实训一 MS固体培养基的配制、灭菌及保存
一、实训目的
掌握MS固体培养基的配制方法。 二、设备仪器
电子分析天平、托盘天平、灭菌器、电炉等。
以下按小组为单位，烧杯、棕色细口瓶<1000ml 1个、500ml 1个、100ml 1个）、量筒100ml1个、移液管0.1、0.5、2、10ml各1支、吸气球1个、定容瓶1000ml 1支、小烧杯1支、培养瓶及瓶盖10个、精密pH试纸等。b5E2RGbCAP 三、药品试剂
MS培养基所需各种物质(见配方>，琼脂，蔗糖(或绵白糖>，0.1M NaOH溶液，0.1M HCl溶液。1mol／L NaOH的配制方法是称4gNaOH，溶解后加入蒸馏水，定容到100ml即可。1mol HCl的配制方法是量取，12mol HCl 8.4ml，加水定容至100m1。 p1EanqFDPw 四、母液的配制
1．大量元素母液在分析天平上按下表分别称取大量元素药品，置于三角瓶中，分别加蒸馏水100ml左右于三角瓶中，再放到磁力搅拌器<或电炉）搅拌溶解，然后一一倒入1000ml的容量瓶中<注意CaCl2要后加，最后加蒸馏水定容至刻度，此为10倍液的大量元素母液）。DXDiTa9E3d 2．微量元素母液在分析天平上按表分别称取微量元素药品,按大量元素母液配制方法，配成100倍液的微量元素母液。RTCrpUDGiT 3．铁盐母液在分析天平上按表称取FeSO4.7H2 O和Na2 －EDTA 药品，配成100倍液的铁盐母液。5PCzVD7HxA 4．有机物母液：用分析天平按表分别称取甘氨酸、VB1 、Vpp、VB6、肌醇，配成100倍有机物质母液。jLBHrnAILg 表1 ＭＳ培养基母液的配制
母液名称 原配方量 扩大倍数 (mg> 1650 10 大量元素母液 NH4NO3 KNO3 1900 10 MgSO4 ·7H2O 370 10 KH2PO4 170 10 CaCl·2H2O 440 10 MnSO4·H2O 22.3 100 ZnSO4·7H2O 8.6 100 CoCl·6H2O 0.025 100 5H2O 0.025 100 微量元素母液 CuSO4·H3BO3 6.2 100 Na2MO4·2H2O 0.25 100 KI 0.83 100 Na2-EDTA 37.3 100 铁盐母液 FeSO4·7H2O 27.8 100 药品名称 称取量 (mg> 16500 19000 3700 1700 4400 2230 860 2.5 2.5 620 25 83 932.5 695 母液 体积 (ml> 1000 移取量 (ml> 100 1000 10 250 10 1 / 4
有机物母液 盐酸吡哆醇 盐酸硫胺素 肌醇 甘氨酸 烟酸(Vpp> 0.5 0.1 100 2 0.5 100 100 100 100 100 25 5 5000 100 25 500量筒定容 10 实验三还需要 NAA和6-BA，请准备！！！ 五、MS培养基的合成
1. 加热溶解先在1L的烧杯中加500ml蒸馏水，然后加入琼脂丝8g，加热并不断搅拌，直至琼脂完全溶化，透澈见底为止；再放入蔗糖22g，容解后，用量筒取大量元素母液100ml、用专用的移液管分别移取微量元素母液10ml ，铁盐母液10ml ，有机物母液10ml 入烧杯中。xHAQX74J0X 2. 定容各种物质完全溶解，充分混合均匀后，加蒸馏水定容至1000ml。 3. 调整pH值用0.1N的NaOH或0.1N HCl调整pH值为6.0。 六、培养基的分装
搅拌均匀后，分装到培养瓶中，每瓶约25-30 ml，即1升培养基分装20-30瓶，最后封口，写上标号。LDAYtRyKfE 七、培养基灭菌
按灭菌器使用方法对培养基灭菌，将下次实训中要使用的接种工具、器皿、水、物品等一起进行灭菌），高压保持20分钟。灭完后取出培养基等物品放在平台上冷凝。
Zzz6ZB2Ltk 八、实训报告
1. 写出高压灭菌方法及注意事项。
2. MS固体培养基的配制过程。
实训二外植体的选择与消毒、接种
一、实训目的
通过实践熟练掌握茎段、叶片作为外植体的选材，消毒，接种等技能。 二、实训时期
春、秋两季均可 三、实训材料
植物材料：红叶石楠嫩茎、叶片。
仪器与用具：超净工作台、光照培养架、烧杯、纱布、玻棒、培养皿、剪刀、镊子、酒精灯、记号笔。
试剂药品：75%酒精、0.1%升汞、洗衣粉、甲醛、高锰酸钾、灭菌水、灭菌棉球、灭菌滤纸等。 四、实训内容
2 / 4
外植体的选取、消毒和接种 五、实训步骤
1．外植体选取、消毒和接种
<1）选取无病无虫害健康幼嫩枝条，剪成3-4cm的大茎段<30个），剪去叶片，只留叶柄，流水冲洗干净，在超净台上用75%酒精浸泡半分钟，用无菌水冲洗1－2次；再用0.1%升汞浸泡5-8分钟，最后用无菌水冲洗5-8次，无菌滤纸吸干备用。dvzfvkwMI1 <2）将剪下的幼嫩叶片按<1）中的方法进行清洗和消毒灭菌。 2．接种过程 <培养基配制略）
<1）操作规程：接种前4h接种室灭菌 →接种前20min打开紫外灯→接种员洗手，在缓冲间换鞋、穿好实验服→关紫外灯，开日光灯及风机，擦双手及台面→擦拭接种工具并反复灼烧，烘烤培养皿。rqyn14ZNXI <2）在无菌条件下<酒精灯火焰10cm范围内），将红叶石楠枝条切成含一个茎节的小段，茎节上留1/3茎节长，节下留2/3 茎节长。每培养瓶接入1-2枚茎段。接种完，清理台面并标识。EmxvxOtOco (3> 在无菌条件下，将红叶石楠叶片切成0.5×0.5cm叶块，叶背向下<培养基）、叶面向上，每培养瓶接入3-4块。接种完，清理台面并标识。SixE2yXPq5 3．培养
接种好的培养瓶放培养架上在人工控制条件下进行培养。 六、实训思考和作业
外植体消毒时，会出现什么问题？你怎么处理？
实训三红叶石楠的初代培养
一、实训目的
1. 掌握红叶石楠初代培养基的选择与制备方法
2. 掌握红叶石楠初代培养时的外植体选择、消毒与接种方法，并学会观察培养材料的分化与生长过程。 二、 设备仪器、器具
电子分析天平、托盘天平、灭菌器、电炉、超净工作台、光照培养架、接种工具等。 烧杯、棕色细口瓶<1000ml 1个、500ml 1个、100ml 1个）、大小量筒各1个、移液管0.1、0.5、2、10ml各1支、吸气球1个、定容瓶1000ml、小烧杯、培养瓶、等。
6ewMyirQFL 三、 药品试剂
诱导培养基：MS+BA1.0mg/L+ NAA0.3mg/L；培养基中添加蔗糖30g/L、琼脂7g/L，pH5.8，无菌水、75%酒精、0.1%升汞等。kavU42VRUs 四、实训步骤
1. 诱导培养基的配制、灭菌及保存
3 / 4