蛙心灌流设计性实验
09临五6班2小班第三小组
实验目的
1、 通过实验学习蛙心插管、离体蛙心灌流
2、 观察内环境理化因素的相对恒定对维持心脏正常节律性活动的重要作用 3、 对递质、受体阻断剂的概念有初步的感性认识
实验原理
1、 心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内环境，内环境的变化直接影响着心脏的正常活
动
2、 离体蛙心脱离了集体的神经支配和全身体液因素的直接影响，在任氏液灌流的情况下可
以较持久地维持其生理特性
3、 通过人为地改变任氏液中离子的成分或者加入某些化学物质，激动或者阻断受体，改变
心脏的生理特性，通过仪器观察相应心动曲线
实验动物
蟾蜍
药品与器材
1、 PowerLab 8S主机、桥式放大器
2、 蛙类手术器械、玻璃蛙心插管、铁支架、张力换能器、蛙心夹
3、 任氏液、0.65%NaCl溶液、3％CaCl2溶液、1%KCl溶液、 10ml丹参注射液、3%乳酸溶
液、2.5%NaHCO3溶液、0.5%硝酸甘油、1:10000的异丙肾上腺素
实验步骤
1、 处理蟾蜍，损毁脑和脊髓，暴露心脏
左手拿蟾蜍，右手用锥刺入蟾蜍脑，损毁蟾蜍脑和脊髓，将其仰卧位固定于蛙板上，用镊子提起胸骨后端腹部的皮肤，用剪刀剪一小口，然后由切口将剪刀伸入皮下，向左右两侧锁骨外侧方向剪开皮肤，并向头端掀开皮肤。用镊子提起胸骨后端腹肌，在腹肌上剪一小口，将手术剪伸入胸腔内，紧贴胸壁，避开临近血管与心脏，沿着皮肤切口方向剪开肌肉，再用剪刀剪断左右鸟喙骨和锁骨，使创口呈一倒三角形。用眼科镊提起心包膜，用眼科剪将心包膜剪开，暴露心脏。 2、 观察心脏解剖
在腹面可见一心室，上方有两个心房。心室右上角连动脉干，其根部膨大为动脉圆锥，也称主动脉球。动脉向上分成左右两支，用玻璃分针从动脉干背部穿过，将心脏翻
向头侧。在心脏背面两心房下端可见膨大的静脉窦，呈紫红色。静脉窦下连下腔静脉。 3、 心脏插管
用蛙心夹于心舒期夹住心尖，手提蛙心夹上连线将心脏轻轻提起，准备插管。在主动脉下穿一根丝线，打一松结，用眼科剪再左主动脉上向心脏方向剪一个小斜口，切口深度小于管壁直径的1/2，以免插管时撕裂血管。把装有任氏液的蛙心插管插入左主动脉，插至主动脉球后稍稍后退，在心室收缩时将插管沿着主动脉球后壁向心室中央方向插入，经主动脉瓣扎入心室内。当插管内的液面随心搏上下移动时，说明插管已经插入心室腔内。将预先打好的松结扎紧，将线固定在插管壁上的玻璃小钩上，使结扎牢靠。用滴管吸出插管中的液体，更换新鲜的任氏液，小心提起插管和心脏，离断左右侧动脉和腔静脉，避免损伤静脉窦。摘出心脏。用任氏液反复冲洗插管直至插管内液体完全澄清。 4、 固定支架
将蛙心插管固定在铁支架上，蛙心夹上的连线和张力换能器相连。张力换能器要稍稍向下倾斜以防药液沿线进入换能器造成破坏。连线应和水平面保持垂直，松紧适当。 5、 仪器装置及程序设计
1） 按照要求连接仪器
2） 设置参数：采样速度1K/s,显示比例50:1
3） Channel 1 区域设定显示心肌收缩曲线，Range设为50，Low Pass为100Hz。 6、 观察记录
（1）、通过仪器显示，记录正常心跳搏动曲线。适当调节Channel 1 的Range 和基线位
置，得到满意的心跳搏动曲线。分析曲线，找出代表心室收缩部分以及心室舒张部分。 （2）、将插管内的任氏液完全吸出，更换为0.65%NaCl溶液，记录心搏曲线。当曲线出
现变化后，立即用新鲜任氏液换洗2~3次，使曲线回复正常。记录所加药液以及变化后的心跳搏动曲线。 （3）、更换新的药液管，在任氏液中加入1%KCl溶液1~2滴，用洗净的洗玻璃棒搅动数
次，防止药物浮于表面，确保药液进入心脏。当曲线出现变化后，立即用新鲜任氏液换洗2~3次，使曲线回复正常。记录所加药液以及变化后的心跳搏动曲线。 （4）、重复上述过程，分别加入3êCl2溶液、10ml丹参注射液、3%乳酸溶液、
2.5%NaHCO3溶液、0.5%硝酸甘油、0.02%的异丙肾上腺素溶液1~2滴，观察每次更换药液后心跳波动曲线的变化。换液方法、记录内容同上。观察每个项目时要求插管内液面高度保持一致。 （5）、待各项试验步骤完成后，停止仪器，停止记录。选取各试验步骤的波形，剪裁需
要的曲线，按顺序粘贴于试验报告上，测量读取每项试验中心脏的收缩率和频率，如实记录。
预期结果
1、 加入NaCl心脏收缩能力减弱
加入NaCl后心跳减弱是由于心肌收缩活力是由Ca离子触发的，心肌收缩的强弱与细胞外Ca离子的浓度成正比，当Na＋明显增高时，膜内外钠的浓度差梯度增大，因此，快反应细胞Na＋内流加快，0期去极速度和幅度均增加，导致传导性和自律性增高。同时
Na内流的增多促进细胞内Ca2＋的外运使细胞内Ca2＋浓度降低，因此，心肌收缩能力减弱。
2、加入CaCl2：心脏收缩能力增强
加入CaCl2后，心肌收缩增强，心肌的收缩活性与心肌肌浆中Ca离子浓度的高低有关。当Ca离子浓度升高至10-5M水平时，作为钙受体的肌钙蛋白结合了足够的Ca离子，引起肌钙蛋白分子构型的改变，从而触发肌丝滑行，肌纤维收缩，当肌浆中Ca离子浓度降至10-7M时，Ca离子与肌钙蛋白解离，心肌随之舒张，用高Ca离子灌注心脏，使肌浆中Ca离子浓度不断升高，Ca离子与肌钙蛋白结合数量不断增加，于是心肌持续收缩。 3、加入KCl心脏收缩能力减弱
加入KCl后细胞外K+浓度升高，在平台期K+外流减弱，使平台期缩短；K+与Ca2+在细胞膜上有竞争性抑制，K+抑制细胞膜对Ca2+转运所以进入细胞内Ca2+减少，所以心肌的兴奋收缩联过程减弱，因此心肌收缩力降低。
4、加入丹参注射液，心肌兴奋性降低，心肌收缩能力减弱，心率减慢。
丹参可增加冠脉血流量，降低心肌兴奋性和传导性，对急性心急缺血缺氧造成的损伤有明显的保护作用。 5、加入硝酸甘油
硝酸甘油可以松弛平滑肌，扩张冠脉血管，降低心室壁张力。过量有可能兴奋交感神经，使心肌收缩能力增强，心率加快。也可能由于离体蛙心神经阻断，不发生明显变化。 6、加入异丙肾上腺素
异丙肾上腺素可以激活心脏的β1受体，表现为正性肌力和正性频率，缩短收缩期与舒张期，加快心率，加快传导速度，增加心肌耗氧量。 7、 加入乳酸，心肌收缩力下降
乳酸的H+可以与Ca+竞争肌钙蛋白，Ca2+不能与肌钙蛋白结合，使心肌收缩能力下降。
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注意事项
1、 心室插管不可硬插，以免戳穿心壁，应顺应主动脉走向再心室收缩时插入