槐米中芦丁的提取、分离和鉴定
张景清
（广西科技大学生物与化学工程学院 广西柳州 545006）
1.摘要:本实验以槐米为原料，采用碱提酸沉法从槐米中提取芦丁，使我们学习和掌握提取
和精制芦丁的具体作方法，并了解如何对黄酮类化合物鉴定。该方法提取率高达26.3%，对提取的芦丁做了薄板识别及紫外分析，并与标准品做对比，结果表明提取的芦丁与标准品的纯度大致相等。
2.引言
芦丁,亦称芸香苷,广泛存在于植物界中,现已发现的含芦丁的植物有50种以上,其中以槐米和荞麦叶中含量最高,可作为大量提取芦丁的原料。芦丁属于黄酮类化合物,在心脑血管疾病的治疗上起到了举足轻重的作用,具有VP样作用。有助于保持毛细血管正常弹性,同时还有抗炎、抗病毒、抗氧化等作用。其临床效果肯定,副作用少,同时也是一种植物原料药[1]。黄酮类化合物的提取方法较多主要是依据其溶解性及酸性。黄酮类化合物的提取方法一般有：①热水提取法②醇提法③碱提酸沉法④系统溶剂提取法本实验碱提酸沉法通过从槐米中提取芦丁，使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体操作方法，并了解如何对黄酮类化合物鉴定。
3.实验原理
槐米中含芦丁、槲皮素、皂苷、白桦、酯醇等多种成分。芦丁是其主要成分，含量为16%-25%。芦丁属于黄酮类化合物，结构中含有多个酚羟基，呈酸性，苷元为槲皮素，糖基为芸香糖。芦丁为浅黄色细小针状结晶，95-97℃脱水，熔点314℃，可溶于沸乙醇、无水乙醇、乙酸乙酯、丙酮，不溶于石油醚和水。芦丁可溶于碱液中，呈黄色酸化后又析出，故可采用碱提酸沉法得到芦丁产品。然后利用在冷水中不溶，在热水中微溶的溶解度差精制，可获得纯度高的微细针状结晶，最后利用芦丁、槲皮素、及糖的性质予以鉴定。
4.实验部分
4.1实验药品
槐米（市售），氧化钙AR（西陇化工股份有限公司），盐酸AR（西陇科学有限公司），四硼酸钠AR（广东省台山市化工厂），甲醇AR（天津市大茂化学试剂厂），三氯甲烷AR（成都市科隆化学品有限公司）,氯仿（分析纯，成都市科龙化工试剂厂），乙醇（分析纯）
4.2实验仪器
JJ200电子天平（常熟市双杰测试仪器厂），SHZ-D（III）循环水式多用真空泵（河南爱博特科技发展有限公司），ZNLC-GS 130*60智能磁力搅拌器（河南爱博特科技发展有限公司），薄层色谱展开缸，紫外分析仪（上海嘉鹏科技有限公司） 4.3实验步骤 4.3.1芦丁的提取
方法一：称取槐米10.0g，在研钵中稍加研碎后，置于500ml烧杯中，加入250ml水，加热搅拌下添加石灰乳，保持PH=8-8.5。加热至80℃左右时加入硼砂0.2g，搅拌下加热至沸20min，稍置，倾出上清液过滤。对残渣用200ml水重复提取一次。弃去残渣，合并滤液。用10%盐酸调PH为5，静置过夜，过滤，用少量蒸馏水洗2-3次，抽干即可得芦丁粗品。
方法二：称取槐米10.0g，在研钵中稍加研碎后，置于500ml烧杯中，加入沸蒸馏水250ml，加热搅拌下继续加热至沸30min，稍置，趁热倾出上清液，以脱脂棉过滤。对残渣用200ml水重复提取一次。趁热过滤，合并滤液。用1%盐酸调PH为5，静置过夜，过滤，用少量蒸馏水洗2-3次，抽干即可得芦丁粗品。 4.3.2芦丁精制
取粗品2.0g转入烧杯中，加入适量蒸馏水（350ml左右），加热至沸添加适量蒸馏水，使之刚好溶解完全，趁热抽滤，静置过夜，使晶体析出。抽滤，用少量水洗2次，在70-80℃下干燥结晶，即可得精制芦丁。 4.3.3芦丁的薄板识别
将实验所得的芦丁用甲醇溶解，并与标准芦丁的甲醇溶液分别点在聚酰胺板上，用氯仿：甲醇（5:4）展开。紫外灯下观察荧光，喷2%三氯化铝乙醇溶液后再观察荧光变化，计算Rf值。
4.3.4紫外光谱的鉴定
配置标准芦丁的甲醇溶液测其之外光谱。取0.5g研磨好的槐米粉末，加10ml甲醇，在超声波下提取5min，过滤，滤液作为芦丁样品溶液。向比色皿中滴加1-2滴芦丁样品溶液，并加入适量甲醇溶液，测其紫外光谱，并与标准芦丁的紫外光谱作对比。
5.结果与讨论
5.1结果 5.1.1提取率
方法一抽滤后得到了1.45g芦丁样品，提取率为14.5%； 方法二抽滤后得到了2.63g芦丁样品，提取率为26.3%； 5.1.2芦丁收率
取2.0g粗产品进行重结晶，最后得芦丁精品1.8g，收率为90% 5.1.3芦丁识别及Rf值得测定
①号板：a标=1cm，a样=2cm，b=5.1cm。则Rf标=0.196，Rf样=0.392 ②号板：a标=1.5cm，a样=2cm，b=4.5cm。则Rf标=0.333，Rf样=0.444 5.1.4紫外光谱的鉴定
吸光度 (T)1.41.21.00.80.60.40.20.0-0.2100 标准芦丁 芦丁样品200300400500600700800900芦丁紫外谱图 波长 (cm-1)
由紫外谱图看出，两峰的位置及形状基本一致，可定性的判断为同一种物质。 5.2讨论
在使用方法一提取芦丁时，收率较低。是因为在碱提时pH调的不够高，影响芦丁的提取率；在酸沉时调的不够低，降低了芦丁的析出。
比较1号和2号的薄板识别，溶剂的前沿和芦丁样品到起始点的距离大致相等，而1号和2号的芦丁标准品的爬板距离明显不同，1号板标准芦丁和芦丁样品的Rf值相差较大，应舍去。2号板标准芦丁和芦丁样品的Rf值相差较小，可能是因为芦丁样品不纯所致。
根据标准芦丁和芦丁样品的紫外谱图可以看出，两样本的出峰位置及形状大致相同，可以判断出实验提取的芦丁较纯。但是在波数为360cm-1处两峰存在少许差异，应该是芦丁样品不纯所致。
6.建议
方法二操作简单、辅助试剂使用量少，建议优先使用。方法一较方法二的收率低，使用方法一的pH最优条件：碱提加热调节pH要高于8，酸沉静置调节pH要低于4。
在50℃以下时，随着提取温度的升高，产率不断增加。但提取温度在50℃以上时，产率无明显改变，所以提取温度以50-60℃为宜。
提取时间也会影响提取率，提取时间小于20min时，随着时间的增加，提取率不断增加。30min后，提取率开始下降。所以提取时间保持在20-30min为宜。
静置析出晶体时，常温静置析出的效果要高于在冰箱内静置析出。随着静置时间的增加，产率也随着增加，但到了6h后，产率变化平缓，综合考虑静置时间为6h-8h为宜。
7.参考文献
[1]钱彦丛，等. 槐叶和龙抓槐叶中芦丁的[J]. 黑龙江医药，2002.435：436.
[2]常瑛，等. 辣蓼中芦丁的薄层及紫外光谱鉴别[J]. 现代生物医学进展，46：47,51. [3]李慧，等. 槐米中芦丁的提取结晶及含量的测定[J]. 陕西中医，2011.1412(32)：1413.