agilent+260+高效液相色谱仪使用维护保养操作规则

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变更内容及定期审核

--------药物研究所--------

文件名称 文件编号 替代 起草人 文件编制及管理规程 颁发部门 生效日期 审核人 审核日期 研究所 批准人 批准日期 起草日期 版本号 00 01 02 03 生效日期 变更项目, 简述修订原因及内容 定期审核 分发部门/人员 部门/人员 份数 分发号 一、目的 制定Agilent 1260型高效液相色谱仪操作维护规程,使操作维护规范化,保证检测结果准确可靠。

二、适用范围

本规程适用于Agilent 1260型高效液相色谱仪的操作维护。 三、职责

QC对本规程的实施负责,项目主管、研发总监对本规程实施进行监督。 四、程序内容 4.1仪器配置

本仪器由梯度泵,自动进样器,柱温箱,VWD检测器或DAD检测器和操作软件工作站组成。 4.2操作前的准备

色谱纯的试剂配制流动相,必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查,应符合要求;水为新鲜制备的重蒸馏水。对规定pH值的流动相,应使用精密pH计进行调节,配制好的流动相应通过0.45μm以下的滤膜滤过,用前脱气,应配制足量的流动相。 4.2.2 供试溶液的配制 供试品用规定溶剂配成供试溶液。定量测定时,对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。供试溶液在注入色谱仪前,一般应经0.45μm以下的滤膜滤过,必要时,在配制供试溶液前,样品需经提取净化,以免对色谱系统产生污染。

4.2.3 检查上次使用记录和仪器状态,检查色谱柱是否适用于本次试验,色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致,原保存溶剂与现用流动相能否互溶,流动相的pH值与该色谱柱是否相适应,仪器是否完好,仪器的各开关位置是否处于关断的位置。

4.3仪器的操作

4.3.1 接通电源,打开计算机及工作站其他各部件开关,约30秒后,各部件进入待机状态,指示灯为橘黄色,启动完成。

手动提交每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。 →梯度泵→柱温箱→检测器的状态,橘黄色为未就绪状态,绿色为空闲状态,粉色为进样状态,蓝色为运行状态,红色为出错状态。

显示所有数据:即打开运行样品时所有记录运行状态的数据图谱。 平铺数据:即将所有运行状态图谱平铺。 重叠数据:即将所有运行状态图谱重叠。 4.4色谱条件的设定及数据采集操作过程

仪器状态的启动系统,也可点击桌面左下方上的接通系统电源按钮,还可以点击每一模块图标中的控制来开或关。把泵上的Purge阀逆时针松开,调流速为3.0ml/min,启动泵,系统开始排气泡,直到管线内(由容器瓶到泵出口)无气泡为止,切换通道继续Purge,直到所用流动相通道中无气泡为止,调流速为1.0ml/min,再把Purge阀顺时针旋紧。

方法中新建方法。

“与泵和进样器一致”使柱温箱温度一致,单击确定进入下一画面。

“最大压力限度”处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子,单击确定进入下一画面。 VWD检测器参数的设定

在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉成三角框,选择合适的响应时间,如〉0.1min(2秒响应时间)。点击确定进

入下一画面。

参数设定 检测波长:一般选择最大吸收处的波长,最多可同时检测8个波长。样品带宽:一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长:一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。参比带宽:至少要与样品信号的带宽相等,通常情况下用100nm作为缺省值。可以根据所需保存光谱图的张数最多同时设定5个通道采集信号,无需采集光谱时应将“存储”设在“无”,若做峰纯度检测或优化求知的样品检测条件,建议选择“全部”。峰宽(响应时间):其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。狭缝:窄时,光谱分辨率高;宽时,噪音低。同时可以输入采集光谱方式,步长,范围,阈值。根据检测波长选择氘灯或钨灯。

“方法”菜单,选中“方法另存为”,输入一方法名。如“test”,单击确定。

视图中选出在线信号,选中信号窗口1,然后单击改变按钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击确定。(如同时检测两个信号,则重复1、2,选中信号窗口2 序列并找到序列向导,选择已保存在系统中的仪器设置方法,单击确定进入下一对话框,输入样品信息:样品总体名称,数据路径中为将数据保存在规定文件夹中,在样品名称项中输入样品名称,未知样品运行次数项中输入样品瓶数,在每次运行重复次数输入进样针数,单击确定进入下一对话框,在样品瓶项中输入第一个样品瓶的位置,在样品架上放入样品瓶,在进样量选项中选择使用方法,然后单击确定。出现一个有样品瓶数的序列,将每一个样品名称都区别开来,以防保存数据时将相同名称的数据覆盖掉,将序列保存在规定文件夹中,在运行队列中进行提交。 运行控制菜单选择运行序列进样。

“停止时间”进行适当的调整,可使主峰出完并与使杂质峰出完。 4.6图谱数据的处理

文件命令栏中选择打开文件选项,选中你要的数据文件名,单击确定。

方法菜单中,单击积分事件进入积分参数画面。进行修改积分参数后在命令栏内选择分析。

自定义报告进入报告编辑。可将谱图设置在任何量程区域内,也可以将谱图调节成任何颜色,在数据结果中单击鼠标右键选择报告属性将需要的积分参数选入,如理论塔板数,分离度等。在报告结果中就会出现应保存的结果。

在打印报告之前,要将此方法保存后在报告菜单中选择 打印报告,将打印机的型号选择对,则报告已打印出来。

4.5关机操作

各部件开关,断开电源。 4.6 注意事项:

μm或更细的膜过滤)。

4.6.2 流动相过滤后要用超声波脱气,脱气后应该恢复到室温后使用。 4.6.3 不能用纯乙腈作为流动相,这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。

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