现代组化复习要点

1.FISH探针的类型。

2.抗原刺激后，机体体液中现能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白-- 免疫球蛋白（Ig）。免疫球蛋白分哪几类。 3.免疫组织化学全过程分步。 4.原位杂交的主要分类。

5.最常用于产生多克隆抗体的动物是兔子，其次是山羊、猪、绵羊、马、豚鼠以及其他动物。兔子大量用于多克隆抗体产生的原因。 6.单克隆抗体与多克隆抗体区别

7.免疫组化染色方法选择的原则及注意事项。 8.免疫组化染色过程基本操作步骤。

9.免疫组化进行抗原修复的原因；什么是阳性对照和阴性对照，以及设置的原因；用到什么修复方法。

10.以下抗体保存

浓缩抗体: 工作浓度抗体: 即用型抗体： 11.酶组织化学中影响酶活性的因素。 12.酶组织化学显示酶的方法。

（一）金属离子沉淀法：一般用于显示磷酸酶 1. 钙钴法 2. Gomori 硝酸铅法（二）偶氮偶联法（偶氮色素法） (三) 联苯胺色素法 (四) 四唑盐法

(五) 靛蓝反应原理: 底物被酶分解为二个初级反应产物, 其中之一可在一定条件下形成不溶性的靛蓝。 13.酶组织化学的应用

（1）了解组织、细胞的代谢活动（2）细胞类型的判断（3）了解细胞定位（4）用于肿瘤的研究（5）用于免疫组化和杂交组化的显示手段

14.碱性磷酸酶，酸性磷酸酶在人体中的分布位置及其检测应用方面。 15.常用于显示碱性磷酸酶，酸性磷酸酶的方法。 16.腺苷三磷酸酶的显示方法。 17.显示乙酰胆碱酯酶的方法。 18.掌握氧化还原酶。 19.酯酶分类。

20.特异性显示DNA分子形态学方法。

21.吖啶橙染料分别与DNA和RNA结合后呈现荧光颜色。

22.说明应用流式细胞仪，通过AnnexinV-FITC／PI 染色，如何区分凋亡细胞和坏死细胞，并且分析原理。

1）坏死细胞和凋亡细胞的细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(PS)迁移至细胞外侧，AnnexinV和PS具极强的结合力，坏死细胞和凋亡细胞呈现绿色

（2）坏死细胞核被PI染成红色（3）双变量FCM的散点图

左下象限显示正常活细胞，为FITC-，PI-；右上象限为坏死细胞，为FITC+，PI+；右下象限为凋亡细胞，呈现FITC+／PI- 23.免疫组织化学与原位杂交的不同点。不同点：

（1）原理不同：免疫组织化学--抗原抗体反应；杂交组织化学-核酸碱基互补。

（2）方法不同：免疫组织化学—方法类同：荧光法、酶标法、亲合法/二步、三步法等，敏感、特异；杂交组织化学—荧光原位杂交、组织或细胞原位杂交、原位PCR。

（3）检测水平不同：免疫组织化学—组织/细胞、蛋白水平，杂交组织化学--核酸（DNA/RNA）水平 24.免疫组织化学的应用范围，并举例说明。

25、常用哪些CD系列分别标记的T淋巴细胞标记的抗体和 B淋巴细胞标记的抗体。