现代组化复习要点

现代组化复习要点

1.FISH探针的类型。

2.抗原刺激后,机体体液中现能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白-- 免疫球蛋白(Ig)。免疫球蛋白分哪几类。 3.免疫组织化学全过程分步。 4.原位杂交的主要分类。

5.最常用于产生多克隆抗体的动物是兔子,其次是山羊、猪、绵羊、马、豚鼠以及其他动物。 兔子大量用于多克隆抗体产生的原因。 6.单克隆抗体与多克隆抗体区别

7.免疫组化染色方法选择的原则及注意事项。 8.免疫组化染色过程基本操作步骤。

9.免疫组化进行抗原修复的原因;什么是阳性对照和阴性对照,以及设置的原因;用到什么修复方法。

10.以下抗体保存

浓缩抗体: 工作浓度抗体: 即用型抗体: 11.酶组织化学中影响酶活性的因素。 12.酶组织化学显示酶的方法。

(一)金属离子沉淀法:一般用于显示磷酸酶 1. 钙钴法 2. Gomori 硝酸铅法 (二)偶氮偶联法(偶氮色素法) (三) 联苯胺色素法 (四) 四唑盐法

(五) 靛蓝反应原理: 底物被酶分解为二个初级反应产物, 其中之一可在一定条件下形成不溶性的靛蓝。 13.酶组织化学的应用

(1)了解组织、细胞的代谢活动(2)细胞类型的判断(3)了解细胞定位(4)用于肿瘤的研究 (5)用于免疫组化和杂交组化的显示手段

14.碱性磷酸酶,酸性磷酸酶在人体中的分布位置及其检测应用方面。 15.常用于显示碱性磷酸酶,酸性磷酸酶的方法。 16.腺苷三磷酸酶的显示方法。 17.显示乙酰胆碱酯酶的方法。 18.掌握氧化还原酶。 19.酯酶分类。

20.特异性显示DNA分子形态学方法。

21.吖啶橙染料分别与DNA和RNA结合后呈现荧光颜色。

22.说明应用流式细胞仪,通过AnnexinV-FITC/PI 染色,如何区分凋亡细胞和坏死细胞,并且分析原理。

1)坏死细胞和凋亡细胞的细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(PS)迁移至细胞外侧,AnnexinV和PS具极强的结合力,坏死细胞和凋亡细胞呈现绿色

(2)坏死细胞核被PI染成红色 (3)双变量FCM的散点图

左下象限显示正常活细胞,为FITC-,PI-; 右上象限为坏死细胞,为FITC+,PI+; 右下象限为凋亡细胞,呈现FITC+/PI- 23.免疫组织化学与原位杂交的不同点。 不同点:

(1)原理不同:免疫组织化学--抗原抗体反应;杂交组织化学-核酸碱基互补。

(2)方法不同:免疫组织化学—方法类同:荧光法、酶标法、亲合法/二步、三步法等,敏感、特异; 杂交组织化学—荧光原位杂交、组织或细胞原位杂交、原位PCR。

(3)检测水平不同:免疫组织化学—组织/细胞、蛋白水平,杂交组织化学--核酸(DNA/RNA)水平 24.免疫组织化学的应用范围,并举例说明。

25、常用哪些CD系列分别标记的T淋巴细胞标记的抗体和 B淋巴细胞标记的抗体。

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