第二章蛋白质化学

2、含量与纯度测定

① 凯氏定氮法:经典方法;国标中测定蛋白质含量的方法。首先样品与浓硫酸共热消化,蛋白氮转化为氨与硫酸结合生成硫酸铵。常加硫酸铜(加速分解)、硫酸钾或硫酸钠(提高沸点)、过氧化氢(加速氧化)。然后在凯氏定氮仪中加入强碱放出氨,用硼酸吸收氨。滴定、测定用去的硼酸,计算得出蛋白氮。 ② 紫外吸收法:蛋白质浓度(mg/ml)=1.55A280-0.75A260,

测定范围:0.1-0.5 mg/ml

③ 双缩脲法:540nm ④ 福林-酚法:

⑤ 考马斯亮蓝G-250染色法:在酸性溶液中为棕红色,与蛋白质结合后变成蓝色,在处比色。 ⑥ 电泳法鉴定纯度 ⑦ 免疫化学法 ⑧ 超离心法 ⑨ 薄层层析法

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