贵州大学
生命科学院分子生物学课程开题报告
所在学院: 学 号: 姓 名: 学科专业: 研究方向:
生命科学学院 2015021262 苗徐静 生物工程 不区分研究方向
贵州福泉章姬草莓根腐病病原鉴定
及分子检测 开题题目:
导师姓名: 入学时间:
文晓鹏 2015年6月
填表日期: 2015 年 12月 31 日
一、 论文来源的课题名称、类型及课题编号（属于国家、省、市、自选中的哪一种？） 课题名称：贵州福泉章姬草莓根腐病病原鉴定及分子检测 课题类型： 基础研究 课题编号：黔科合[2015]3016 课题来源：贵州省农业攻关项目 二、研究目的和意义： 草莓蔷薇科草莓属，是多年生宿根性草本果树，在园艺学上属浆果类水果。草莓生长周期短、管理方便、果实营养丰富。草莓以其柔软多汁、营养丰富而著称，尤其含有大量的维生素C，素有“水果皇后”的美称。草莓果实除供鲜食外，还可加工成草莓酒、草莓汁、草莓汽酒和草莓酱、草莓蜜饯、速冻食品等，具有十分广阔的市场。另外草莓中还可以提取一种叫“草莓胺”的物质，对治疗白血症、障碍性贫血等血液有奇特疗效。草莓的根、叶和果实中的有机鞣花酸可以防治某些化学物质引起的癌症。 草莓根腐病是由土传病原真菌引起的复合侵染型病害，是草毒上危害较为严重的病害之一。随着生产规模发展，种植面积扩大，和连作年限增加，草莓根部土传病害逐年加重，已成为制约草莓产业发展的障碍因素之一。目前，贵州福泉地区草莓根腐病病原种类不清，使得田间防治缺乏针对性，难以及时处理。因此为有效防治草莓根腐病的发生和蔓延，利用传统植物病理学手段结合分子生物学技术，对贵州福泉草莓根腐病原菌进行鉴定，明确草莓根腐病病原菌的主要类型，并建立切实可行的病原菌荧光定量PCR检测方法。为草莓根腐病的快速准确检测、早期防治、病害预警提供可靠的理论依据和应用技术。 三、国内外研究现状和发展趋势（列出主要参考文献）： 目前国内外对植物病原体研究主要是通过三种方法，包括传统植物病原菌检测技术、免疫学检测技术和分子生物学检测技术。其中免疫学检测技术已逐步发展成为田间病害症状诊断应用最为普遍的关键技术。酶联免疫吸附测定法是被最早应用的一种免疫学技术，1971年，由Engvall和Perlmann最早发表，应用于IGg的测定。该技术不断被发展和改进，逐渐由抗原定位发展到待测样品中微量抗原的定量检测。同时国内外己建立了多种植物病原菌的核酸杂交检测方法。1998年Wullings等根据23 SrDNA设计探针RSOLA和RSOLB，用荧光标记原位杂交技术结合间接免疫荧光技术对马铃薯中的青枯菌生化变种2进行了成功检测，灵敏度达到为I X 104cfu/mL，检测用时短，检测效率高。PCR-ELISA是用免疫学方法检测PCR产物，是在PCR扩增时用生物素(biotin)标记引物，通过ELISA技术使得PCR产物结合到链霉亲和素(( strepavidin )包被的酶联板上，用酶标记的抗体与杂交分子反应。Bailey等通过使用rDNA-ITS 1通用序列作为捕获探针，同标记了地高辛的PCR产物进行比色检验，在一轮反应中可以同时检测到10种腐霉和8种疫霉，所有操作不需要进行凝胶电泳和点杂交，可同时分析大量样品。上述技术虽然都可以对目标植物病原菌进行特异性的检测，但随着分子生物学技术的发展及其在植物病原检测领域的应用，人们不满足于仅仅是对病原菌进行上述的定性诊断和检测，而是开始应用实时荧光定量PCR技术，这种近些年来才发展起来的新型的定量PCR技术对植物病原菌进行微定量。近年来，荧光定量PCR技术该技术在植物病原检测方面也得到了应用，建立了一大批植物病原的实时荧光定量PCR检测方法，这为植物病害的研究、诊断与防控提供了强有力的技术支持。通过设计合成萎蔫病菌实时荧光PCR的特异性引物和探针，建立萎蔫病菌的实时荧光PCR检测体系。应用RT-PCR技术建立了小麦叶锈菌快速诊断体系，用于病害的快速预警和综合防治。Schroeder依据腐霉rDNA-ITS设计序列，九种腐霉菌的荧光定量PCR特异性引物，由SYBR GREEN I染料建立荧光定量PCR的标准曲线，应用于华盛顿东部地区土传病原菌腐霉快速检测及根际定殖数量的分析。目前，己建立了植物病原真菌的荧光定量PCR检测技术还包括芸苔根肿菌、炭疽菌、腐皮镰抱菌、尖抱镰刀菌、小麦印度腥黑粉菌,大豆锈病的豆薯层锈菌、黑麦草腥黑穗病菌、小麦条锈病等病原菌的定量测定。
主要参考文献：
[1]赵秀娟，王树桐，张凤巧，杜洪忠，蒋继志.草墓根腐病研究进展[[J].中国农学通报，2006.22(8)419-422.
[2]张艳秋，刘伟，胡长效.草莓根腐病的发生规律与综合防治[J].植保技术与推广，2003.23(1)14-16.
[3]孟凡娟，关法春，王超，李荣钦，杨峰.草莓主要土传病害的发生及防治[[J].北方园艺，