生物化学实验习题及解答 一、名词解释
1、pI：指氨基酸的正离子浓度和负离子浓度相等时的pH值，用符号pI表示。
2、层析：按照在移动相和固定相（可以是气体或液体）之间的分配比例将混合成分分开的技术。 3、透析：通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。
4、SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳：在去污剂十二烷基硫酸钠存在下的聚丙烯酰氨凝胶电泳。SDS-PAGE
只是按照分子的大小，而不是根据分子所带的电荷大小分离的。
5、蛋白质变性：生物大分子的天然构象遭到破坏导致其生物活性丧失的现象。蛋白质在受到光照，热，有机溶济以及一些变性济的作用时，次级键受到破坏，导致天然构象的破坏，使蛋白质的生物活性丧失。
6、复性：在一定的条件下，变性的生物大分子恢复成具有生物活性的天然构象的现象。 7、Tm 值：核酸分子变性过程中，紫外吸收达到最大增量一半时的溶解温度。 8、同工酶：能催发相同的反应类型但其理化性质及免疫学性质不同的酶。
9、Km值：反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。是酶的特征物理学常数之一。近似表示酶与底物的亲和力。
10、DNA变性：DNA双链解链，分离成两条单链的现象。
11、退火：既DNA由单链复性、变成双链结构的过程。来源相同的DNA单链经退火后完全恢复双
链结构的过程，同源DNA之间`DNA和RNA之间，退火后形成杂交分子。 12、增色效应：当双螺旋DNA熔解（解链）时，260nm处紫外吸收增加的现象。 二、基础理论单项选择题
1、A；2、C；3、B；4、A；5、A；6、B；7、B；8、C；9、D；10、A；11、A；12、D；13、A； 1、用下列方法测定蛋白质含量，哪一种方法需要完整的肽键？（ ） A、双缩脲反应 B、凯氏定氮 C、紫外吸收 D、羧肽酶法 2、下列哪组反应是错误的？ （ ）
A、葡萄糖——Molish反应 B、胆固醇——Libermann-Burchard反应 C、色氨酸——坂口（Sakaguchi）反应 D、氨基酸——茚三酮反应 3、Sanger试剂是（ ）
A、苯异硫氰酸 B、2，4-二硝基氟苯 C、丹磺酰氯 D、?-巯基乙醇 4、肽键在下列哪个波长具有最大光吸收？（ ） A、215nm B、260nm C、280nm D、340nm
5、下列蛋白质组分中，哪一种在280nm具有最大的光吸收？（ ）
1
A、色氨酸的吲哚基 B、酪氨酸的酚环 C、苯丙氨酸的苯环 D、半胱氨酸的硫原子 6、SDS凝胶电泳测定蛋白质的相对分子量是根据各种蛋白质（ ） A、在一定pH值条件下所带的净电荷的不同 B、分子大小不同 C、分子极性不同 D、溶解度不同
7、蛋白质用硫酸铵沉淀后，可选用透析法除去硫酸铵。硫酸铵是否从透析袋中除净，你选用下列哪一种试剂检查？ （ ）
A、茚三酮试剂 B、奈氏试剂 C、双缩脲试剂 D、Folin-酚试剂 8、蛋白质变性是由于（ ）
A、一级结构改变 B、亚基解聚 C、空间构象破坏 D、辅基脱落 9、用生牛奶或生蛋清解救重金属盐中毒是依据蛋白质具有（ ） A、胶体性 B、粘性 C、变性作用 D、沉淀作用 10、有关变性的错误描述为（ ）
A、蛋白质变性后，其一级结构和空间结构改变 B、蛋白质变性后，其理化性质和生物学活性
改变C、加热、紫外线照射、超声波等可以引起蛋白质变性D、变性蛋白质粘度增加，易被酶水解，易沉淀
11、双链DNA热变性后（ ）
A、黏度下降 B、沉降系数下降 C、浮力密度下降 D、紫外吸收下降
12、酶的活化和去活化循环中，酶的磷酸化和去磷酸化位点通常在酶的哪一种氨基酸残基上？（ ） A、天冬氨酸 B、脯氨酸 C、赖氨酸 D、丝氨酸
13、在生理条件下，下列哪种基团既可以作为H的受体，也可以作为H的供体？（ ） A、His的咪唑基 B、Arg的胍基 C、Cys的巯基 D、Trp的吲哚基 三、填空
1、脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生（ ）色物质，而其他氨基酸与茚三酮产生（ ）色的
物质。
2、通常可用紫外分光光度法测定蛋白质的含量，这是因为蛋白质分子中的（ ）、（ ）、（ ）三种氨基酸的共轭双键有紫外吸收能力。
3、移液枪在每次实验后应将刻度调至（ ），让弹簧回复原型以延长移液枪的使用寿命，并严禁吸取（ ）。
4、使用离心机时，如有噪音或机身振动时，应立即（ ），并且离心管须对称放入套管中，防止机身振动，若只有一支样品管，则另外一支要用（ ）代替。 5、测定蛋白质浓度的方法主要有（ ）、（ ）、（ ）。
6、利用蛋白质不能通过半透膜的特性，使它和其他小分子物质分开的方法有（ ）和（ ）等。 7、核酸在260nm附近有强吸收，这是由于（ ）。
+
+
2
8、双键DNA热变性后，或在pH2以下，或在pH12以上时，其OD260（ ），同样条件下，单键DNA的OD260（ ）。
9、硝酸纤维素膜可结合（ ）链核酸。将RNA变性后转移到硝酸纤维素膜上再进行杂交，称（ ）印迹法。
10、常用二苯胺法测定（ ）含量，用苔黑酚法测定（ ）含量。
11、变性DNA的复性与许多因素有关，包括（ ）、（ ）、（ ）、（ ）、（ ）。 12、温度对酶活力影响有以下两方面：一方面（ ），另一方面（ ）。 13、维生素C是（ ）酶的辅酶，另外还具有（ ）作用。
14、在分光光度计的使用或检定中，（ ）的准确度是衡量仪器工作性能的一项重要指标，它的准确程度直接关系到所测数据的可信性及科学性。（ ）的误差越大，测试结果的可信性越差,从而影响到测试数据的准确性。 四、问答
1、紫外分光光度法测定核酸含量的原理。
答 ：核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统，能吸收紫外光，RNA和DNA的紫外吸收峰在
260nm波长处。一般在260nm波长下，每1ml含1μg RNA溶液的光吸收值为0.022~0.024，每1m1含1μg DNA溶液的光吸收值约为0.020，故测定未知浓度RNA或DNA溶液在260nm的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。此法操作简便，迅速。若样品内混杂有大量的核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光的物质，则测光误差较大，故应设法事先除去。 2、蛋白质变性与沉淀的关系。
答 ：沉淀可以是由蛋白质变性从而产生沉淀，也可以是由于盐析。 蛋白质变性是指光照，热，有
机溶济以及一些变性剂（如重金属盐）的作用时蛋白质的空间结构被破坏，使得蛋白质丧失活性，该过程不可逆。 盐析是指向蛋白质的溶液中加入轻金属盐，使得蛋白质沉淀析出，这是由于加入盐降低了蛋白质得溶解度而析出，该过程可逆，加水蛋白质又会溶解。 二者本质上是不同的。
3、牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。
答 ：牛奶含有半乳糖、蛋白质、脂肪成分。蛋白质中的酪蛋白通过等电点沉淀，再通过离心而获得，
糖类小分子由于处于清夜中而分离，沉淀物中所含有的脂肪通过有机溶剂抽提而去除，最终得到纯白色、晶状酪蛋白。
方法：取新鲜牛乳，用酸碱调PH到酪蛋白的等电点沉淀析出酪蛋白，然后洗涤，醇醚吸水至干燥得粉末称重，计算提取率。步骤：保温→调PH→沉淀→离心→洗涤→干燥→称量 4、试述凝胶成像系统操作时应注意的事项。
答：1）紫外凝胶照相时要防止EB污染仪器，在紫外透射灯样品台上垫上蓝色和白色胶片，开关凝
胶成像系统前面板那、操作GeneSnap软件之时都不可以戴手套。白光透射光源放置在紫外透射
3
光源上面时要把蓝色和白色胶片取出。2）注意开机顺序，先开凝胶成像系统，再打开电脑进入GeneSnap软件。3）在使用紫外光源照相的过程中，不可以打开凝胶成像系统前面板。 5、若样品中含有蛋白质和核苷酸等杂质，如何排除干扰？
答：用去垢剂（如SDS，十二烷基磺酸钠）使蛋白质变性，RNA通过RNase消化清除。 6、体液血糖测定有哪些方法？
答：测定血糖的方法常用的有三种：静脉血浆葡萄糖（VPG），毛细血管全血葡萄糖（CBG）和静脉
全血葡萄糖（VBG）。
7、DNA在电场中的迁移率取决于哪些因素？
答：1） DNA的分子大小及构型： ?8 ^不同构型DNA的移动速度次序为：供价闭环DNA（covalently closed circular，cccDNA）>直线DNA>开环的双链环状DNA。2）琼脂糖浓度：一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。3）DNA分子的构象 ：当DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而线状双链DNA移动最慢。\）电源电压 ：琼脂糖凝胶分离大分子DNA实验条件的研究结果表明，在低浓度、低电压下，分离效果较好。5) 嵌入染料的存在 ：荧光染料溴化乙啶用于检测琼脂糖凝胶中的DNA,染料会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状DNA，使其刚性更强,还会使线状DNA迁移率降低15％。6）离子强度影响 ：电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。 8、琼脂糖凝胶有哪些注意事项？
答：1）缓冲液的使用要正确，长时间高压电泳时，常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可
取的。2）琼脂糖的影响。3）凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致。4）样品加入量的多少。5）电泳系统的变化会影响DNA的迁移，加入DNA标准参照物进行判定是必要的。6）DNA样品中的盐浓度也影响DNA的迁移率。7）DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度、迁移分子的形状及大小。
9、考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么？
答：考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）染料，在游离状态下溶液呈棕红色，当它与
蛋白质结合后变为蓝色。蛋白质含量在0~1000μg范围内，蛋白质-色素结合物在595nm下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用比色法进行定量分析。考马斯亮蓝G-250法（Bradford法）是比色法与色素法相结合的复合方法，简便快捷，灵敏度高，稳定性好，是一种较好的蛋白质常用分析方法。
10、何谓Rf值？影响Rf值的主要因素是什么？
答：Rf为氨基酸的比移值。影响纸层析迁移率Rf值的主要因素：1、样品本身的性质和结构；2、
溶剂的性质；3、PH值；4、温度；5、滤纸性质。
4
11、蛋白质分离和纯化的一般方法？
答：主要有以下一些方法：透析及超滤法；丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀；电泳；层析；超速离心。 12、如何正确选择核酸电泳指示剂？
答：核酸电泳常用的指示剂有溴酚兰和二甲苯青及银染色。溴酚兰在碱性液体中呈紫兰色，在0.6%、
1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与1Kb、 0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同.二甲苯青的水溶液呈兰色，它在 1%和1.4%琼脂糖中电泳时，其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似。
染色剂：核酸电泳后，需经染色后才能显现出带型，最常用的是溴化乙锭染色法，其次是银染色。 三、填空 1、黄、紫 2、Trp、Tyr、phe
3、最大、强挥发性、强腐蚀性的液体。 4、切断电源，即时排除故障；等质量的水 5、双缩脲法、Folin-酚试剂法、凯氏定氮法 6、透析、超滤
7、在嘌呤碱基和嘧啶碱基中存在共轭双键 8、增加、不变 9、单、Northern 10、DNA、RNA
11、样品的均一度、DNA的浓度、DNA片段的大小、温度的影响、溶液的离子强度 12、温度升高，可使反应速度加快；温度太高，会使酶蛋白变性而失活 13、羟化、解毒
14、透射比或吸光度、透射比或吸光度
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