚（Chrysophanol）：金黄色片状结晶，mp196~197 ℃（乙醇或苯），能升华。可溶于丙酮、乙酸、氯仿、甲醇、乙醇、热苯和氢氧化钠水溶液，微溶于石油醚、乙醚，不溶于水、碳酸氢钠和碳酸钠水溶液。
UV（MeOH） λ max 225,258,279,288,432nm IR（KBr）νmax 1679,1622,1605,1560,1470cm-1
2. 大黄素甲醚 （Physcion）：砖红色针状结晶，mp206 ℃（苯），能升华，溶解性能与大黄酚相似。
UV λmax 226,255,267,288,440nm IR（KBr）νmax 1625,1688,1570,3400 cm-1
3. 大黄素 （Emodin）：橙黄色针状结晶，mp256~257 ℃（乙醇或冰醋酸），
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能升华。其溶解度如下：四氯化碳0.01%、氯仿0.071%、二硫化碳0.009%、乙醚0.14%、苯0.041%、易溶于乙醇，可溶于稀氨水、碳酸钠水溶液，几乎不溶于水。
UV λmax 300,269,289, 441nm
IR（KBr）νmax 3464,1627cm-1
4. 芦荟大黄素 （Aloe-emodin）：橙黄色针状结晶，mp223~224 ℃（甲苯），能升华。可溶于乙醚、苯、热乙醇、稀氨水、碳酸钠和氢氧化钠水溶液。
UV λmax 300,259,289,433nm IR（KBr）νmax 3430,1628cm-l
5. 大黄酸（Rhein）：黄色针状结晶，mp321~322 ℃（升华），不溶于水，能溶于吡啶、碳酸氢钠水溶液，微溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚。
UV（MeOH） λ max 229,258,435nm IR（KBr）νmax 1701,1637cm-1
羟基蒽醌苷类（表1）：
表1 大黄中羟基蒽醌类成分
中文名
大黄素甲醚葡萄糖苷 芦荟大黄素甲醚葡萄糖苷
大黄素葡萄糖苷 大黄酸葡萄糖苷 大黄素-1-O-β-D-葡萄糖
芦荟大黄素-ω-C-β-D-葡萄糖
ω-C-β-D- aloe-emodin
glucopyranosyl
187~189
Emodinmonoglucoside Rhein-8-monoglucoside 1-O-β-D- glucopyranosyl emodin
浅黄色针状结晶
266~270 239~241 190~191
英文名
Physcionmonoglucoside Aloe-emodinmonoglucoside
晶
性状
黄色针状结
mp （ ℃）
235 239
【主要仪器及试剂】
仪器：天平，250mL烧杯，500mL烧杯，250mL分液漏斗，索氏提取器，布氏漏斗，100mL
量筒，250mL圆底烧杯，真空冷凝管，牛角管，250mL锥形瓶，pH试纸。
试剂：乙醚，20%H2SO4溶液，盐酸，5%碳酸氢钠溶液，5%碳酸钠溶液，0.25%氢氧化钠溶液，5%氢氧化钠溶液，石油醚（沸程60~90℃）-乙酸乙酯（7:3），石油醚（沸程60~90℃）-乙酸乙酯（15:1）。
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