植物抗旱生理指标测定原理及方法

生命科学学院杨歌

指标测定：

一、可溶性糖（蒽酮法）二、脯氨酸三、丙二醛四、叶绿素

五、蛋白（考马斯亮蓝法）六、超氧化物歧化酶（SOD）七、过氧化物酶（POD）八、谷胱甘肽（GSH）九、电导率

一、可溶性糖含量的测定

1.蒽酮法 1.1原理

糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在可见光吸收峰位620nm。

测定对象：几乎可以测定所有的碳水化合物，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应，所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量）。

1.2 步骤

试剂：(1)浓硫酸；

(2)蒽酮乙酸乙酯试剂：蒽酮------------1g 加乙酸乙酯至----50ml 实验步骤：

（1）称取样品0.1g，置于研钵中，加4ml ddH2O研磨成匀浆，

8ml ddH2O洗涤研钵。

（2） 100°C沸水浴10min，冰上冷却。（3） 4000rpm离心10min。

（4）取上清5ml转移至100ml容量瓶定容。

（5） 1ml提取液+ 1ml ddH2O+0.5ml蒽酮+5ml浓硫酸，轻轻

混合均匀，100°C沸水浴10min，冰上冷却。

（6） 620nm处测吸光值。

1.3 计算方法

可溶性糖含量% = C*V/(W*10^6)*100%

V为植物样品稀释后的体积（ml）------100ml

C为提取液的含糖量（μg/ml）--------根据标准曲线计算 W为植物组织鲜重量（g）-------------0.1g

问题及质疑：

1.目标糖含量：

标准曲线是用葡萄糖位标准制作的，而蒽酮法是测总糖的量，包括己糖、戊糖，浓硫酸将淀粉、纤维素水解成的单糖，将总糖得出的OD值代入由单一糖做出的标准曲线，有一定误差存在。注：查看所有文献的标准曲线都是用葡萄糖制作。 2.误差分析：

（1）不同糖类与蒽酮试剂反应的显色程度不同。果糖最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖最浅造成误差。

（2）蒽酮试剂溶解度较低，非常容易析出，在反应时加入糖的水溶液中，出现浑浊现象，影响反应进行。（3）介于以上原因，将上清5ml转移至100ml容量瓶定容，稀释程度过大，当糖含量少的时候，大的误差可能会掩盖真实的糖含量。造成品数据没有实际意义。

方案修改意见：

1. 首先，做五到六组空白，测试分光光度计误差程度。 2. 增加平行组数，由三组增加至五组，减少每个样品测试次数。

3. 改变测试样品定容量，由100ml变为50ml。