实验一 槐米中芦丁的提取、分离与鉴别
一、实验目的
（1）掌握黄酮类化合物的提取原理和方法。 （2）掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。
二、实验原理
芦丁(Rutin)亦称芸香苷(Rutisude)，广泛存在于植物界中。现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。
槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达23.5%，槐花开放后降至13.0%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性，临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。
芦丁(Rutin)为淡黄色细小针状结晶，mp.174℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。溶解度情况如下：
水：1:10000(冷)，1:200(热) 甲醇：1:100(冷)，1:9(热) 乙醇：1:300(冷)，1:30(热) 吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热)
不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。
芦丁可溶于热水，难溶于冷水，其分子结构中具有较多的酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶解，而在酸性条件下，易析出沉淀，故本实验采用碱溶解酸沉淀的方法自槐米中提取芦丁。再利用其在冷热水中溶解度的差别采用沸水为结晶溶剂进行精制。利用芦丁可被稀酸水解，生成苷元和糖，通过颜色反应、薄层层析等方法进行检识和确认芦丁。
三、实验内容
（一） 芦丁(芸香苷)的提取
1. 取1.5g石灰粉（CaO），置于干净的小研钵中，加入10mL水研成乳液备用。称取槐米20g，于 1000m1烧杯中，加0.4%硼砂水溶液200mL，在搅拌下小心加入石灰乳调至 pH 8～9，加热至微沸，维持pH值20-30分钟，趁热抽滤，弃去滤渣，冷至60-70℃用浓盐酸调至pH4-5，放置过夜，减压过滤，得粗芦丁（滤
饼用水洗3-4次），干燥后得粗品。 （二） 芦丁(芸香苷)的精制
1. 将芦丁粗品置烧杯中，按(1：200)加蒸馏水，加热煮沸数分钟，使其充分溶解，趁热抽滤，滤液放置过夜；
2. 减压过滤，用少量蒸馏水洗涤沉淀 2-3次，抽干，即得芦丁精品。 （三） 鉴别
（1）莫氏(Molish)反应
取芦丁数毫克，置于小试管中，加 2ml乙醇溶解，再加10% α-萘酚乙醇液1ml，振摇使之溶解，然后沿试管壁加浓硫酸约2ml，静置，观察，两液层界面变化，呈紫红色环者示分子中含糖结构。 (2). 盐酸----镁粉反应
取芦丁数毫克，置于小试管中，加2ml乙醇热溶，加镁粉少许，滴加浓盐酸，溶液由黄色逐渐变红者示有黄酮类化合物存在。 (3). 醋酸镁纸片反应
取一张滤纸，滴两滴芦丁的乙醇溶液，然后加 1%醋酸镁甲醇溶液两滴，黄酮类应呈黄色荧光。紫外灯下观察荧光的变化，并记录现象。 (4). 三氯化铝纸片反应
取一张滤纸，分别滴两滴芦丁的乙醇溶液，然后加1%三氯化铝甲醇溶液两滴，黄酮类化合物应呈鲜黄色。紫外灯下观察荧光的变化，并记录现象。 四、实验操作要点
（1）硼砂的作用。芦丁分子因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露空气中，在光的作用下，能缓缓分解，变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧化分解，硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的。因此，加入硼砂既能调节碱性水溶液的pH，又能保护芦丁减少氧化。
（2）加入石灰乳使pH 8～9，既可达到溶解芦丁的目的，又可以出去槐米中含有的大量多糖、粘液质，但pH不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而析出沉淀。 （3）用浓盐酸调pH 4～5，pH过低，会使芦丁生成盐而降低收率。 五、思考题
1、用碱溶酸沉法提取芦丁的原理是什么？为什么要控制碱的浓度？ 2、用碱溶酸沉法提取芦丁，为什么要加入硼砂水溶液？