（五）、激动剂和抑制剂影响酶活性的实验观察 1. 取试管4支编号，按下操作：
表4 激动剂和抑制剂影响酶活性的实验观察
pH 6.8 缓冲液
液
1 2 3 4
2. 将上述各管放入37℃水浴中保温10分钟，然后每管加入碘液1滴，混匀后观各管颜色的区别，并说明激动剂和抑制剂对酶促反应的影响。
注意事项
1.反应试管应清洗干净，不同酶液、试剂及其滴管不能交叉混用； 2.使用混合唾液，或通过预试选出合适的唾液稀释度，效果更为显著。
思考题
1.简述温度、pH、激动剂及抑制剂、酶浓度等因素影响对淀粉酶活性的影响。 2.简述淀粉酶活性测定的原理及注意事项。
1％淀粉溶
蒸馏水
管号
0.9％NaCl
1％ CuSO4 － － 10滴 －
1％Na2SO4 － － － 10滴
稀释唾液
20滴 20滴 20滴 20滴
10滴 10滴 10滴 10滴
10滴 － － －
－ 10滴 － －
5滴 5滴 5滴 5滴
实验十五 维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）
一、目的要求
（1）学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法。 （2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
二、实验原理
维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有化学致癌物的阻断作用。 维生素C是具有L系糖型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。
维生素C具有很强的还原性。它可分为还原性和脱氢型。金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。根据它具有还原性质可测定其金属含量。
还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。因此，当用此染料滴定含有维生素C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化前，则滴下的染料立即被还原成无色。一旦溶液中的维生素C已全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以，当溶液从无色变成微红色时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。如无其它杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含还原型抗坏血酸量成正比。
本法用于测定还原型抗坏血酸，总抗坏血酸的量常用2,4-二硝基苯肼法和荧光分光光度法测定。
OCHOHOHHOCOCCl+ONOHH+CCCH OH2ClOHCl色)2，6－二氯酚靛酚(红还原型抗坏血酸OCOOHHOCOCCOClNO(蓝色)Cl+OClNHOHCCH OH2还原型2，6－二氯酚靛酚(无色）氧化型脱氢抗坏血酸
三、实验器材.
锥形瓶（100ml），组织捣碎器，吸量管（10ml），漏斗，滤纸，微量滴定管（5ml），容量瓶（100ml，250ml）。 四、实验试剂
1、苹果、卷心菜等。
2、2%草酸溶液: 草酸2g溶于100ml蒸馏水中。 3、1%草酸溶液: 草酸1g溶于100ml蒸馏水中。
4、标准抗坏血酸溶液（1mg/ml）: 准确称取100mg纯抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于1%草酸溶液中，并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏。最好临用前配制。
5、0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液: 250mg 2,6-二氯酚靛酚溶于150ml含有52mg NaHCO3的热水中，冷却后加