UV2450紫外可见分光光度计

UV2450紫外可见分光光度计

A、光谱分析 (1)开机:

分别打开交流稳压电源、UV—2450紫外分光光度计主机电源、电脑开机。 双击桌面UVProbe图标,打开主窗口,在工具栏上有四个模块:Report(报告)、Kinetic、Photometric(光度测量)、Spectrum(光谱)。

点击Spectrum,进入Spectrum模块,这个模块包含三个窗格:Operation(操作)、Method(方法)、Graph(曲线)。 (2)基线校正:

基线校正就是将所选波长范围内的测量背景设置为0,消除溶剂吸收紫外光的影响,在基线校正结束后,我们将在Instrument history看到包括分析者、数据及时间等内容。在进行基线校正之前应检查样品池中是否有物品遮挡。

①在窗口中选择了Spectrum,打开Spectrum模块,点击光度计上的连接(Connect)按键条,连接仪器。此时,仪器开始初始化,此过程约需4分钟。

②初始化结束后,将样品及参比吸收池中装上空白溶剂,放入样品池中,关好样品池盖。点击基线(baseline)按键条,出现基线参数对话框,设定扫描开始波长为500nm,结束波长为190nm。点击OK,进行基线校正。在基线校正过程中,注意光度计状态窗口的内容。

注意:取放吸收池时,不得接触吸收池的透光面,以免将其磨毛。吸收池插入样品池架前,需将其外壁的液体擦干,否则溶剂带入,会将样品池腐蚀。擦吸收池应用擦镜纸,向一个方向擦,不要来回擦,以免磨毛吸收池。样品插入样品池架时,应注意方向。

③基线扫描结束后,点击Instrument history标签,观察基线校正的列表内容。

(3)创建一个数据采集方法:

①选择编辑(Edit)菜单下的方法(Method),或点击光谱窗口中的方法按钮,显示光谱方法对话框。

②选择测定(Measurement)标签,进行参数设置。波长范围(Wavelength Range):开始波长500nm、结束波长190nm;扫描速度(Scan Speed):中速(Medium);采样间隔(Sampling Interval):选择自动采样间隔或每隔1nm采样,扫描方式(Scan mode)选择单一(Single)。其它不做选择,点击OK。

③选择仪器参数(Instrument Parameters)标签,进行参数设置。测量方式(Measuring mode),选择吸光度(Absorbance),狭缝宽度(Slit Width),选择2.0,其它不做选择,点击确定。

④保存数据采集方法。选择文件(File)菜单下的另存为(Save As),出现保存光谱文件对话框。选择保存路径,如D:/盐酸小檗碱 文件夹,文件名下输入文件名,如盐酸小檗碱,保存类型选择方法文件(Meathod File(*.smd))。点击保存按钮,保存数据采集方法。 (4)采集数据:

待测样品的吸光度可以用上面保存的方法进行测定,首先,在Overly图表下,设定Y轴,点击Y轴最小吸收度值,设定一个值,如-0.2,点击最大吸收度值,设定一个值,如1。X轴的值为创建方法时设定的起始波长。在任何时候,只要开始测定,UVProbe 都会自动地转到Overly图表。测量完成后,如果整个曲线显示不合适,可以点右键,选择自动标记(Auto scale),以调整曲线座标。 ①将待测样品放入样品池。

②点击开始(Start)按钮,开始扫描。

③扫描结束后,弹出对话框,将data作为文件名,保存类型选择光谱文件(Spectrum File(*.spc)),点击保存。此时文件只储存于仪器记意中,未存入磁盘,关机后文件会丢失。

④保存文件。选择文件(File)菜单下的另存为(Save As),将data作为文件名,保存类型选择光谱文件(Spectrum File(*.spc)),D:/盐酸小檗碱作为保存路径,点击保存。 (5)显示、打印曲线及图表:

①运行(Operation)菜单下,选择Peak Pick。

②在Peak Pick table处点右键,选择标记峰、谷,显示峰、谷等内容,进行设置。

③在曲线上标记峰和谷:在Peak Pick table处点右键,选择属性(Properties),可进行极值、峰、谷的标记设置。

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