β-环糊精包合挥发油和丹皮酚的工艺研究
谷雨1,3，潘书洋2，李超生3*，王晶3，于蔷蔷1，李喆4，华山4
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吉林农业大学，长春130118；吉林省食品药品检验所，长春130033；吉林省中医药科学院，长春130012；
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延边大学，延吉133000
摘 要：目的：研究β-环糊精包合挥发油和丹皮酚的最佳工艺条件。方法：以丹皮酚的包合率为指标，比较了饱和溶液法和研磨法的优劣，并采用四因素三水平的正交试验研究不同体积的水研磨，β-CD:丹皮酚:挥发油比例，研磨时间及无水乙醇冲洗量对丹皮酚包合率的影响。采用HPLC以丹皮酚含量为标准，测定包合物中丹皮酚的包合率。结果：β-CD：丹皮酚：挥发油=8:0.4:0.5，β-CD：水=1:3，研磨2小时，用5ml（加入0.5ml挥发油时）无水乙醇冲洗包合物。结论：本方法包合率高，适合大量提取，可用于工业化生产。
关键词：正交试验；β-环糊精；丹皮酚；挥发油；包合物
Study on β-cyclodextrin inclusion technology of volatile oil
and paeonol
GU Yu1,3，PAN Shu-yang2，LI Chao-sheng3，WANG Jing3，YU Qiang-qiang1，LI
Zhe4，HUA Shan4
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Jinlin Agricultural University,Changchun130118,China; 2 Jilin Institute for food and drug control,Changchun
130033; 3 Jilin Academy of Chinese Medical Sciences,Changchun 130012,China ; 4Yanbian
University,Yanji133000?
Abstract: Objective:To optimize the extracting technology of volatile oil and paeonol with β-cyclodextrin. Method: The rate of paeonol inclusion as index to study the advantages and disadvantages of two inclusion method, including saturated water solution method and rubbing method. In order to optimize the procedure, the effect of different lapping water volume, the proportion of β-CD, paeonol and volatile oil, lapping time and ethanol rinsing volume on the inclusion rate of paeonol were researched by orthogonal experiment design( 4 factors and 3 levels) . Using the content of paeonol as the standard, the paeonol inclusion rate was determined by HPLC. Results : The optimal inclusion procedure were as follows: the proportion of β- cyclodextrin and paeonol and Volatile Oil is 8:0.4:0.5, the proportion of β- cyclodextrinand water is 3: 1,the grinding time 2 hours, rinsing volume of dehydrate
基金项目：吉林省科技发展计划资助项目（No. 20110942）
*通讯作者:李超生 Tel: 0431- 86058641; E-mail: 2586984126@qq.com 第一作者：谷雨（1988-），女，在读硕士研究生，Tel：15144144305，E-mail: 452396797@qq.com,
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ethanol 5mL. Conclusion:The advantages of this method were high rate of inclusion, easy for magnanimous contraction and industrial production.
Key words：orthogonal test; β-cyclodextrin; paeonol; volatile oil; clathrate
益气补肾活血胶囊是治疗认知功能障碍的复方新药，处方是由“人参、石菖蒲、牡丹皮、 三七”等七味药组成。目前中医学者们将认知功能障碍归属于“健忘”、“善忘”的范畴。当前研究表明，认为轻度认知障碍与以往研究者对老年痴呆病因病机的认识相似，本病以脏腑虚衰、肾心亏虚为本，痰浊血瘀为标。有众多学者采用补肾益心、健脾益气、祛痰活血通络等方药及针刺治疗[1]，本处方也是针对这几方面进行治疗。根据文献报道[2-3]，石菖蒲中的挥发油和牡丹皮中的丹皮酚对认知功能障碍有治疗作用，是治疗的有效部位或有效成分。临床广泛用于癫病、痰厥、热病神昏、健忘、中风失语、耳鸣、老年性痴呆等疑难病症[4]。
石菖蒲挥发油和丹皮酚易挥发，常规的水煎工艺会导致其损失，为了更好地发挥其药效作用，本实验将处方中石菖蒲提取挥发油的工艺和牡丹皮提取丹皮酚的工艺进行优选，在此基础上，对所得到的石菖蒲挥发油和丹皮酚用环糊精包合，本实验在考察包合方法时，以挥发油的利用率为考察指标进行考察，在选择的饱和方法基础上，考虑处方中的丹皮酚也容易挥发，易造成药品质量的下降，所以把丹皮酚也与石菖蒲挥发油一起包合。因为挥发油的成分比较复杂，不容易检测，而丹皮酚的含量相对可控，所以在考察包合工艺时选用液相法测包合物中丹皮酚的含量，得到最佳的包合工艺，保证药材的合理应用和药品的质量。
1. 仪器与试药
1.1仪器 岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测器；CX-250 超声波清洁器（北京医疗设备二厂），FA604A型电子天平（上海精天电子仪器有限公司）；101A-1ET电热鼓风干燥箱。
1.2 试药 挥发油、丹皮酚（自制） β-环糊精：上海惠世生化试剂有限公司；无水乙醇：北京化工厂；丹皮酚对照品购自中国药品生物制品检定所，批号：110708-200505；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1包合方法的比较[5-6]：根据相关文献，对研磨法和水饱和溶液法两种包合方法进行比较。 2.1.1水饱和溶液法：称取β-环糊精6.0017g，置于磨口锥形瓶中，加蒸馏水制成饱和溶液利用磁力搅拌器搅拌，温度为35℃，用胶头滴管逐滴加入挥发油乙醇溶液1mL，搅拌1h后将所得产物冷藏过夜，次日抽滤，先用水洗涤3次，每次10mL，再用无水乙醇洗涤数次，
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多次少量共约7mL，放入40℃烘箱4h，即得终产物。
2.1.2研磨法：称β-环糊精6.0016g，置于研钵中，加入20mL蒸馏水，沿同一方向研磨均匀，使溶液成糊状，用胶头滴管逐滴加入挥发油乙醇溶液1mL，研磨1h，再置于冰箱冷藏过夜。次日抽滤，洗涤，先用30mL水多次少量冲洗，再用无水乙醇7mL冲洗，产物于烘箱40℃干燥4h，即得终产物。
2.1.3包合物中挥发油含油率及油利用率：按照药典挥发油测定法第二法测定，将所得干燥包合物精密称重，利用挥发油提取器提取5h，至油量不再增加时停止加热，充分静置读数，计算包合物中挥发油含油量及油利用率，公式如下：
包合物收得率（A）=包合物实际重量×（β-环糊精+投油量）-1×100% 挥发油利用率（B）=包合物中实际含油量×（投油量）-1×100% 包合物含油量（C）=包合物中实际含油量×（包合物量）-1×100% 结果：研磨法含油量为0.71mL 水饱和溶液法含油量为0.39mL
表1 包合方法比较
包合方法 饱和水溶液法 研磨法
A(%) 58.46 84.49
B(%) 39 71
C(%) 9.44 11.89
结果表明：研磨法制备石菖蒲挥发油β-环糊精包合物，其挥发油利用率比较高。故采用研磨法。 2.2 包合物的制备
按照正交试验表，称取规定量的β-环糊精,加规定体积水研磨，再加入规定量以无水乙醇稀释的挥发油（0.5mL）和丹皮酚（0.4g），共同研磨至规定时间，放入4℃冰箱冷藏过夜，次日过滤，加规定体积无水乙醇，洗涤包合物，包合物低温(40℃)烘干，放置备用。 2.3 丹皮酚含量测定 2.3.1 色谱分析条件
仪器型号：岛津LC-10AT高效液相色谱仪；色谱柱为DiamonsilC18 (250×4.5mm,5μm)；检测波长：274nm；流速：1.0mL∕min ；柱温为室温；流动相：50%甲醇。 2.3.2 对照品溶液的制备
精密称取丹皮酚对照品5.76mg，置于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。 2.3.3 供试品溶液的制备
取适量的包合物，置于50mL量瓶中，加入30mL甲醇超声30min，放冷，用甲醇稀释至刻度。过滤，收集续滤液，即得。
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