高效液相色谱法含量测定操作规程

高效液相色谱法含量测定

1检验方法

高效液相色谱法 2检验原理

高效液相色谱法系采用高压输液泵,将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱,对样品进行测定的色谱方法。注入样品,由流动相带入柱内,各组分在柱内被分离,并依此进入检测器,由数据处理系统记录和处理色谱信号。 3检验试剂

甲醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)、纯水(高纯水)、磷酸等。 4供试品溶液制备

取要测试的供试品适量,参照《药典》及《制剂规范》,用规定的溶剂适宜的提取精制方法,配制成一定浓度的供试品溶液。供试品溶液注入色谱柱前要经适宜的0.45nm的滤膜滤过。 5对照品溶液制备

根据供试品所要测定的成分取相应的对照品,用适宜的溶剂配制成相应浓度的对照品溶液。 6流动相配制

用高纯度的试剂配制流动相,水应为新鲜配制的高纯水。配制好的流动相通过适宜的0.45nm的滤膜滤过,用前脱气。 7操作

7.1打开自动进样器、检测器、泵、柱温箱,进入工作站。 7.2自动进样器排气

自动进样器排气用50%甲醇(用前脱气),点击自动进样器界面上的purge键,自动排气25分钟。

7.3泵排气

分析界面中,设置方法参数,下载方法参数。用流动相冲洗吸滤头,再把吸滤头浸入流动相中,逆时针旋转排气阀90-180度,点击purge键,排气3-4分钟,顺时针旋转排气阀90-180度,激活仪器。 7.4进样操作

7.4.1.将对照品溶液和供试品溶液分别置于样品瓶中,盖上带有垫片的瓶盖,顺时针旋紧,7.4.2将样品瓶按顺序放置于样品瓶架上。

7.4.3设置方法参数,选择波长、柱温、流速、结束时间等,下载并保存方法文件,待色谱系统充分稳定,基线平直。

7.4.4设置批处理分析表。分析界面主项目中,点击批处理分析,依次设置样品瓶号、样品瓶架号、样品名、方法文件、数据文件、进样体积,保存批处理分析表,点击批处理分析开始,开始数据采集。

7.4.5不同浓度的对照品溶液和同一浓度的供试品溶液应分别进样不少于5针。 7.5色谱数据的收集处理 7.5.1 建立标准曲线

7.5.1.1再解析界面中,选择要处理的对照品数据的其中一个数据,点击向导,出现化合物表向导,选择最小面积,点击下一步,选择有效峰,点击下一步,输入浓度单位,最大级别数,点击下一步,输入化合物名,依次输入几个对照品溶液浓度,点击完成。保存方法文件。 7.5.1.2在方法中,打开上述所保存的方法文件,出现校准曲线视图,将相应浓度的对照品色谱数据拖至数据文件相应的级别中,形成标准曲线图,查看R数值不大于0.9999,表明线 性关系良好,方法文件另存为标准曲线。

7.5.2收集处理供试品溶液色谱数据

7.5.2.1打开供试品溶液其中一针的色谱图,用上述建立的标准曲线加载方法参数,计算出此针供试品的含量。

7.5.2.2依次计算其余几针供试品溶液的含量。

7.5.2.3同一浓度供试品溶液连续进样5针以上,相对标准偏差应不大于2%,表明样品稳定性及重复性良好。

7.5.2.4收集上述供试品含量,计算平均含量,得出此供试品的含量。 8清洗和关机

8.1分析和再解析完毕后,用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统,直至基线平直。 8.2用10%甲醇冲洗泵头。

8.3退出工作站,关闭自动进样器、检测器、泵、柱温箱。 9注意事项

9.1色谱柱连接要依照箭头指示的上下方向,两端口要拧紧。

9.2使用的流动相应与仪器系统原保存的溶剂互溶,如不能互溶,先用异丙醇进行过渡。 9.3进样前,色谱柱应用流动相充分冲洗平衡。

9.4工作期间,保持环境安静,温度恒定,减少外界干扰。

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