的HBeAb一方面提示病情好转，而在某些时候（如肝功能指标很差）则可能与肝坏死、肝硬化、肝癌有关。 3）HBsAb浓度的高低可反映病毒感染的状态。高浓度的抗-Hbc提示乙肝急性感染，恢复期浓度降低。慢性乙肝呈抗-Hbc持续高浓度。而低浓度的抗-Hbc一般为恢复期或既往感染。 4）有利于对慢性肝炎活动性或非活动性的判断。非活动性慢性乙肝各项指标相对稳定，活动性往往呈现进行性变化。 ◇ TRFIA和定量PCR技术可互相补充 血清HBV—DNA荧光定量PCR测定可以直接反映血液中病毒复制状态，具有很多临床应用价值，但不能完全反应病毒复制静息期细胞内HBV病毒状态。HBV—DNA阴性并不完全代表体内HBV已被清除，结合“两对半”各项指标更能客观反映体内HBV病毒状态。 ◇ HBsAb的定量测定能够对乙肝的预防起到监督作用吗？ HBsAb的定量测定能够对抗体是否真正具有“中和”HBV的免疫力作出正确评价，对乙肝的预防起到监督作用。HBsAb的含量在100mlU/ml以上病人ELISA检测即可呈阳性结果，但并不提示机体都一定具有免疫力，而HBsAb的含量在10—100mlU/ml之间的样本，定性虽为“阳性”，但此时机体对HBV的免疫力较弱，甚至不能预防HBV感染。只有HBsAb的含量达到100mlU/ml以上时才可确定具有抵抗HBV入侵的作用。作定量检测，可根据HBsAb的含量判断机体对HBV的免疫状态及乙肝疫苗的免疫效果。因此定量测定对乙肝疫苗免疫力的评价和高危人群预防免疫具有重要意义，特别是在少年儿童预防乙肝方面。 时间分辨荧光免疫分析在乙肝的应用
中南大学湘雅二医院肝病研究中心教授：杨旭
乙肝抗原体测定是诊断乙肝最常用的方法。酶联免疫测定由于操作简便，成本低廉，敏感性和特异性较好，80年代中期以来就成为乙肝抗原体检测最主要的方法。但是本法只能定性，作为定量测定的方法，其重复性很差。据观察，不同乙肝感染者表面抗原的浓度相差800倍,e抗原的浓度相差100倍，仅用“阳性”来表示，实在太粗糙，太不科学，难以满足临床的需要。观察指标的量化是提高诊断水平的基本要求，也是科学发展的必然趋势，因此，进入90年代以来，国外先后推出第四代检测方法：化学发光法、电化学发光法。但是这两个方法需要昂贵的设备，试剂成本高，难以普遍应用。 为了满足临床的需要，根据国情和省情，我科瞄准抗原抗体检测发展的方向，2002年10月引进具有世界先进水平的时间分辨荧光免疫检测仪，在省内率先建交时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）检测乙肝抗原抗体的新方法，我院也是国内少数应用本法检测乙肝的医院之一。时间分辨荧光免疫分析的原理和通常的免疫测定方法基本相同，只是标记物和测定方法不同。时间分辨荧光免疫分析以三价稀土离子（常用的是铕）及其螯合剂代替同位素、荧光素或酶，作为标记抗原或抗体的示踪物，检测未知的抗体或抗原，用特制的时间分辨荧光仪测定最后反应产物中荧光的强度，根据荧光强度来判断待测物质的浓度。在免疫复合物中的稀土离子自身可产生微弱的荧光信号，而当加入增强液以后，稀土离子从免疫复合物中释放出来，受到激发光照射时，荧光强度可增强100万倍。稀土离子发出性荧光不仅光度强，而且寿命长。反应系统中许多物质也可以发出荧光，但他们的荧光的寿命极短，因此，通过简单的延时检测，就可以将特异性荧光与非特异性荧光区别开来，所以这个方法的名称冠以“时间分辨”。时间分辨荧光免疫分析是一种超灵敏的高度特异性的检测技术，是今后抗原抗体检测发展的方向，其灵敏度比化学发光和电化发光高10倍~100倍，比放免法和酶标法高1000倍以上。据我科现场测评，其特异性、敏感性和重复性均极强，几乎没有假阴性，假阳性率低于%，同一标本连续20次检测CV＜1%，同一批（10个）连续3天检测CV= %，检测后反应板连续3天重复阅读CV＜1%。 这一方法的建立必将极大的提高我科的乙肝诊断水平，使我们对乙肝感染者的病情、预后、病毒复制程度、抗病毒药物的疗效等的判断更变科学。乙肝时间分辨荧光免疫分析试剂盒共5项，包括表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体和核心抗体，可任选1项或多项，全套需备血3ml（不加抗凝剂），记账后（每项45元）标本送传染科实验室，当天下午出结果。 时间分辨荧光免疫测定技术在HBV—M定量检测及临床应用分析 【摘要】目的 研究乙肝病毒感染者血清免疫学标志物，利用时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）检测其含量结果与ELISA法结果的任合程度、灵敏度、特异性；了解TRFIA测定HBV-M的准确性、可行性及临床应用价值。方法 分别用TRFIA和ELISA法测定260例随机血清标本HBV-M结果及含量。结果HBsAg( ELISA) 阳性36例，TRFIA阳性40例，x2=4,P＜,两法符合率%；抗-HBs(ELISA)阳性130性，TRFIA阳性160例，x2=30，P＜，两法符合率%；HBeAg(ELISA)阳性17例，TRFIA阳性18例，x2=1，P＞，两法符合率%；抗-HBe(ELISA)阳性86例，TRFIA阳性73例, x2=，P＜，两法符合率%；抗-HBc(ELISA)阳性54例，TRFIA阳性72例，x2= ，P＜，两法符合率%；结论TRFIA法与ELISA法比较，特异性、敏感性都高，TRFIA作用于HBV-M含量检测可为临床间接反映病毒的感染状况，同时也为临床疗效提供动力学观察及接种乙肝疫苗提供依据。 关键词HBV-M时间分辨荧光免疫分析技术 酶联免疫吸附试验 【文献标识码】A【文章编号】1606-8106（2004）06-0486-02 The time-resolved fluoroimmunoassay TRFIA used in the HBV-M ration test and the analysis on clinical application Cai Yihe Department of Laboratory,Chaozhou Central Hospital,Guangdong521021. 【Abstract】Objective to study the substance of blood immunity HBV-M,Applying,the technology of TRFI-A to test the result and then compare itwith the result of the ELISA in fixness,sensivity and specificity and to compre-hcnd the accuracy,feasibility and the value of clinical application in testing HBV-M by to deter-minate the result and content of260and HBV-M by TRFIA and ELISA HBsAg positre is36by ELISA,and40by TRFIA, x2=4,P＜,the fix rate %;anti-HBs positive is130by ELISA,and160by TRFIA, x2=30，P＜；the fix rate %；HBeAg positive is17by ELISA,and18by TRFIA, x2=1，P＞；the fix rate %；Anti-HBe positive is86by ELISA,and73by TRFIA, x2=，P＜，the fix rate %；Anti-HBc positive is54by ELISA,and72by TRFIA, x2= ，P＜，the fix rate %.Con-clusion TRFIA has higher specificity and sensitivity than ELISA,TRFIA in testing HBV-M content may indirectly neflect the virus infection in clinical and offer dynamics observation in the clinical iffects and basis in inoculation a-gainst HBV. Key words HBV-M TRFIA ELISA 时间分辨荧光免疫测定技术在HBV-M定量检测及临床应用分析
目前国内临床实验室最常用的乙型肝炎病毒（HBV）感染者的血清学标志物检测主要靠ELISA法，由于ELISA法简单、方便、快速的优点在临床得到广泛应用，但受方法学本身的限制，它不能提供HBV-M的具体含量，只能作为阴阳性判断，故不可能完成HBV感染的动力学观察，而时间分辨荧光免疫技术的出现提供了对HBV-M进行定量检测的手段。本文采用TRFIA法对260份血清标本进行HBV-M检测，并与ELISA法结果进行比较和分析。现报告如下： 1对象与方法 对象 血清标本均来自本院门诊及住院病人260例，无年龄性别要求。早晨空腹抽取静脉血，分离血清后产即检测。 检测试剂ELISA试剂盒由上海荣盛生物技术有限公司提供。TRFIA试剂盒由广州市丰华生物工程有限公司提供。 仪器 EL-312e酶标仪。泰莱-1时间分辨荧光分析仪。Egate2310全自动洗涤。2510变频振荡器。 质控物 由卫生部临床检验中心提供。 方法 ELISA法和TRFIA法测定HBV-M，严格按照试剂操作规程操作，同时加入相应质控物监测。 统计学方法 采用配对x2检验。 2结果 ELISA法 结果阳性36例，阳性率%；TR-FIA法结果阳性40例，阳性率%；两法都阳性36例，两法都阴性220例，TRFIA阳性而ELISA阴性4例，TRFIA阴性而ELISA阳性无，采用配对x2检验，x2=4,P＜，差异有显着性，两法比较符合率为256/260=%；其中HB-sAg含量～5ng/ml占4例，6～ 25ng/ml占7例，26～50ng/ml占8例，51～50ng/ml占8例，150ng/ml以上占13例。 抗-HBs ELISA法 结果阳性130例，阳性率50%；TRFIA法结果阳性160例，阳性率%；两法都阳性130例，两法都阴性100例，TRFIA阳性而ELISA阴性30例，TR-FIA阴性