槐米中芦丁的提取、分离和鉴定

槐米中芦丁的提取、分离和鉴定

张景清

(广西科技大学生物与化学工程学院 广西柳州 545006)

1.摘要:本实验以槐米为原料,采用碱提酸沉法从槐米中提取芦丁,使我们学习和掌握提取

和精制芦丁的具体作方法,并了解如何对黄酮类化合物鉴定。该方法提取率高达26.3%,对提取的芦丁做了薄板识别及紫外分析,并与标准品做对比,结果表明提取的芦丁与标准品的纯度大致相等。

2.引言

芦丁,亦称芸香苷,广泛存在于植物界中,现已发现的含芦丁的植物有50种以上,其中以槐米和荞麦叶中含量最高,可作为大量提取芦丁的原料。芦丁属于黄酮类化合物,在心脑血管疾病的治疗上起到了举足轻重的作用,具有VP样作用。有助于保持毛细血管正常弹性,同时还有抗炎、抗病毒、抗氧化等作用。其临床效果肯定,副作用少,同时也是一种植物原料药[1]。黄酮类化合物的提取方法较多主要是依据其溶解性及酸性。黄酮类化合物的提取方法一般有:①热水提取法②醇提法③碱提酸沉法④系统溶剂提取法本实验碱提酸沉法通过从槐米中提取芦丁,使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体操作方法,并了解如何对黄酮类化合物鉴定。

3.实验原理

槐米中含芦丁、槲皮素、皂苷、白桦、酯醇等多种成分。芦丁是其主要成分,含量为16%-25%。芦丁属于黄酮类化合物,结构中含有多个酚羟基,呈酸性,苷元为槲皮素,糖基为芸香糖。芦丁为浅黄色细小针状结晶,95-97℃脱水,熔点314℃,可溶于沸乙醇、无水乙醇、乙酸乙酯、丙酮,不溶于石油醚和水。芦丁可溶于碱液中,呈黄色酸化后又析出,故可采用碱提酸沉法得到芦丁产品。然后利用在冷水中不溶,在热水中微溶的溶解度差精制,可获得纯度高的微细针状结晶,最后利用芦丁、槲皮素、及糖的性质予以鉴定。

4.实验部分

4.1实验药品

槐米(市售),氧化钙AR(西陇化工股份有限公司),盐酸AR(西陇科学有限公司),四硼酸钠AR(广东省台山市化工厂),甲醇AR(天津市大茂化学试剂厂),三氯甲烷AR(成都市科隆化学品有限公司),氯仿(分析纯,成都市科龙化工试剂厂),乙醇(分析纯)

4.2实验仪器

JJ200电子天平(常熟市双杰测试仪器厂),SHZ-D(III)循环水式多用真空泵(河南爱博特科技发展有限公司),ZNLC-GS 130*60智能磁力搅拌器(河南爱博特科技发展有限公司),薄层色谱展开缸,紫外分析仪(上海嘉鹏科技有限公司) 4.3实验步骤 4.3.1芦丁的提取

方法一:称取槐米10.0g,在研钵中稍加研碎后,置于500ml烧杯中,加入250ml水,加热搅拌下添加石灰乳,保持PH=8-8.5。加热至80℃左右时加入硼砂0.2g,搅拌下加热至沸20min,稍置,倾出上清液过滤。对残渣用200ml水重复提取一次。弃去残渣,合并滤液。用10%盐酸调PH为5,静置过夜,过滤,用少量蒸馏水洗2-3次,抽干即可得芦丁粗品。

方法二:称取槐米10.0g,在研钵中稍加研碎后,置于500ml烧杯中,加入沸蒸馏水250ml,加热搅拌下继续加热至沸30min,稍置,趁热倾出上清液,以脱脂棉过滤。对残渣用200ml水重复提取一次。趁热过滤,合并滤液。用1%盐酸调PH为5,静置过夜,过滤,用少量蒸馏水洗2-3次,抽干即可得芦丁粗品。 4.3.2芦丁精制

取粗品2.0g转入烧杯中,加入适量蒸馏水(350ml左右),加热至沸添加适量蒸馏水,使之刚好溶解完全,趁热抽滤,静置过夜,使晶体析出。抽滤,用少量水洗2次,在70-80℃下干燥结晶,即可得精制芦丁。 4.3.3芦丁的薄板识别

将实验所得的芦丁用甲醇溶解,并与标准芦丁的甲醇溶液分别点在聚酰胺板上,用氯仿:甲醇(5:4)展开。紫外灯下观察荧光,喷2%三氯化铝乙醇溶液后再观察荧光变化,计算Rf值。

4.3.4紫外光谱的鉴定

配置标准芦丁的甲醇溶液测其之外光谱。取0.5g研磨好的槐米粉末,加10ml甲醇,在超声波下提取5min,过滤,滤液作为芦丁样品溶液。向比色皿中滴加1-2滴芦丁样品溶液,并加入适量甲醇溶液,测其紫外光谱,并与标准芦丁的紫外光谱作对比。

5.结果与讨论

5.1结果 5.1.1提取率

方法一抽滤后得到了1.45g芦丁样品,提取率为14.5%; 方法二抽滤后得到了2.63g芦丁样品,提取率为26.3%; 5.1.2芦丁收率

取2.0g粗产品进行重结晶,最后得芦丁精品1.8g,收率为90% 5.1.3芦丁识别及Rf值得测定

①号板:a标=1cm,a样=2cm,b=5.1cm。则Rf标=0.196,Rf样=0.392 ②号板:a标=1.5cm,a样=2cm,b=4.5cm。则Rf标=0.333,Rf样=0.444 5.1.4紫外光谱的鉴定

吸光度 (T)1.41.21.00.80.60.40.20.0-0.2100 标准芦丁 芦丁样品200300400500600700800900芦丁紫外谱图 波长 (cm-1)

由紫外谱图看出,两峰的位置及形状基本一致,可定性的判断为同一种物质。 5.2讨论

在使用方法一提取芦丁时,收率较低。是因为在碱提时pH调的不够高,影响芦丁的提取率;在酸沉时调的不够低,降低了芦丁的析出。

比较1号和2号的薄板识别,溶剂的前沿和芦丁样品到起始点的距离大致相等,而1号和2号的芦丁标准品的爬板距离明显不同,1号板标准芦丁和芦丁样品的Rf值相差较大,应舍去。2号板标准芦丁和芦丁样品的Rf值相差较小,可能是因为芦丁样品不纯所致。

根据标准芦丁和芦丁样品的紫外谱图可以看出,两样本的出峰位置及形状大致相同,可以判断出实验提取的芦丁较纯。但是在波数为360cm-1处两峰存在少许差异,应该是芦丁样品不纯所致。

6.建议

方法二操作简单、辅助试剂使用量少,建议优先使用。方法一较方法二的收率低,使用方法一的pH最优条件:碱提加热调节pH要高于8,酸沉静置调节pH要低于4。

在50℃以下时,随着提取温度的升高,产率不断增加。但提取温度在50℃以上时,产率无明显改变,所以提取温度以50-60℃为宜。

提取时间也会影响提取率,提取时间小于20min时,随着时间的增加,提取率不断增加。30min后,提取率开始下降。所以提取时间保持在20-30min为宜。

静置析出晶体时,常温静置析出的效果要高于在冰箱内静置析出。随着静置时间的增加,产率也随着增加,但到了6h后,产率变化平缓,综合考虑静置时间为6h-8h为宜。

7.参考文献

[1]钱彦丛,等. 槐叶和龙抓槐叶中芦丁的[J]. 黑龙江医药,2002.435:436.

[2]常瑛,等. 辣蓼中芦丁的薄层及紫外光谱鉴别[J]. 现代生物医学进展,46:47,51. [3]李慧,等. 槐米中芦丁的提取结晶及含量的测定[J]. 陕西中医,2011.1412(32):1413.

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