目镜测微尺校正完毕后，取下镜台测微尺，换上细菌染色制片。先用低倍镜和高倍镜找到标本后，换油镜测定酿酒酵母的直径和枯草芽孢杆菌的宽度和长度。测定时，通过转动目镜测微尺和移动载玻片，测出细菌直径或宽和长所占目镜测微尺的格数。最后将所测得的格数乘以目镜测微尺每格所代表的的长度，即为该菌的实际大小。
值得注意的是，和动植物一样，同一种群中的不同细菌细胞之间也存在个体差异，因此在测定每一种细菌细胞的大小时应至少随机选择10个细胞进行测量，然后计算平均值。 4、测定完毕：
测量完毕后取出目镜测微尺，将接目镜放回镜筒，再将目镜测微尺和镜台测微尺分别用擦镜纸擦干净，放回盒内保存。 （2）显微镜计数 1、菌悬液稀释：
按照实验所需倍数稀释菌悬液，本实验将酿酒酵母稀释了20倍，得到的适合计数的菌悬液。 2、检查血细胞计数板：
在加样前，应先对血细胞计数板的计数室进行镜检。若有污物，可用自来水冲洗，再用95%的乙醇棉球轻轻擦洗，然后用吸水纸吸干或用电吹风吹干。 计数板上的计数室的刻度非常精细，清洗时切勿使用刷子等硬物，也不可用酒精灯火焰烘烤计数板。 3、加样品：
将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，再用镊子轻压盖玻片，以免因菌液过多将盖玻片顶起而改变了计数室的容积。加样后静置5min，使细胞或孢子自然沉降。取样时先要摇匀菌液，加样时计数室不可有气泡产生。 4、显微镜计数：
将加有样品的血细胞计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释
度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内有5-10个菌体为宜。每个计数室选5个中格（可选4个角和中央的1个中格）中的菌体进行计数。位于格线上的菌体一般只数上方或右边线上的。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。 5、清洗：
使用完毕后，将血细胞计数板及盖玻片按前面介绍的程序进行清洗、干燥，放回盒中，以备下次使用。 五、实验结果：
1、目镜测微尺的标定结果：
目镜测微尺每物镜 物镜倍数 目镜测微尺格数 镜台测微尺格数 格代表的长度/μm 低倍镜 高倍镜 油镜
2、微生物大小的测定 酵母菌大小的测定
组别 长度（μm）
枯草芽孢杆菌大小测定
组别 宽度(μm) 长度(μm)
3、酵母菌数量的测定
1 0.8 2.25 2 0.8 2.16 3 0.7 1.95 平均值 0.77 2.12 1 3.6 2 3.12 3 3.12 平均值 3.28 10 40 100 5 45 11 5 11 1 10 2.4 0.9 稀释20倍，计数板25中格*16小格
实验次数 各中格中菌数 总菌数 稀释倍数 平均值 菌数(个/mL) 1 4 5 2 3 1
六、实验小结：
实验成功应注意的事项有：
1、微生物大小测定时，观察时光线不宜过强，否则难以找到镜台测微尺的刻度；换高倍镜和油镜校正时，务必十分细心，防止接物镜压坏镜台测微尺和损坏镜头。
2、使用镜台测微尺进行校正时，若一时无法直接找到测微尺，可先对刻尺外的圆圈线进行准焦后再通过移动标本推进器进行寻找。
3、细菌个体微小，在进行细胞大小测定时一班应尽量使用油镜，以减少误差。 4、细菌在不同的生长时期细胞大小有时会有较大变化，若需自己制样进行细胞大小测定时，应注意选择处于对数生长期的菌体细胞材料。
5、活细胞是透明的，因此在进行显微计数或悬滴法观察时均应适当减低视野宽度，以增大反差。
6、进行显微技术时应先在低倍镜下寻找大方格的位置，找到计数室后将其移至视野中央，再换高倍镜观察和计数。 七、思考题：
1．为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？
答：由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 2．在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大小时，其测定结果是否相同？为什么？
答：不相同，不同放大倍数下测量的精度不同。
3．结合你的实验体会，总结哪些因素会造成血球计数板的计数误差？应如何避免？
答：（1）悬菌液未摇匀时取样，摇匀悬菌液。 （2）悬菌液浓度过高或过低，应适当梯度稀释。
（3）菌液滴到盖玻片上，重复计数使结果偏大，滴加菌液时缓慢谨慎，使菌液全部流入计数室内。
（4）计数室的选择不具有代表性看，不选相邻的计数室计数，可以选4个角和中间的任意小室计数。
（5）一会儿数芽体一会儿不数芽体，标准从一而终，数芽体或者不数。 （6）漏数了边线或多数了边线，一般选择上和左边线计数，即“计上不计下，计左不计右”。