安徽医科大学第一附属医院检验科
作业指导书 文件编号: AYL-S7-337 版本:3.0 页码: 第1页 共4页 编写者：沈继录 文件发放范围：微生物组 审核者： 批准人： 生效日期：2012.1.1 文件年度审核 审核者： 日期： 审核者： 日期： 审核者： 日期： 审核者： 日期： 脓及伤口标本细菌学检验标 准操作规程
1.目的
规范脓及伤口标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 2．适用范围
脓液培养或涂片检查。 3.标本
3.1 标本类型 脓液。 3.2 标本采集。
3.2.1 开放性脓肿和脓性分泌物 用无菌盐水或75％酒精擦去表面渗出物，用拭子深入溃疡深处采集2支拭子，一支为涂片检查用，1支作培养用。
3.2.2 大面积烧伤的创面分泌物 用灭菌棉拭取多部位创面的脓液或分泌物，置灭菌试管内（注明采集部位）送检。
3.2.3 封闭性脓肿 消毒局部皮肤或粘膜表面后，用注射器抽取，将脓液注入多功能培养瓶或无菌试管内送检。疑为厌氧菌感染时，应作床边接种或置厌氧运送培养基内送检。
3.3 标本拒收标准。
3.3.1 标本标识与化验申请单不符。 3.3.2 标本不是无菌留取。
3.3.3 送标本的时间在采集标本后超过2小时。 4.试剂、仪器
4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3％过氧化氢、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。
4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性细菌药敏卡（GNS）、革兰阳性细菌鉴定卡(GPI)、革兰阳性细菌药敏卡(GPS)、真菌鉴定卡(YBC)、药敏纸
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作业指导书 文件编号: AYL-S7-337 版本:3.0 页码: 第2页 共4页 片、ATB板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。 5.细菌鉴定和药敏质控 参见《质量管理程序》。 6.检验步骤
接受标本后。立即对标本进行编号、登记。
6.1 涂片检查 革兰染色镜检，报告“查见革兰X性菌，形似XX菌”或报告“未查见细菌”。
6.2培养
6.2.1 一般细菌培养 标本接种血琼脂平板和麦康凯琼脂平板(或EMB、中国蓝琼脂平脓及伤口标本细菌学检验标准操作规程板)，35℃培养18～24小时后，根据菌落特性和形态染色，作出初步判断，再按各类细菌的生物学特性进行鉴定。
6.2.2厌氧菌培养 取脓液标本接种厌氧血琼脂平板及其他厌氧选择平板，置于厌氧环境培养，根据生长情况及涂片染色结果，按厌氧菌生物学特性进行鉴定。
6．2 3嗜血杆菌及奈瑟菌培养 接种于巧克力琼脂平板，置5％～10％CO2环境中培养。
6．2 4结核分枝杆菌培养 参见《分枝杆菌属检验标准操作规程》 6 2．5真菌培养 可用沙氏培养基。
7．操作流程 脓液及创伤感染分泌物 涂片染色 需氧培养 厌氧培养
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作业指导书 文件编号: AYL-S7-337 版本:3.0 页码: 第3页 共4页 血琼脂平板、麦康凯 厌氧血琼脂平板 35℃培养18～24h 35℃厌氧培养平板，
观察菌落特征及涂片 耐氧试验 染色 仪器或手工细菌鉴定及 厌氧血平板生长 药敏试验 发出报告
8．结果报告
查见致病菌，报告菌名和药敏结果。 9．注意事项
9.1 对于某些特殊病人(如气性坏疽病人)，在菌种鉴定及药敏试验结果尚未报出之前，根据涂片镜检情况，采取治疗措施。
9.2 厌氧菌培养取得样本后，拭子应立即置于厌氧运送管，尽可能少让样本暴露于空气中。穿刺时最好以针筒直接抽取，避免接触环境中氧气。
10．临床意义
从脓液及创伤标本中能检出的病原微生物种类很多，最常见的由葡萄球菌和链球菌引起的局部化脓性感染，包括有毛囊炎、疖、痈、甲沟炎、扁桃体炎、乳腺炎、中耳炎、外耳道疖肿、外耳道炎、细菌性结膜炎、脓疱疮、外科切口及创伤感染等。化脓性骨髓炎、化脓性关节炎的主要致病菌是金黄色葡萄球菌。慢性骨髓炎和慢性化脓性关节炎病原菌中，除上述细菌外，主要为结核分枝杆菌。脓液标本中可检出铜绿假单胞菌、变形杆菌和类白喉棒状杆菌等，常为继发性感染或污染所致。气性坏疽主要致病菌为产气荚膜梭菌，其次为水肿梭菌、败毒梭菌及溶组织梭菌等。坏疽常继发葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌或其它需氧菌感染。器官脓肿和机体深部组织的脓肿多为厌氧菌感染。
11.危急值报告
培养出产气荚膜梭菌及时按传染病报告。