实验六 凝胶渗透色谱法测定分子量
聚合物分子量具有多分散性，即聚合物的分子量存在分布。不同的聚合方法、聚合工艺
会使聚合物具有不同的分子量和分子量分布。分子量对聚合物的性能有十分密切的关系。而分子量分布的影响也不可忽视。当今高分子材料已向高性能化发展，类似分子量分布等高一
层次的高分子结构的问题，越来越引起人们的重视。
自高分子材料问世以来，人们不断探索分子量分布的测定方法。直到60年代凝胶渗透色谱诞生。成为迄今为止最为有效的分子量分布的测定方法。三十多年来，凝胶渗透色谱技术得到了很大的发展，表现在色谱柱体积减小而分离效率提高；检测器精度提高。在线分子量检测技术得到应用；并随着计算机的发展，数据处理得快速、精确、信息量增加也更趋明显。
一、实验目的：
1． 了解凝胶渗透色谱的原理；
2． 了解凝胶渗透色谱的仪器的构造和凝胶渗透色谱的实验技术； 3． 测定聚苯乙烯样品的分子量分布。 二、实验原理：
凝胶渗透色谱（Gel Permeation Chromatography.简称GPC）也称为体积排除色谱（Size Exclution Chromatograph.简称SEC）是一种液体（液相）色谱。和各种类型的色谱一样，GPC/SEC的作用也是分离，其分离对象是同一聚合物中不同分子量的高分子组分。当样品中不同分子量的高分子组分的分子量和含量被确定，也就找到了聚合物的分子量分布，然后可以很方便地对分子量进行统计，得到各种平均值。
一般认为，GPC/SEC是根据溶质体积的大小，在色谱中体积排除效应即渗透能力的差异进行分离。高分子在溶液中的体积决定于分子量、高分子链的柔顺性、支化、溶剂和温度，当高分子链的结构、溶剂和温度确定后，高分子的体积主要依赖于分子量。
凝胶渗透色谱的固定相是多孔性微球，可由交联度很高的聚苯乙烯、聚丙烯酸酰胺、葡萄糖和琼脂糖的凝胶以及多孔硅胶、多孔玻璃等来制备。色谱的淋洗液是聚合物的溶剂。当聚合物溶液进入色谱后，溶质高分子向固定相的微孔中渗透。由于微孔尺寸与高分子的体积相当，高分子的渗透几率取决于高分子的体积，体积越小渗透几率越大，随着淋洗液流动它在色谱中走过的路程就越长，用色谱术语就是淋洗体积或保留体积增大。反之，高分子体积增大，淋洗体积减小，因而达到依高分子体积进行分离的目的。基于这种分离机理，GPC/SEC的淋洗体积是有极限的。当高分子体积增大到已完全不能向微孔渗透，淋洗体积趋于最小值，为固定相微球在色谱中的粒间体积。反之，当高分子体积减小到对微孔的渗透几率达到最大时，淋洗体积趋于最大值，为固定相的总体积与粒间体积之和，因此只有高分子的体积居两者之间，色谱才会有良好的分离作用。对一般色谱分辨率和分离效率的评定指标，在凝胶渗透色谱中也延用。
色谱需要检测淋出液中的含量，因聚合物的特点，GPC/SEC最常用的是示差折光指数检测器。其原理是利用溶液中溶剂（淋洗液）和聚合物的折光指数具有加和性，而溶液折光指数随聚合物浓度的变化量?n/?c值一般为常数，因此可以用溶液和纯溶剂折光指数之差（示差折光指数）?n作为聚合物浓度的响应值。对于带有紫外线吸收基团（如苯环）聚合物，也可以用紫外吸收检测器，其原理是根据比儿定律吸光度与浓度成正比，用吸光度作为浓度的响应值。
图6-1是GPC/SEC的构造示意图，淋洗液通过输液泵成为流速恒定的流动相，进入紧密装填多孔性微球的色谱柱，中间经过一个可将溶液样品送往体系的进样装置。聚合物样品进样后，淋洗液带动溶液样品进入色谱柱并开始分离，随着淋洗液的不断洗提，被分离的高分
子组分陆续从色谱柱中淋出。浓度检测器不断检测淋洗液中高分子组分的浓度响应，数据被记录最后得到一张完整的GPC/SEC淋洗曲线。如图6-2。
图6-1 GPC/SEC的构造
图6-2 GPC/SEC淋洗曲线和“切割法”
淋洗曲线表示GPC/SEC对聚合物样品依高分子体积进行分离的结果，并不是分子量分布曲线。好在实验证明淋洗体积和聚合物分子量有如下关系：
lnM=A—BVe 或 logM=Aˊ—BˊV (1)
式中M为高分子组分的分子量，A、B（或Aˊ、Bˊ）与高分子链结构、支化以及溶剂温度等影响高分子在溶液中的体积的因素有关，也与色谱的固定相、 体积和操作条件等仪器因素有关，因此（1）式称为GPC/SEC的标定（校正）关系。（1）式的适用性还限制在色谱固定相渗透极限以内，也就是说分子量过高或太低都会使标定关系偏离线性。一般需要用一组已知分子量的窄分布的聚合物标准样品（标样）对仪器进行标定，得到在指定实验条件，适用于结构和标样相同的聚合物的标定关系。
GPC/SEC的数据处理，一般采纳用“切割法。在谱图中确定基线后，基线和淋洗曲线所包围的面积是被分离后的整个聚合物，依横坐标对这块面积等距离切割。切割的含义是把聚合物样品看成由若干个具有不同淋洗体积的高分子组分所组成，每个切割块的归一化面积（面积分数）是高分子组分的含量，切割块的淋洗体积通过标定关系可确定组分的分子量，所有切割块的归一化面积和相应的分子量列表或作图，得到完整的聚合物样品的分子量分布结果。因为切割是等距离的，所以用切割块的归一化高度就可以表示组分的含量。切割密度会影响结果的精度，当然越高越好，但一般认为，一个聚合物样品切割成20块以上，对分子量分布描述的误差已经小于GPC/SEC方法本身的误差，当用计算机记录、处理数据时，可设定切割成近百块。用分子量分布数据，很容易计算各种平均分子量，以Mn和MW为例：
Mn?(?Wi/Mi)?1??Hi/?(iiiHi) （2） MiMW??WiMi??HiMi/?Hi （3）
iii式中，Hi是切割块的高度。
实际上GPC/SEC的标定是困难的，因为聚合物标样来之不易。商品标样品种不多且价格昂贵，一般只用聚苯乙烯标样，但聚苯乙烯的标定关系并不适合其他聚合物。研究者从分离机理和高分子体积与分子量的关系，发现了GPC/SEC的普适校正关系： ㏑M[η]=Au-BuVe 或logM[η]=Auˊ-BuˊVe （4）
式中[η]是高分子组分的特性粘数，Au、、Bu（或Auˊ、Buˊ）为常数，与（1）式不同这两个常数不再和高分子链结构、支化有关，（4）式中为仅与仪器、实验条件有关而对大部分聚合物普适的校正关系。[η]可用Mark-Houwink方程代人，通过手册查找常数K、α。但是，不少聚合物在GPC/SEC常用溶剂和实验温度下的K、α值并没有报导，即使能够查到，其准确性也很难判断，因此利用普适校正关系还是受到很大的限制。
GPC/SEC的分子量在线检测技术，从根本上解决了分子量标定问题。目前技术比较成熟的是光散射和特性粘数检测顺，前者检测淋洗液的瑞利比，直接得到高分子组分的分子量；后者则检测淋洗液的特性粘数，利用普适校正关系来确定组分的分子量。此外，利用分子量响应检测器，还能得有关高分子结构的其他信息，使凝胶渗透色谱的作用进一步加强。
三、仪器与试剂:
1、组合式GPC/SEC仪（美国Waters公司），分析天平、13mm微孔过滤器； 2、淋洗液（溶剂）：四氢呋喃（AR），重蒸后用0.45μm孔径的微孔滤膜过滤； 3、被测样品：悬浮聚合的聚苯乙烯； 4、标准样品：分子量窄分布的聚苯乙烯； 5、器皿：配样瓶，注射针筒。 四、实验步骤: 1、 样品配制
选取十个不同分子量的标样， 按分子量顺序1、3、5、7、9和2、4、6、8、10分为两组，每组标样分别称取约2mg混在一个配样瓶中，用针筒注入约2ml溶剂，溶解后用装有0.45μm孔径的微孔滤膜的过滤器过滤；
在配样瓶中称取约4mg被测样品，注入约2ml溶剂，溶解后过滤。 2、 仪器观摩
了解GPC/SEC仪各组成部分的作用和大致结构，了解实验操作要点。接通仪器电源，设定淋洗液流速为1.0ml/min、柱温和检测温度为30℃。了解数据处理系统的工作过程，但本实验将数据处理系统仅用作记录仪，数据处理由人工完成，以便加深对分子量分布的概念和GPC/SEC的认识。 3、 GPC/SEC的标定
待仪器基线稳定后，用进样针筒先后将两个混合标样溶液进样，进样量为100μl，等待色谱淋洗，最后得到完整的淋洗曲线。从两张淋洗曲线确定共十个标样的淋洗体积。 4、 样品测定
同上法，将样品溶液进样，得到淋洗曲线后，确定基线，用“切割法”进行数据处理，切割块数应在20以上。 五、数据处理：
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