BCA蛋白浓度测定
一. 原理 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。检测浓度下限达到25 微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1～20微升。
二. 试剂盒组份 组 份 Cat: KGPBCA （250 assay酶标板/50assay 1mL比色杯） 蛋白标准溶液（0. 5 μg/μL ） 5 mL BCA试剂A 25 mL×2 BCA试剂B 1mL
三. 操作步骤 A． 酶标板操作
1. 标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表加入试剂 孔号 0 1 2 3 4 5 6 7 蛋白标准溶液（μL） 0 1 2 4 8 12 16 20 去离子水（μL） 20 19 18 16 12 8 4 0 对应蛋白含量（μg） 0 0.5 1.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0
孔号 蛋白质溶液（μL） 去离子水（μL） 相应蛋白质含量（μg） 0 0 20 0 1 1 19 0.5 2 2 18 1 3 4 16 2 4 8 12 4 5 12 8 6 6 16 4 8 7 20 0 10 2. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀；
3. 各孔加入200μL BCA工作液；
4. 把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；
5. 稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20μL，加入BCA工作液200μL，充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在 562nm波长下比色，记录吸光值；
6. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释液总体积（20μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单 位：μg/μL）。
四. 注意事项
1. 配制好的混合BCA工作液室温24小时内稳定。
2. 加入BCA工作液后，也可以在室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升 高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间。
3. 待测样品浓度在50～2000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
4. BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于1mM.不适用BCA法时 建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
5. 操作时要带手套。 五、储存
BCA 试剂A 和BCA 试剂B 室温保存，蛋白标准液-20℃冻存。