选修1专题5课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段（练）
1．下列有关PCR技术中引物的叙述，正确的是（ ） A. 引物是一小段DNA分子或双链RNA分子
B. 扩增一个DNA分子至少需要的引物数目等于新合成的DNA子链数目 C. 两种引物之间能够发生碱基互补配对
D. DNA聚合酶只能从引物的5＇端连接脱氧核苷酸 【答案】B
【解析】引物是一小段单链DNA或RNA，可与DNA母链通过碱基互补配对进行结合，A错误；扩增一个DNA分子至少需要的引物数目等于新合成的DNA子链数目，B正确；引物与DNA母链通过碱基互补配对进行结合，两种引物之间不能发生碱基互补配对，C错误；DNA聚合酶只能从引物的3＇端连接脱氧核苷酸，D错误。
2. 小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克服这个缺陷，可选择性扩增抗体的可变区基因（目的基因）后再重组表达。下列相关叙述正确的是（ ） A. 设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列 B. 用PCR方法扩增目的基因时需要知道基因的全部序列 C. PCR体系中G-C碱基对含量将影响使DNA解链的所需温度 D. PCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶 【答案】C
【解析】设计扩增目的基因的引物时，要考虑表达载体相关序列，从而保证目的的基因能与表达载体相连接及正常表达，A错误；用PCR方法扩增目的基因的前提是：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物，因此不需要知道基因的全部序列，B错误；在每个双链DNA分子中，碱基对A与T之间有2个氢键，C与G之间有3个氢键， 且DNA分子含有的氢键数越多，其热稳定性就越高，因此PCR体系中G-C碱基对含量将影响使DNA解链的所需温度，C正确；PCR体系中一定要添加耐高温的热稳定DNA聚合酶，而从受体细胞内提取的DNA聚合酶不耐高温，D错误。 3.有关PCR技术的说法，不正确的是（ ）
A．PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术 B．PCR技术的原理是DNA双链复制
C．利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列 D．PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA
【答案】D
【解析】A、PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，A正确；B、PCR技术以解开的双链作为模版，利用的原理是DNA复制，B正确；C、前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物，C正确；D、双链DNA模版在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA，可见该过程不需要解旋酶解开双链DNA，D错误． 4.有关PCR技术的说法，不正确的是（ ）
A．PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术 B．PCR技术的原理是DNA双链复制
C．利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列 D．PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA 【答案】D
【解析】A、PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，A正确； B、PCR技术以解开的双链作为模版，利用的原理是DNA复制，B正确； C、前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物，C正确；
D、双链DNA模版在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA，可见该过程不需要解旋酶解开双链DNA，D错误． 5.引物的作用是（ ）
A.打开D.NA.双链 B.催化合成D.NA.子链
C.提供模板 D.使D.NA.聚合酶能够从引物的3’端开始复制 【答案】D
【解析】PCR技术的原理是D.NA.复制，而D.NA.的复制需要引物，其主要原因是D.NA.聚合酶只能从3′端延伸D.NA.链。因此，引物的作用是使D.NA.聚合酶能够从引物的3’端开始复制。
6.复性温度是影响PCR特异性的较重要因素。变性后温度冷却至40℃～60℃,可使引物和模板发生结合。PCR的结果可不考虑原来解旋开的两个DNA模板链的重新结合,原因不包括（ ） A.由于模板DNA比引物复杂得多
B.引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞 C.模板链加热解旋已经变性不可能再次结合 D.加入引物的量足够多而模板链数量少 【答案】C
【解析】复性的原理是碱基互补配对，解旋后DNA分子变成单链，碱基序列未发生改变，冷却后仍可以进行复性，C项错误。
7.PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比，主要有两点不同，它们是（ ） ①PCR过程需要的引物是人工合成的单链DNA或RNA ②PCR过程不需要DNA聚合酶
③PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的 ④PCR过程中，DNA不需要解旋，直接以双链DNA为模板进行复制 A．③④ B．①② C．①③ D．②④ 【答案】C 【解析】
①PCR过程需要的引物是人工合成的单链DNA，①正确；②PCR过程需要耐高温的DNA聚合酶，②错误；③PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的，③正确；④PCR过程中，DNA不依靠解旋酶解旋，而是利用高温解旋，然后以单链DNA为模板进行复制，④错误。故C正确。 8.PCR技术中下列说法错误的有几项（ ）
①复性的目的是使原来分开的DNA的两条单链重新连接成双链 ②PCR技术是扩增完整的DNA分子
③DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从5′端延伸DNA链 ④DNA引物在细胞外可在DNA聚合酶的作用下合成
A．有一项 B．有二项 C．有三项 D．有四项 【答案】D
【解析】PCR 全称为聚合酶链式反应，PCR 技术是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术，原理是DNA复制，前提条件是要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物，条件还包括模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶），具体过程有①高温变性：DNA解旋过程；②低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链．PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开。故D正确。
9.下列关于PCR的描述中，正确的是( )
①PCR是一种酶促反应②引物决定了扩增的特异性③扩增DNA利用了热变性的原理④扩增的对象是氨基酸序列
A．①②④ B．②③④ C．①③④ D．①②③ 【答案】D
【解析】PCR技术的概念是PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术，原理是DNA复制，前提条件是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成一对引物，条件还包括模板DNA、
四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶），具体过程有①高温变性：DNA解旋过程；②低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链．PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开。
10. 用PCR方法检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱。其中1号为DNA 标准样液（ Marker ），10号为蒸馏水，PCR时加入的模板DNA如图所示。据此做出的分析，错误的是（ ） ．．
A. PCR产物的分子大小在250﹣500bp之间 B. 3号样品为不含目的基因的载体DNA C. 9号样品对应植株不是所需的转基因植株 D. 10号确定反应体系等对结果没有干扰 【答案】B
【解析】PCR过程中，可以通过设计特定的引物来扩增特定的DNA片段，4～9号是转基因植株，理论上应包含目的基因，结合2号野生型和10号蒸馏水组的结果，推测包含目的基因的片段大小应为250～500bp，A正确；3号PCR结果包含250～500bp片段，应包含目的基因，B错误；9号PCR结果不包含250～500bp片段，所以不是所需转基因植株，C正确；10号放入蒸馏水，可排除反应体系等对结果的干扰，D正确。 11.金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：
（1）从高表达MT 蛋白的生物组织中提取mRNA，通过______________获得______________用于PCR扩增。