文件类型：操作指导书 第01版第0次修改 文件名称：培养基（含测试试剂）质量控制规程 文件编码：WHHDSPJT/QM03-506D-00
培养基（含测试试剂）质量控制规程
一、培养基制备要求
培养基的一般性状：液体培养基应透明、清亮，颜色符合要求。固体培养基应表面湿润但无水汽、平整光滑，厚薄均匀，一般厚度在3mm（M-H平板厚度不得<4mm）。斜面的长度不得超过试管长度的2/3)。PH值应在规定值±0.2的范围内。
培养基制备的质量将直接影响微生物生长。因为各种微生物对其营养要求不完全相同，培养目的的不同，各种培养基制备要求如下：
1. 根据培养基配方的成分按量称取，然后溶于蒸馏水中，在使用前对应用的试剂药品应进行质量检验。
2. PH测定及调节：PH测定要在培养基冷至室温时进行，因在热或冷的情况下，其PH有一定差异，当测定好时，按计算量加入碱或酸混匀后，应再测试一次。培养基PH值一定要准确，否则会影响微生物的生长或影响结果的观察。但需注意因高压灭菌可影响一些培养基的PH降低或升高，故不宜灭菌压力过高或次数太多，以免影响培养基的质量，指示剂、去氧胆酸钠、琼脂等一般在调完PH后再加入。
3. 培养基需保持澄清，便于观察细菌的生长情况，培养基加热煮沸后，可用脱脂棉花或绒布过滤，以除去沉淀物，必要时可用鸡蛋白澄清处理，所用琼脂条要预先洗净凉干后使用，避免因琼脂含杂质而影响透明度。
4. 盛装培养基不宜用铁、铜等容器，使用洗净的中性硬质玻璃容器为好。
5. 培养基的灭菌既要达到完全灭菌目的，又要注意不因加热而降
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低其营养价值，一般121℃15min即可，如为含有不耐高热物质的培养基如糖类、血清、明胶等，则应采用低温灭菌或间歇法灭菌，一些不能加热的试剂如亚碲酸钾、卵黄、TTC、抗菌素等，待基础琼脂高压灭菌后凉至50℃左右再加入。
6. 每批培养基制备好后，应做无菌生长试验及所检菌株生长试验。如果是生化培养基，使用标准菌株接种培养，观察生化反应结果，应呈正常反应，培养基不应贮存过久，必要时可置4℃冰箱存放。
7. 目前各种干燥培养基较多，每批需用标准菌株进行生长试验或生化反应观察，各种培养基用相应菌株生长试验良好后方可应用，新购进的或存放过久的干燥培养基，在配制时也应测PH，使用时需根据产品说明书用量和方法进行。
8. 每批制备的培养基所用化学试剂、灭菌情况及菌株生长试验结果、制作人员等应做好记录，以备查询。 二、培养基的质量控制
培养基的质量控制主要包括三方面的内容：pH测试、无菌试验以及已知菌生长试验。如果使用商品化脱水培养基，严格按照说明操作，一般不必再进行pH测试。如果使用基础物质进行培养基制备，在培养基冷却后须进行pH测试。如果pH测得值与预期值相差0.2单位，则需要酸碱调节；无菌试验一般为随机抽样3-5％，在35℃条件下培养48h。如果抽样中每个培养基上出现2个以上菌落，证明本批培养基已被污染；已知菌生长试验的前提条件是实验室有足够的已知菌储备，其中包括标准菌株(如ATCC或NCTC标准菌株)及经过准确鉴定的临床分离菌。如果条件允许，提倡使用标准菌株。有关常用培养基的已知菌生长试验见表1。
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表1 常用培养基已知菌生长试验 培养基 孵育条件 已知菌株(ATCC) 预期结果 血琼脂 需氧或 化脓性链球菌19615 生长并产生a-溶血 C02，24h 肺炎链球菌6305 生长并产生β-溶血 大肠埃希菌25922 生长 巧克力琼脂 CO2，24-48h 淋病奈瑟菌43069 生长 流感嗜血杆菌10211 生长 麦康凯琼脂 需氧，24h 大肠埃希菌25922 生长，粉红色菌落 (不含结晶紫) 奇异变形杆菌12453 生长，无色菌落，迁徙现象受抑制 鼠伤寒沙门菌14028 生长，无色菌落 粪肠球菌29212 生长 金黄色葡萄球菌25923 生长，粉红色菌落 大肠埃希菌25922 生长，粉红色菌落 麦康凯琼脂 需氧，24h 奇异变形杆菌12453 生长，无色菌落，迁徙现象受抑制 (含结晶紫) 鼠伤寒沙门菌14028 生长，无色菌落 粪肠球菌29212 抑制(部分或完全) 编制人：王飞 批准人：戴春阳 第 3 页 共9页 文件类型：操作指导书 第01版第0次修改 文件名称：培养基（含测试试剂）质量控制规程 文件编码：WHHDSPJT/QM03-506D-00 金黄色葡萄球菌25923 抑制(部分或完全) 鼠伤寒沙门菌14028 生长 福氏志贺菌12022 生长
SS琼脂 需氧，24h 粪肠球菌29212 抑制(部分或完全) 大肠埃希菌25922 抑制(部分或完全) 大肠埃希菌25922 生长 营养肉汤 需氧，24-48h 金黄色葡萄球菌25923 生长 (无添加物)
1、无菌试验 新制备的培养基要按批号随机抽取一定数量的标本作无菌试验。无细菌生长结果合格，有细菌生长，说明培养基已受杂菌污染，除了寻找原因外，应不再使用。
对于分装后进行灭菌的培养基，一般随机抽取5%~10%，置35℃卵育24h。对无菌手续分装的培养基，则应对全部培养基35℃卵育24h。对选择性培养基，应取部分培养基加入10~20倍无抑制性肉汤培养基如TSB，稀释抑制物质，置35℃卵育24h。
2、细菌生长试验 要用已知标准菌株按照NCCLS推荐的方法测定培养基性能是否符合要求。 保存
? 避光 。 ? 避热。
? 存放阴凉处，其保存期限与所用储存的容器类型有关。 ? 常用的保存期为： 编制人：王飞 批准人：戴春阳 第 4 页 共9页
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? ①用脱脂棉堵塞的试管，1周； ? ②用软木塞堵的试管，2周； ? ③有旋盖的容器，3周；
? ④平皿培养基（放在密封的塑料袋中），4℃1周； ? ⑤平皿培养基，当天。
表2 5种常用培养基的质量鉴定培养基名称血平板质控菌株金黄色葡萄球菌化脓性链球菌肺炎链球菌大肠埃希菌流感嗜血标菌脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌鼠伤寒沙门菌福氏志贺菌粪肠球菌大肠埃希菌霍乱弧菌副溶血弧菌大肠埃希菌福氏志贺菌卵育时间 24h 巧克力平板ATCC2592319615630525922102111309043096140281202225912259229459178022592212022鉴定标准中度到大量生长生长，溶血生长，溶血生长生长生长生长生长，无色菌落，有或无黑心生长，无色菌落全部抑制部分或全部抑制生长，黄色菌落生长，蓝色菌落部分或全部抑制中度到大量生长预期结果 传代生长 传代生长 传代受抑制 生长，无色到琥珀色菌落 （部分） 生长，蓝黑色菌落 SS平板TCBS平板营养琼脂平板培养基 肉汤 空气 需氧 质控菌株（ATCC号） 鼠伤寒沙菌（14028） 宋内氏志贺菌（9290） 大肠埃希氏菌（25922） EMB 需氧 24h 鼠伤寒沙菌（14028） 粪肠球菌（9290） 大肠埃希氏菌（25922） 编制人：王飞 批准人：戴春阳 第 5 页 共9页