现代分子生物学习题及答案
一、填空题 1． 基因工程是70年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2． 基因工程的两个基本特点是： (1)分子水平上的操作，(2)细胞水平上的表达
3． 基因克隆中三个基本要点是：克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择
4． 通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小 的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的限制性酶切图谱。 5． 限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自属名的第一个字母，第二、三两个字母取自_种名的前两个字母，第四个字母则用株名表示。 6．部分酶切可采取的措施有：(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积等。
7．第一个分离的限制性内切核酸酶是EcoK；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_ EcoRl。 8．限制性内切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同，但识别的序列都是GGCC，它们属于异源同工酶。
9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_枯草杆菌蛋白酶切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性： (1) 5'-3'合成酶的活性； (2) 3'-5'外切核酸酶的活性。
10．为了防止DNA的自身环化，可用碱性磷酸酶去双链DNA_5’端的磷酸基团。
11．EGTA是_Ca2+_离子螯合剂。
12．测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶，它只有_ 5'-3'合成酶的活性，而没有3'-5'外切酶的活性。
13．切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用DNA聚合酶I的__5'一3'外切核酸酶和5'一3'合成酶的作用。
14．欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用____ S1核酸酶切割或DNA聚
合酶补平。
15．反转录酶除了催化DNA的合成外，还具有__核酸水解酶H的作用，可以将DNA-
RNA杂种双链中的_RNA_水解掉。
16．基因工程中有3种主要类型的载体：质粒DNA，病毒DNA，质粒和病毒DNA杂合体。
17．就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：__复制区： 含有复制起点；选择标记： 主要是抗性基因；克隆位点： 便于外源DNA的插入。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。
18． 一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测
不出质粒，这种现象叫 质粒消除(或治愈) 。
19． pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于pMBl ，它的四环素抗性基 因来自于pSCl01，它的氨苄青霉素抗性基因来自于pSF2124(R质粒)。
20．YAC的最大容载能力是1000kb，BAC载体的最大容载
能力是 300kb 。
21．pSCl01是一种 严紧 复制的质粒。
22．pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过pBR322和M13
两种质粒改造而来。它的复制子来自 pMBl ，Amp
抗性基因则是来自 转座子。
23．噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增； 二是对某些噬菌体(如?噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽。
24． 野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是没有合适的限制性内切核酸酶识别位点和 选择标记。 25． 黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子
来自质粒、COS位点序列来自 ?噬菌体，最大的克隆片段达到45 kb。
26． 野生型的?噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：(1) 分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记
27．噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是复制区，而来自噬菌体的主要结构是 IG区 。
28．?噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA片段后，总的长度应在噬菌体基
因组的 75％～105％ 的范围内。
29． 在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目的是
螯合Mg2+离子，抑制核酸酶的活性 。
30． 用乙醇沉淀DNA时，通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子，如NaCl和NaAc，
其目的是 中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力。
31． 引物在基因工程中至少有4个方面的用途：(1)合成探针；(2)合成cDNA；(3)用于PCR反应；(4)进行序列分析 32．Clark发现用Taq DNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端，而是有一个突出
碱基末端的双链DNA分子。根据这一发现设计了克隆PCR产物的T—载体。
33．在cDNA的合成中要用到S1核酸酶，其作用是切除在 第二链合成时形成的发夹环 34．乙醇沉淀DNA的原理是乙醇使DNA分子脱水。
35． 假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件：
(1)保持正确的可读框 (2)能够使其转录的启动子 (3)具有翻译的起始和终止信号
36． 受体细胞的感受态是接受外源DNA的生理状态_。 37． DNA重组连接的方法大致分为四种：(1)黏性末端连接； (2)平末端连接；(3)同聚物接尾连接；(4)接头连接法。