HPLC法测定果蔬中维生素C
摘要通过高效液相色谱法和国标法2种方法测定了果蔬中的维生素C，通过精密度、准确度、回收率等方法对比结果表明：液相色谱法是一种高效、快速、准确、高灵敏度的分离分析方法。
AbstractIn this paper，high performance liquid chromatography and national standard method were used to determine VC in fruits and vegetables. Through the precision， accuracy，recovery methods，etc.，such as comparative results showed that liquid chromatography was an efficient，fast，accurate and high sensitivity separation analysis method.
Key wordsHPLC method；fruits and vegetables；vitamin C；determination
维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它能增强人体抵抗力，预防坏血病，因此又称抗坏血酸。维生素C分布很广，主要存在于植物性食物的果实、浆果和蔬菜中。因此，测定水果及蔬菜中的维生素C含量，对评定其营养价值有重要意义。
维生素C的测定方法有多种，包括容量法、比色法以及荧光光度法、电位法[1]和紫外分光光度法[2-3]等，各种方法均有特长和不足。高效液相色谱是近年来发展起来的一种快速、高效的分离技术。运用这一现代色谱工具进行维生素C的检测，国内外曾有报道[4-6]。在此基础上，开展了液相色谱测定果蔬中维生素C的工作，效果较好。现将试验情况总结如下。
1材料与方法
1.1仪器与试剂
仪器：高效液相色谱仪，美国Waters201型，包括510泵、U6K进样器、481紫外检测器、740数据处理机；MILLI-Q型超纯水装置；GL-20型高速冷冻离心机。试剂：磷酸二氢铵，偏磷酸，浓磷酸，抗坏血酸；均为分析纯。
1.2样品前处理
用超纯水配制0.5%的磷酸二氢铵，用0.45 μm膜过滤，将浓磷酸调至pH值为2.3作为流动相。
标样配制：准确称取维生素C标样50 mg，用3%偏磷酸定容至500 mL容量瓶摇匀，再吸取1 mL定容至100 mL。
样品制备：大量样品，迅速称取切碎样品100 g加等量3%偏磷酸，倒入组织捣碎机捣碎，称取匀浆20.0 g，用3%偏磷酸定容至100 mL容量瓶。少量样品，称取样品1~5 g倒入研钵内，加入少量3%偏磷酸充分研磨成糊状，全部转移定容至100 mL容量瓶。将定容好的容量瓶超声提取10 min，取上清液5 mL，0 ℃、2 700 r/min离心10 min，用0.45 μm膜过滤后进样。
1.3试验方法
色谱条件：色谱柱NOVA—PAKC18；流动相0.5%NH4H2PO4，流速1 mL/min；纸速1 cm/min；洗脱时间2.5 min；检测器481紫外检测器；波长243.5 nm；灵敏度0.1 AuFS；进样量10 μL。
根据经典的保留值法和样品中维生素C与加入标样后色谱峰迭加来定性。将标准液注入色谱柱中，经740数据处理机采用单点外标法进行定量，直接打印出分析结果。
2结果与分析
2.1精密度
配制0.005 0 mg/mL的标准维生素C溶液，进样量从2.5 μL开始，以响应值与进样量绘制标准曲线均成线性。试验结果见表1。回归方程为：
y=1.030x-2.431×10-5 （r=0.999 7）
试验条件下维生素C的最小检测量为2.5×10-9 g。
2.2方法可靠性
历经制样全过程，在不同基样中加入维生素C，回收考察其准确度，结果见表2。由表2可知，样品平均回收率为99.2%。标准维生素C和典型样品的色谱图见图1。
部分样品的测定结果与2，6-二氯苯酚吲哚酚钠盐滴定法结果比较见表3。
2.3柱效
在有预柱的情况下，1根柱子经过500余次的进样，柱效无明显变化。柱压一直保持在1 500 Pa左右。维生素C峰的保留时间稳定在1.8 min±1 s。
2.4维生素C溶液的可保存性
在（20±2）℃的室温下，经连续测定维生素C的氧化程度，结果见表4。由表4可知，标样在试验浓度下，24 h内无变化，48 h内稍有下降；而样品中由于
存在抗坏血酸酶，2 h内分别比原浓度下降3.2%和6.0%，48 h内分别比原浓度下降14.5%和11.2%。因此，样品应迅速处理后立即上机为好。
3结论
试验结果表明，反相HPLC－UV检测法具有样品用量少、预处理简单、流动相无毒、速度快、选择性好、灵敏度高等特点[7-8]，具有较高的精密度和准确度。与普通应用的2，6-二氯苯酚吲哚酚钠盐滴定法比较，定量结果基本一致，但对常有色素物质存在，造成滴定法滴定终点观察困难的生物组织液更能发挥其特长。
4参考文献
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