价值，但不能完全反映病毒复制静息期肝细胞内HBV病毒状态。HBV—DNA阴性并不完全代表体内HBV已被清除，结合“两对半”各项指标更能客观反映体内HBV病毒状态。 4、 HBsAb的定量测定能够对乙肝的预防起到监督作用 HBsAb的定量测定能够对抗体是否真正具有“中和”HBV的免疫力作出正确评价，对乙肝的预防起到监督作用。HBsAb的含量在10mlU/ml以上病人ELISA检测即可呈阳性结果，但并不提示机体都一定具有免疫力，而HBsAb的含量在10—100mlU/ml 之间的样本，定性虽为“阳性”，但此时机体对HBV的免疫力较弱，甚至不能预防HBV感染。只有HBsAb的含量达到100mlU/ml以上时才可确定具有抵抗HBV入侵的作用。作定量检测，可根据HBsAb的含量判断机体对HBV的免疫状态及乙肝苗的免疫效果。因此定量测定对乙肝疫苗免疫力的评价和高危人群预防免疫具有重要意义，特别是在少年儿童预防乙肝方面。 乙肝两对半定量的临床意义
1、 乙肝表面抗原（HBsAg）定量
能极早地检出HBsAg，确证乙肝感染，几乎能与preSl同时检测出。在乙肝病程中大大缩短了窗口期的时间。 由于机体常缺乏对包膜蛋白的免疫应答，HBsAg表达较低，可出现HBsAg、Anti-HBs均阴性的情况，定量检测HBsAg则可避免这些情况的出现。 病毒发生变异后，病毒表达量较低，甚至“定性”检测不出抗原。可检测出HBsAg，并极有可能同时检测出HBsAg、 Anti-HBs。 国内外学者研究表明HBsAg的细胞免疫应答与肝细胞损伤有一定关系。血清中HBsAg含量和病人对HBsAg细胞免疫成反比关系，而肝功能改就则与此种细胞免疫成反比。而定量检测HBsAg是反映这一关系的唯一手段。 一般来说，慢性肝炎HBsAgCOI相对恒定：而活动性肝炎HBsAgCOI往往较高且不稳定。 2、乙肝表面抗体（Anti-HBs）定量 Anti-HBs的定量检测能够地机体是否真正具有“中和”HBV免疫力作为正确评价，避免误误导病人，对乙肝的预防起到监督作用。 Anti-HBs含理在10—100IU/L之间的样本，乙肝两对半定性的结果为阳性，但此时机体对HBV并无中和作用，仍有感染HBV的危险。只有定量检测Anti-HBs在100UI/L以上时才具有抵抗HBV入侵的作用。因此，定量检测乙肝两对半对乙肝疫苗免疫力的评价和高危人群预防具有重要意义。 3、乙能e抗原（HBeAg）定量 HBeAg是乙肝病毒在肝细胞在繁殖时出现的前C/C基因的产物，经蛋白酶水解后HBe蛋白质以非颗粒形式分泌入血清中。在急性HBV感染时，血清中可出现HBeAg，但维持可测水平的时间很短暂（数天—数周）。HBeAg阳性一般是提示有大量病毒存在，是急性乙肝恢复期的首选血清学指标。 由前C基因突变HBV感染所致的急性或慢性乙肝，始终不出HBeAg，但HBV-DNA进行性复制。HBeAg亦在高COI水平波动。与前者HBeAg阳性慢性乙肝类型中的转换期比较，两对半定性均表现为小三阳，但后者主要表现在高HBeAgCOI值，忽高忽低的ALT值和HBV-DNA始终阳性。 4、乙肝e抗体（Anti-HBe定量 由HBV野型株感染所引起的急性或慢性乙型肝炎，其自然史分为HBeAg阳性期和Anti-HBe阳性期。定量监测能明确出HBeAg向Anti-HBe换的时期，即表现为HBeAgCOI下降（含量降低）和Anti-HBeCOI下降（含量升高）的过程。因此，Anti-HBe定量与HBeAg定量联合检测对监测HBV感染的病程及药物的疗效观察有很好的实际意义。 由前C基因突就株HBV感染所致异型慢性乙肝，由于患者始终不出现HBeAg。因此，长期监测患者Anti-HBe含量对判断其预后和转归具有十分重要的价值。 5、乙肝核心抗体（Anti-HBc）定量 乙肝病毒由外壳HBsAg和内核HBcAg组成。乙肝病毒感染期间，一般会产生Anti-HBc，在HBcAg出现后即可从血清中检测到。偶尔也有Anti-HBc阴性的HBV感染者，多见于免疫抑制的病人。 在乙肝感染康复者HBsAg携带者中，Anti-HBc可长期存在。因此，在特殊人群中开展Anti-HBc筛选试验对预防乙肝的传播有重要参考价值。 Anti-HBc定量怀其他HBV试验一同检测有助于乙肝感染的诊断和监测。在其他指标缺乏的情况下（如HBsAg阴性），Anti-HBc定量可能是现存HBV感染的唯一指标。 时间分辨免疫荧光法检测乙型肝炎病毒标志物
临床工作中发现少部分经酶联免疫吸附法（ELISA）检测仅乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和抗HBc IgG阳性的患者，病毒含量却很高。为此，采用时间分辨免疫荧光分析法（TRF）对34例此类患者进行乙型肝炎标志物（HBV M）的检查，现将结果报道如下： 一、 资料与方法 1.病例选择：为2002年2月至9月住院或门诊患者，共34例，男21例，女13例，年龄5~58岁，平均（±）岁。采静脉血分离血清，用ELISA进行HBV标志物（HBV M）检测及HBV DNA定量检查。留取血清置-30℃保存。（1）HBsAg、抗HBc IgG阳性，乙型肝炎e抗原（HBeAg）、抗-HBs、抗-HBc IgM阴性；（2）HBV DNA含量＞104拷贝/ml;（3）近3个月未使用抗病毒药物。每人进行2次抗原抗体检查，结果一致。2次HBV DNA检查，结果相差1个数量级以下。 2.常规HBV M检测：用ELISA法，试剂为上海科华生物工程股份有限公司产品，按产品说明书操作。 DNA含理测定：采用实时荧光定量PCR法，试剂盒购自广州中山医科大学达安基因诊断中心。仪器为美国Perkin Elmer 公司Gene Amp E5700型PCR仪。严格按说明书操作，检测灵敏度为103拷贝/ml。 法检查HBV M：试剂为上海新波生物技术有限公司产品，采用Anytest2000时间分辨检测仪。严格按照说明书操作。 5.统计分析：取HBV DNA含量的对数值进行成组设计的两样本均数比较，行t检验。 二、 结果 M ：用TRF法检查发现，34例患者中HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性者15例，HBsAg、抗-HBe、抗-HBc均阳性者14例，仅HBsAg、抗-HBc阳性者5例。即用ELISA检查时HBeAg假阴性15例，抗-HBe假阴性14例（表1）。 DNA含量：HBeAg及抗-HBc均阴性组、HBeAg阳性组、抗-HBc阳性组HBV DNA含量的对数平均值分别为±、±、±。将前者与后两组分别进行成组设计的两样本均数比较的t检验，t值分别为、，P值均＞，差异无显着性。 三、 讨论 HBV M的变化是评估HBV感染后病情转归的重要依据，也是抗病毒治疗的疗效考核指标之一。通过TRF检查发现，大部分ELISA法检测为HBsAg、抗-HBc阳性模式的患者其实为HBeAg假阴性（15/34，%）及抗-HBe假阴性（14/34，%）。仅少部分可能为病毒变异的结果。研究发现，HBsAg、抗-HBc浓度显着高于正常，ELISA及TRF符全率为100%，抗-HBs浓度明显低于正常，两者符合率为100%。而HBeAg、抗HBe浓度仅稍高于正常，因此ELISA易出现假阴性。目前TRF主要用于激素的检测。随着仪器及试剂的国产化，检测费用的降低，TRF因其突出的高敏感性、特异性强、无放射污染等特点，在HBV M的检测中有着广泛的应用前景。 作者单位：410011长沙，中南大学湘雅二医院肝病研究中心 目前我院已正式开展了乙肝二对半的时间分辨定量分析，其每一项的正常值范围均是由我国卫生部根据美国雅培的标准而制定，其灵敏度，准确度，及精确度都有远远优于一般的ELISA法，乙肝两对半的定量制定将给临床提供一个关于乙肝诊断及疗效，预后判断的更可靠的实验结果。 时间分辨荧光免疫定量测定乙肝两对半的临床意义 ◇ 极大地提高了检测的灵敏度 时间分辨荧光免疫定量技术（TRFIA）检测HBsAg灵敏度可达ml,而酶标（EIASA）检测的灵敏度是2ng/ml,极大地提高检测的灵敏度。因此，在急性乙肝早期能及早检出HBsAg，确证HBV感染，缩短窗口期；其次，可发现低浓度HBsAg携带者；在部分慢性乙肝患者中，由于机体缺乏对HBV包膜蛋白的免疫应答，HBsAg表达较低，酶标检测可出现HBsAg和HBsAb均阴性的情况，TRF技术则可避免这些情况的发生,为正确判断病情提供依据。 ◇ 能动态观察疗效和监测病情 1）定量分析HBsAg和HBsAb的浓度变化，可预见急性乙肝是否处于恢复期。如HBsAg浓度降低，HBsAb浓度逐渐升高，可说明病情正往恢复期发展；反之，HBsAg浓度处于较高水平或上升趋势，而HBsAb一直处于较低水平，则易发展为慢性乙肝或病毒携带者。 2）定量分析HBeAg和HBeAb的浓度变化，可反映病情变化和治疗效果。定量测定能明确检测HBeAg向HBeAb转换的时期，那表现为HBeAg浓度下降和HBeAb升高的过程。高浓度的HBeAg还可以间接提示病毒处于高复制状态,具有较高的传染性.高浓度