植物组织培养
一、实验目的
1、掌握植物细胞无菌培养技术。
2、了解不同激素对细胞的不同诱导作用。
二、实验原理
植物组织培养是20世纪60年代以来植物细胞生物学中发展起来的一项生物技术。它是借用无菌操作方法，培养植物的离体器官，组织或细胞，使其在人工合成的培养基上，通过细胞的分裂、增殖、分化、发育，最终长成完整的再生植株。
植物组织培养技术的研究，不仅具有重大的理论意义，而且在生产实践中也已显示了广阔的应用前景。组织分化与形态建成问题，快速繁殖与去除病毒，花药培养与单倍体育种，幼胚培养与试管受精，抗体突变体的筛选于体细胞无体系变异，悬浮细胞培养与次生物质生产以及超低温种质保存等方面的深入研究与实际应用，都必须借助植物组织培养技术的基本程序和方法，深刻理解植物细胞的全能性。
三、实验用品
1、材料
半夏无菌苗。 2、仪器
卧式灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养箱或培养室。 3、用具
镊子、刀、牛皮纸、marker笔、棉线。 4、器皿
试剂瓶(50、100、1000ml)、三角瓶(100ml)、刻度吸管(0.5、1、5、10ml)、培养皿(直径9～11cm)。 1、 药品与试剂
1).药品(见下表) 2).70％酒精
四、实验方法
1、培养基的配制
配制培养基前先要配制母液。母液分大量元素、微量元素、铁盐及有机物质四类。(各类成分浓度、用量详见下表)。
表1 MS培养基母液配制 (单位：mg)
类 别 大 量 KNO3 NH4NO3 成分 规定量 1900 1650 称取量 19000 16500 母液体积(ml) 扩大倍数 配1升培养基 的吸取量(ml) 100 1000 10
元 素 MgSO4·7H2O KH2PO4 CaCl2·2H2O MgSO4·4H2O ZnSO4·7H2O H3BO3 KI Na2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O Na2-EDTA FeSO4·7H2O 甘氨酸 盐酸硫胺素 盐酸吡哆素 烟酸 肌醇 370 170 440 22.30 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025 0.025 37.25 27.85 2.0 0.4 0.5 0.5 100 3700 1700 4400 2230 860 620 83 25 2.5 2.5 3725 2785 100 20 25 25 5000 500 100 10 1000 100 10 1000 100 10 微 量 元 素 铁 盐 有 机 物 质 1).大量元素母液(10倍液)
分别称取10倍用量的各种大量无机盐，依次溶解于大约800ml热的(60～80℃)蒸馏水中。一种成分完全溶解后再加入下一种，最后加水定容至1000ml后装入试剂瓶中，冰箱内贮存备用。 2).微量元素母液(100倍液)
分别称取100倍用量的微量无机盐，依次溶解于800ml重蒸水中，加水定容至1000ml。 3).铁盐母液(100倍液)
称取100倍用量的Na2-EDTA(乙二胺四乙酸钠)和FeSO4·7H2O溶于800ml重蒸水中，最后定容到1000ml。
4).有机物质母液(100倍液)
分别称取50倍用量的各种有机物质，依次溶解于400ml重蒸水中，定容至1000ml，装入棕色试剂瓶中，贮存冰箱备用。
除了上述四种母液外，培养基中经常附加的各种生长素和细胞分裂素也要配成母液贮存，临用时按浓度定量吸取加入。 5).生长素
如2，4－D、IAA、NAA等。准确称取20mg，先用2ml 95％乙醇溶解，然后加水，定容至20ml，浓度为1mg/ml，再放置冰箱内贮存备用。 6).细胞分裂素
如激动素(Kt)、6-卞基嘌呤(6-BA)。准确称取20mg，先用2ml的1mol/L HCl或NaOH溶解，然后加水，定容至20ml，浓度为1mg