《第一章 生命大分子物质的制备》习题
1、作为现代生化制备的主要对象的蛋白质、核酸等生物大分子有何特点？
（1）成分复杂：生物材料的组成极其复杂，常常包含有数百种乃至几千种化合物。有的生物大分子在分离过程中还在不断的代谢，所以生物大分子的分离纯化方法差别极大，想找到一种适合各种生物大分子分离制备的标准方法是不可能的。
（2）含量甚微：许多生物大分子在生物材料中的含量极微，只有万分之一、几十万分之一，甚至几百万分之一。分离纯化的步骤繁多，流程又长，有的目的产物要经过十几步、几十步的操作才能达到所需纯度的要求。
（3）易变性易被破坏：许多生物大分子一旦离开了生物体内的环境时就极易失活，因此分离过程中如何防止其失活，就是生物大分子提取制备最困难之处。过酸、过碱、高温、剧烈的搅拌、强辐射及本身的自溶等都会使生物大分子变性而失活，所以分离纯化时一定要选用最适宜的环境和条件。
（4）具经验性：生物大分子的制备几乎都是在溶液中进行的，温度、pH值、离子强度等各种参数对溶液中各种组成的综合影响，很难准确估计和判断，因而实验结果常有很大的经验成份，实验的重复性较差，个人的实验技术水平和经验对实验结果会有较大的影响。
（5）均一性的相对性：生物大分子制备物的均一性（即纯度）的鉴定，通常只采用一种方法是不够的，必须同时采用2～3种不同的纯度鉴定法才能确定。 2、生物物质制备方案的设计基本原则是什么？
生物物质的制备一般包括初始阶段、中间阶段和精制阶段。在制备方法的选择上，初始阶段宜选择粗放、分辨率低、快速、有利于缩小样品体积和减少后工序的方法，主要考虑样品量和处理速度两个指标；中间阶段选择的方法应在考虑样品处理量的基础上适当提高分辨率。精制阶段宜选择精确、分辨率高、需样品少的方法。
在安排各种分离纯化方法的使用程序时应注意：（1）不适宜连续使用同一种分离纯化方法，应该交叉使用，因为每一步分离后，性质相似的物质聚在一块；（2）使用顺序还要考虑到有利于减少工序、提高效率。
3、综合评价生物物质制备步骤方法的好坏应从哪些方面进行？
每一个制备步骤方法的好坏，除了从分辨本领和重现性二方面考虑外，还注意方法本身的回收率和纯化倍数，特别是制备某些含量很少的物质时，回收率的高低十分重要。因此综合评价试验方案的优劣应从分辨本领、重现性、回收率和纯化倍数等方面进行。
一个好的制备方法应该使纯化倍数和收得率都同时有较大提高。但在实际过程中，随纯化倍数的提高，收得率是逐渐降低的。因此应该根据材料的来源难易（难——收得率优先考虑，易——纯化倍数优先考虑）和制备物的目的等方面来综合评定方法的优劣。
4、利用下表中的方案制备长春花Strictosidine合成酶，现已测得各步骤总蛋白和总活力结果，试完成下表。
步骤
（1）粗抽提液 （2）硫酸铵沉淀
总蛋白 （mg） 654 466
总活力 （nKat） 5.2 5.1
比活力 （nKat/mg）
产率 （%）
提纯 倍数
（3）DEAD纤维素柱层析 （4）羟基磷灰石柱层析 （5）Sephadex G-75凝胶柱层析 （6）等点聚焦 38.7 5.9 0.72 0.08 3.9 3.8 2.0 0.5
5、提取生物活性物质时，活性保护性措施有哪些？
提取一些具有生理活性的物质时，除了考虑被提取物溶解度外，还应考虑被提取物活性的保护。对于一些生物大分子如蛋白质、酶和核酸来说，主要措施有如下几点：（1）采用缓冲系统；（2）加入保护剂；（3）抑制水解酶的破坏；（4）其它一些特殊要求的保护措施。 6、蛋白质、DNA和RNA的常用提取方法有哪些？
（1）蛋白质和酶的提取方法：水溶液提取、、有机溶剂提取
（2）DNA的提取方法：浓盐法、、阴离子去污剂法、苯酚抽提法、水抽提法 （3）RNA的提取方法：苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。
7、提取组织中的胰岛素时，为什么采用68％乙醇溶液（用草酸调溶液的pH为2.5～3.0）为溶剂进行提取。
胰岛素可溶于稀酸、稀碱和稀醇溶液，但在组织中与其共存的糜蛋白酶对胰岛素有极高的水解活性，采用68％乙醇溶液（用草酸调溶液的pH为2.5～3.0）进行提取，可以从下面三个方面抑制了糜蛋白酶的水解活性：
①68％的乙醇可以使糜蛋白酶暂时失活； ②草酸可以除去激活糜蛋白酶的Ca++；
③选用pH2.5～3.0，是糜蛋白酶不宜作用的pH值。
《第二章 常用生物化学检验技术》习题
1、蛋白质的化学物理检测方法主要有哪些？各方法的基本原理是什么？
紫外吸收法：苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸等氨基酸在280nm波长左右具有紫外吸收，且吸光度与其浓度成线性，根据此性质可用于蛋白质的定量测定。
凯氏定氮法：该法根据一般蛋白质含氮量为16%的特点，将样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。
双缩脲法：双缩脲在碱性溶液中与Cu2+结合生成紫色络合物，这一呈色反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中的肽键类似双缩脲结构，故亦能呈双缩脲反应。在一定的浓度范围内，颜色深浅与蛋白质含量呈线性关系。蛋白质浓度越高，体系的颜色越深。反应产物在540nm处有最大光吸收。
福林酚试剂法：Folin-酚试剂由试剂A和试剂B两部分组成。在Folin-酚试剂法中，蛋白质中的肽键首先在碱性条件下与酒石酸钾钠-铜盐溶液（试剂A）起作用生成紫色络合物（类似双缩脲反应）。由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸的存在，该络合物在碱性条件下进而与试剂B（磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成）形成蓝色复合物，其呈色反应颜色深浅与蛋白质含量成正比。
考马斯亮蓝法：考马斯亮蓝G-250存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。考马斯亮蓝G-250在酸
性游离状态下呈棕红色，最大光吸收在465nm，当它与蛋白质结合后变为蓝色，最大光吸收在595nm。
2、糖类的化学检测方法主要有哪些？
兰－爱农（Lane-Eynon）法、斐林试剂快速法（GB法）、碘量法、铜试剂法、高锰酸钾法
3、核酸的化学检测方法主要有哪些？ 定磷法、二苯胺法和地衣酚法
4、凯氏定氮法的基本原理是什么？其主要操作步骤包括哪些？该法中加入硫酸钾和硫酸铜的作用是什么？
原理：样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。
主要操作步骤：消化、蒸馏、滴定
加入硫酸钾可以提高溶液的沸点而加快有机物的分解，硫酸铜主要作为催化剂，同时可以指示消化终点的到达。
5、放射自显影技术的基本原理是什么？
其原理是将放射性同位素（如14C和3H）标记的化合物导入生物体内，经过一段时间后，将标本制成切片或涂片，涂上卤化银乳胶，经一定时间的放射性曝光，组织中的放射性即可使乳胶感光。然后经过显影、定影处理显示还原的黑色银颗粒，即可得知标本中标记物的准确位置和数量。
6. 生物检测内容主要有哪些？安全性检测包括哪些内容？
生物检测内容主要包括生物效价测定和安全性试验。安全性检测主要包括毒性试验、局部刺激性试验、溶血实验、热原试验、过敏试验和变异原试验。
7. 兰-爱农法测定糖类的基本原理是什么？
兰-爱农法是指以次甲基蓝作为指示剂，直接将还原糖滴定到斐林试剂中进行测定的方法。斐林试剂中的酒石酸钾钠铜氧化还原糖分子中的游离羰基，本身被还原氧化亚铜红色沉淀。由于次甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜全部还原后，过量1滴还原糖使次甲基蓝还原，蓝色消失而达滴定终点。
《第三章 电泳技术》习题
1、什么是电渗现象？其对电泳过程有何影响
液体在电场中，由于支持介质表面可能会存在一些带电基团，吸附一些带相反电荷的离子，在电场的作用下向电极方向移动，形成介质表面溶液的流动，这种现象就是电渗。
如果电渗方向与电泳方向相同，则加快电泳速度；如果电渗方向与电泳方向相反，则降低电泳速度。