微生物学实验
微生物实验室规则及要求
? 实验前要预习，写好预习报告。 ? 保持室内整洁，不要随意走动。 ? 如若发生意外，及时报告老师。 ? 作好实验记录，写好实验报告。 ? 对于实验材料，写好姓名组号。 ? 牢记无菌概念，保持清洁卫生。 ? 上课认真听讲，课后积极讨论。 ? 上课不许闲聊，不得随意走动。 ? 注意实验安全，祝你实验顺利。 实验二、显微镜的使用以及细菌形态观察
一、目的要求：学习并掌握油镜的原理和使用方法 二、材料用具：显微镜 擦镜纸 香柏油 标本 三、显微镜的构造及工作原理
（一）显微镜的构造
微生物学研究用的显微镜物镜通常有：
低倍物镜(16mm，10?); 高倍物镜(4mm，40-45?); 油镜(1.8mm，95-100?)
普通光学显微镜的构造可分为两大部分：一为机械装置，一为光学系统，这两部分很好的配合，才能发挥显微镜的作用。
1.光学部分:接目镜 、 接物镜 、 照明装置(聚光镜、 虹彩光圈、 反光镜等). 它使检视物放大,造成物象.
2.机械部分:镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件.它起着支持 调节 固定等作用. (1)光源
(2)聚光器 聚光器在载物台下面，它是由聚光透镜、虹彩光圈和升降螺旋组成的。
（3）物镜 安装在镜筒前端转换器上的接物透镜利用光线使被检物体第一次造像，物镜成像的质量，对分辨力有着决定性的影响。物镜的性能取决于物镜的数值孔径（numerical apeature简写为NA），每个物镜的数值孔径都标在物镜的外壳上，数值孔径越大，物镜的性
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能越好。
(二) 油镜工作原理
油镜常标有黑圈或红圈，它是三者中放大倍数最大的。
使用油镜时，油镜与其他物镜的不同是载玻片与接物镜之间，不是隔一层空气，而是隔一层油质，称为油浸系。
这种油常选用香柏油，香柏油的折射率n＝1.52，而玻璃的折射率n＝1.52。 当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射。
如果玻片与物镜之间的介质为空气，则称为干燥系；当光线通过玻片后，受到折射发生散射现象，进入物镜的光线显然减少，这样视野的照明度就减低了
1 数值孔径
利用油镜不但能增加照明度；更主要的是能增加数值孔径。因为显微镜的放大效能由其数值孔径决定的。所谓数值孔径，即光线投射到物镜上的最大角度(称镜口角)的一半正弦，乘上玻片与物镜间介质折射率所得的乘积，可用下列公式表示：
N A ? n ? sin
? 2
? NA=数值孔径;n= 介质折射率α—最大入射角 即镜口角 数值孔径的大小又是衡量一台显微镜分辨力强弱的依据；
2、分辨力（D）:分辨力是指显微镜能辨别物体两点间最小距离的能力。
D
? 可见光的波长为0.4-0.7微米，平均波长为0.55微米。若用数值孔径为0.65的物镜，
则D=0.55微米/2×0.65=0.42微米。这表示被检物体在0.42微米以上时可被观察到，若小于0.42微米就不能视见。如果使用数值孔径为1.25的物镜，则D=0.22微米。凡被检物体长度大于这个数值，均能视见。
由此可见，D值愈小，分辨力愈高，物象愈清楚。 根据上式，可通过：（1）减低波长；（2）增大折射率；（3）加大镜口角来提高分辨力。 紫外线作光源的显微镜和电子显微镜就是利用短光波来提高分辨力以检视较小的物体的。物镜分辨力的高低与造象是否清楚有密切的关系。目镜没有这种性能，目镜只放大物镜所造的
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? ? 2 N A
象。
3、放大率：
显微镜放大物体，