选修一 第一部分 微生物的利用
第1课时 大肠杆菌的培养和分离
1．判断正误
(1)大肠杆菌是革兰氏阴性菌，对人无害。
(×)
(2)扩大培养大肠杆菌常用LB液体培养基。
(√)
(3)利用涂布分离法分离细菌时，需要先将培养的菌液进行梯度稀释。
(√)
(4)在“大肠杆菌的培养和分离”所用棉花为脱脂棉。
(×)
2．有关划线分离操作正确的是
( )
A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌
B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞 C．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可 D．最后将平板倒置，放入培养箱中培养
解析 考查划线分离操作。平板划线操作时要时刻注意两个问题：一是防止杂菌污染；二是要尽可能地将菌种分离。 答案 D
3．固体培养基经高压蒸汽灭菌后，待培养基冷却到60 ℃时，需搁置斜面(图甲)或倒平板(图乙)，请回答：
(1)如何确定制备的培养基灭菌是否合格？
___________________________________________________________________________________________________________________________________。
(2)在固体培养基凝固前搁置斜面的目的是什么？
____________________________________________________________。 (3)平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
__________________________________________________________________
_________________________________________________________________。
答案 (1)将未接种的培养基在适宜的温度下放置一定时间，观察培养基上是否有菌产生。 (2)增大接种面积 (3)平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 4．下表是用于分离纯化大肠杆菌的LB固体培养基的配方。请回答：
试剂 蛋白胨 酵母提取物 氯化钠 水 琼脂 用量 0.5 g 0.25 g 0.5 g 50 mL 1 g (1)上述培养基配方中充当氮源的成分主要是________。培养基配制完成以后，一般还要调节pH并对培养基进行________处理。
(2)分离纯化微生物最常使用的接种方法是________和________两种。在接
种过程中，接种环或玻璃刮刀的灭菌方法是
_________________________________________________________________。
(3)假设某同学发现培养基上细菌数目过多地连成一片，可能的原因是什么？
_________________________________________________________________。
答案 (1)蛋白胨 灭菌
(2)划线分离法 涂布分离法 明火灼烧
(3)菌液浓度过高；培养过程中被杂菌污染；利用接种环划线时，划下一个区域前没有对接种环进行灭菌处理
5．为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：
(1)该小组采用涂布分离法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是
_____________________；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布分离法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为________。 (2)该小组采用划线分离法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过________灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是________________________。
(3)示意图A和B中，________表示的是用涂布分离法接种培养后得到的结果。
(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中________的含量，同时可