A.根据酶分子电荷性质的纯化方法 B.调节酶溶解度的方法
C.根据酶分子大小、形状不同的纯化方法 D.根据酶分子专一性结合的纯化方法 88．下列哪一项不是阳离子交换树脂 （ D ） A 氢型 B 钠型 C 铵型 D 羟型 89．按分离原理不同，电泳可分为（ A ）
A 区带电泳、自由界面电泳、等速电泳、等电聚焦电泳
B 纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳 C 区带电泳、自由界面电泳、纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳 D 等速电泳、等电聚焦电泳、琼脂凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳
90．在酸性条件下用下列哪种树脂吸附氨基酸有较大的交换容量 （ C ）
A．羟型阴 B．氯型阴 C．氢型阳 D．钠型阳
91．亲和层析的洗脱过程中，在流动相中加入配基的洗脱方法称作 （ C ） A、 阴性洗脱 B、 剧烈洗脱 C、竞争洗脱 D、非竞争洗脱
92．活性炭在下列哪种溶剂中吸附能力最强？（ A ） A、水 B、甲醇 C、乙醇 D、三氯甲烷
93．将配基与可溶性的载体偶联后形成载体-配基复合物，该复合物可选择性地与蛋白质结合，在一定条件下沉淀出来，此方法称为 （ A ） A、亲和沉淀 B、聚合物沉淀 C、金属离子沉淀 D、盐析沉淀
94．在选用凝胶层析柱时，为了提高分辨率，宜选用的层析柱是 （ A ）
A、粗且长的 B、粗且短的 C、细且长的 D、细且短的
简答题
1. 为什么凝胶过滤层析通常采用恒定洗脱法？ 2. GFC与其他层析法比较其特点是什么？
3. 为什么IEC（离子交换层析）很小采用恒定洗脱法？ 4. 线性梯度洗脱法和逐次洗脱法优缺点时什么？ 5. 产生亲和作用的充分必要条件是什么？
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6. 比较特异性洗脱和非特异性洗脱的优缺点。
7. 蛋白质等生物大分子与小分子化合物的离子交换特性的差别？ 8. 兰格缪尔的单分子层吸附理论的要点是什么？ 9. 为什么离子交换需在低离子强度下进行？
1、吸附的概念及类型
吸附是利用吸附剂对液体或气体中某一组分具有选择性吸附的能力，使其富集在吸附剂表面的过程。
吸附的类型:①物理吸附：吸附剂和吸附物通过分子力（范德华力）产生的吸附;②化学吸附：吸附剂和吸附物之间的电子转移,发生化学反应,形成库仑力而吸附;③交换吸附：吸附剂与吸附物之间发生离子交换而吸附。 2、吸附过程的流程
吸附过程:待分离料液与吸附剂混合→吸附质被吸附到吸附剂表面→料液流出→吸附质解吸回收
3、大孔吸附树脂的吸附规律
大孔网状吸附树脂的种类:非极性吸附树脂;中等极性吸附树脂;极性吸附剂 遵循规律：①非极性吸附剂可从极性溶剂中吸附非极性溶质;②极性吸附剂可从非极性溶剂中吸附极性物质;③中等极性吸附剂兼有以上两种能力. 4、吸附等温线？
当固体吸附剂从溶液中吸附溶质到达平衡时,其吸附量与溶液组成和温度有关,当温度一定时，吸附量与浓度之间的函数关系称为吸附等温线。 5、亲和吸附的概念？亲和技术在生化分离中的应用综述？
亲和吸附分离是利用溶质和吸附剂之间特殊的化学作用，从而实现分离。吸附剂由载体(载体通常是惰性的,须先活化然后与配基偶联)和配位体组成. 6、固定床、流化床、膨胀床吸附的特点及区别？ 7、离子交换的定义？
离子交换是利用离子交换树脂作为吸附剂，将溶液中的待分离组分，依据其电荷差异，依靠库仑力（静电引力）吸附在树脂上，然后利用合适的洗脱剂将吸附质从树脂上洗脱下来，达到分离的目的。
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8、离子交换树脂的结构组成？ ①具有三维空间立体结构的网络骨架; ②联接在骨架上的活性基团
③活性基团所带的相反电荷的活性离子（可交换离子） 9、离子交换树脂的预处理方法、再生及洗脱？ 离子交换操作方法:树脂预处理→离子交换吸附→洗脱
树脂预处理方法:①物理处理：水洗、过筛，去杂，以获得粒度均匀的树脂颗粒；②化学处理：用8-10倍树脂体积的盐酸或氢氧化钠溶液交替搅拌浸泡.阳离子树脂:酸—碱—酸;阴离子树脂:碱—酸—碱.最后以去离子水或缓冲液平衡 洗脱方式:①改变溶液pH值;②改变溶液离子强度
树脂再生是指使离子交换树脂重新具有交换能力的过程。酸性阳离子树脂: 酸-碱-酸-缓冲溶液淋洗;碱性阴离子树脂:碱-酸-碱-缓冲溶液淋洗。方式有顺流再生和逆流再生。
蛋白质离子交换分离的基本步骤:平衡,上样吸附,洗脱,再生 第八章 色谱分离 1、色谱法的概念
色谱分离也称色谱层析、色谱、色层,是指样品中各组成依据其在固定相与流动相之间作用行为的差别进行多次分离的过程。
2据溶质分子与固定相相互作用的机理不同而分类的色谱技术主要有几种？ 根据溶质分子与固定相相互作用的机理不同可分为吸附层析法、分配层析法和凝胶过滤法三大类。其中吸附层析法又包含离子交换色层分离法、疏水作用色层分离法、金属螯合色层分离法和共价作用色层分离法四种。 3、各色谱技术的作用机理？
⑴柱色谱；①常用柱色谱介质分无机物色谱介质(氧化铝、硅胶、活性炭、膨润土、磷酸钙(凝胶型和晶型)、氧化钛和氢氧化锌凝胶等)和聚合物色谱介质 (如琼脂糖、葡聚糖、纤维素和聚丙烯酰胺等)②洗脱方法:恒定洗脱法;逐次洗脱法;梯度洗脱法(最常用)
⑵纸层析法:是一种常用的快速分离、鉴定方法，可用于定性分析以及确定分离方案，但一般不用于定量分析。介质:滤纸;固定相:水。操作方法：将试样溶于适
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当溶剂中，点样于滤纸的一端；选用适当的展开剂，借助毛细管现象从点样的一端向另一端流动，展开结束后，取下滤纸，晾干，染色显迹
⑶薄层色谱法: 将固定相涂布在惰性固体上，形成薄层进行色谱分离的方法 操作要点:铺板,点样,点样量 展开,显色
⑷吸附色谱:指混合物随流动相通过固定相（吸附剂）时，由于固定相对不同物质的吸附力不同而使混合物分离的方法。
⑸新的吸附色谱技术，如疏水作用色谱、金属螯合作用色谱和共价作用色谱等，所用吸附剂一般为有机基质并通过化学修饰后制成，它们都有比较明确的作用机理，即疏水作用、螯合作用和共价作用。
⑹亲和色谱(AFC):是将与目的产物具有特异亲和力的生物分子固定化后作为固定相从混合物中分离目的产物的过程。亲和作用是特殊的吸附作用。过程:载体活化、配基连接、吸附、洗脱
⑺分配色谱又称为液液色谱，其原理是利用混合物中各物质在两液相中的分配系数不同而分离。要素：固定相、载体、流动相⑻凝胶色谱(见下第5题) ⑼ 气相色谱可分为气固色谱和气液色谱.是指用气体作为流动相的色谱法。系统组成:气路系统;进样系统;分离系统;温控系统;检测记录系统
⑽高效液相色谱(HPLC)与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法. 4、柱色谱系统的组成？
一般由蠕动泵、色谱柱、检测器、记录仪以及部分收集器等几个部分构成。 5、凝胶色谱的定义？
凝胶色谱:以一定孔径的凝胶为固定相，是一种根据各物质分子大小不同而进行分离的色谱技术，因而又称为分子筛色谱、空间排阻色谱。 凝胶色谱分为两大类：凝胶过滤色谱和凝胶渗透色谱。 6、阻滞因子(Rf)?
阻滞因子是在色谱系统中溶质的移动速度和标准物（与固定相没有亲和力的流动相 Kd=0）的迁移率之比 Rf =
溶质的迁移距离
流动相在色谱系统中的迁移距离电泳是指荷电的胶体粒子在电场中的移动.电泳现象中的表面电势和双电层的因
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