实验指导
《中药化学》实验室注意事项
中药化学实验课具有实验周期长、使用有机溶剂品种多，用量较大等特点，所用的药品多数是挥发性、易燃、有腐蚀性、刺激性、实验操作经常在加温，减压下进行，需要使用各种热源和电器，再加上实验室较为拥挤，若操作不慎，易引起着火、触电、中毒、爆炸等事故，为确保实验安全顺利进行，特作如下要求。
一、实验前必须预习实验内容，了解实验原理和操作程序，检查仪器是否完整，装置是否正确，检查合格后方可开始实验。
二、实验室内要保持严肃、安静，不得大声说话打闹，室内严禁吸烟，实验进行时不行擅自离开，必要时委托专人看管。
三、未经教师允许不得擅自使用明火，需使用明火时，实验台周围不得放置易燃有机溶剂，如发生火情应保持镇静，立即报告指导教师同时切断火源，移走易燃品，用湿布闷盖或用灭火器进行灭火，切勿轻易用水，以免扩大火势。
四、实验时要做到整齐、清洁、用过的仪器要及时清洗并收入仪器柜内，保持水、仪器、桌面、地面四洁。
五、回流、蒸馏有机溶剂时，注意检查冷凝水是否通畅，装置不得密闭，接收有机溶剂时不得使用广口仪器，溶剂瓶不得敝口存放。在进行减压操作时，必须使用安全瓶，弄清操作程序，以免造成回水等事故。
六、使用挥发性试剂或喷显色剂时，应在窗口或通风橱内操作，不慎溅在桌面上的化学药品必须立即清除。身体直接接触化学物品后应及时用肥皂及大量水冲洗，如碱性试剂可用1%HAc溶液冲洗，酸性试剂可用3%NaHCO3溶液冲洗。不要用酒精、丙酮等洗涤皮肤上的有机物，以免增加皮肤对有毒物质的吸收，眼睛内溅入化学试剂后，应立即用大量水冲洗，及时到校医室就诊。
七、使用电器设备（如水浴锅、紫外灯、旋转蒸发仪、循环水泵等）一定要按操作规程进行，不得在烘箱内干燥带有易燃性有机溶剂的仪器或物品，仪器发生故障时及时报告指导教师，不得擅自拆卸。
八、每次实验结果后的产品，应妥善包装好，贴好标签，写明级别、产率等，放入干燥器内保存，不得随意丢失。
九、实验结束后，值日生应做好实验室清洁卫生工作，整理好公共仪器、药品，检查水、电、门窗，经教师检查后方可离去。
实验一 粉防己中粉防己生物碱的提取、分离和鉴定
粉防己为防己科千金藤属植物粉防己的干燥块根。又名汉防己、倒地拱、百木香。具有利水消肿，祛风止痛的功效，用于治疗神经痛、关节炎等症。
粉防己的有效成分是双苄基异喹啉型生物碱，总碱含量约1~2%，其中主要是粉防己碱、去甲粉防己碱及轮环藤酚碱。 一、实验目的要求
1、掌握总生物碱的提取及脂溶性生物碱和水溶性生物碱的分离、纯化方法
2、掌握脂溶性和水溶性生物碱的薄层色谱鉴定方法 3、熟悉生物碱衍生物的制备方法 二、实验原理
利用乙醇提取总生物碱，回收乙醇得总生物碱的浸膏，利用脂溶性生物碱在酸性条件下成盐后，溶于水不溶于极性小的有机溶剂；在碱性条件下成游离生物碱，溶于极性小的有机溶剂不溶于水的特点，反复处理，藉此使脂溶性的粉防己甲及粉防己乙素与水溶性的轮环藤酚碱分开，并去除部分杂质。
OCH33HCO3HCONOROOOCH3NCH3R=CH3R=H粉防己碱去甲粉防己碱
三、实验方法
1、粉防己总碱的提取 称取粉防己粗粉100g，置于500ml圆底烧瓶中，加80%~95%乙醇浸没药材（约需300ml），水浴加热回流1~2小时，过滤，滤液置1000ml三角烧瓶中。药渣再加乙醇浸没，如上法再提取2次。合并3次乙醇提取液，如有絮状物析出，再过滤1次，澄清溶液浓缩至糖浆状。
2、亲脂性生物碱和亲水性生物碱的分离 将糖浆状总提取物置三角烧瓶中，逐渐加放100ml左右1%盐酸液，同时充分搅拌，促使生物碱溶解，不溶物则呈树脂状析出。静置，滤出上清液，用1%盐酸少量多次洗涤不溶物，直至洗液对生物碱沉淀试剂反应微弱为止。
合并洗液和酸性溶液，移置于分液漏斗中用氯仿洗3次，每次取用酸水液的1/3量。氯仿洗液合并，用1%盐酸洗1~2次。将洗涤氯仿液的酸液和总酸水液合并，留取8ml作沉淀反应，其余酸液移入500ml的三角烧瓶中，滴加浓氨水中和至pH9~10，此时亲脂性的叔胺碱游离出来。如有发热现象，应设法冷却，加氯仿50ml，再移置500ml分液漏斗中，振摇萃取，分取氯仿层，上层碱水液再以新鲜氯仿萃取数次，每次用氯仿50ml，直至氯仿抽提液生物碱反应微弱时为止（试验时取氯仿溶液置表面皿上待溶剂挥发，残留物中加稀盐酸2滴使溶解，再加生物碱沉淀试纸试之，或做薄层板点滴反应）合并氯仿溶液并置分液漏斗中，先以1%NaOH液洗2次后，再用水洗耳恭听2~3次，碱水洗液和氨性碱水液合并，留待分离水溶性生物碱。氯仿液用无水硫酸钠脱水，回收氯仿至干，抽松，加丙酮约30ml热溶，必要时抽滤，丙酮液冷后，析晶，抽滤，得脂溶性生物碱（粉防己甲素和乙素的混合物）。
3、粉防己甲素和粉防己乙素的分离 称取粗总碱，置于25ml三角烧瓶中，加5~6倍苯冷浸，室温放置30min后，抽滤，苯不溶物主要含乙素，可用95%乙醇溶解，加少量活性炭回流脱色，乙醇液浓缩，析晶，抽滤，得粉防己乙素。苯液回收至干，加20倍量95%乙醇，适量活性炭回流加热30min，抽滤，乙醇液放置，析晶，抽滤，得粉防己甲素，干燥，称重，用丙酮（1：40，W/V）重结晶，（热溶，抽滤）得粉防己甲素精制品，作TLC检查。 4、季胺生物碱——轮环藤酚碱的分离纯化 将碱水液用NH4Cl固体中和至pH7，置分液漏斗中，用正丁醇提取数次，直至碱水液生物碱反应微弱为止（取数滴碱水液于试管中，用稀HCl酸化后，再加生物碱沉淀试剂试之，或作薄层板点滴反应）。正丁醇液减压浓缩至干，用95%乙醇溶解，滤除不溶物，乙醇液浓缩至小体积，放置，析晶。反复数次，可得轮环藤酚碱精制品，作TLC检查。 5、粉防己生物碱的鉴定
（1）生物碱沉淀反应：取粉防己酸水液分别置小试管中，每份1ml，分别滴加下列各试剂2~3滴，观察有无沉淀及颜色变化。
A、碘化铋钾试剂； B、硅钨酸；
C、苦味酸试剂（先将酸水液调至中性，再滴加试剂） （2）薄层色谱：
A、粉防己生物碱：
吸附剂：硅胶-CMC-Na板
展开剂：氯仿-乙醇（10：1）氨饱和；
甲苯-丙酮-甲醇（4：5：1）氨饱和 对照品：粉防己甲素乙醇液
粉防己乙素乙醇液
显色剂：改良碘化铋钾试剂
B、轮环藤酚碱：
吸附剂：硅胶-CMC-Na板 展开剂：甲醇-氨水（7：3） 对照品：轮环藤酚碱水液 显色剂：改良碘化铋钾试剂
6、衍生物的制备
（1）苦味酸盐：取粉防己碱200mg溶于2ml丙酮中，滴加苦味酸的饱和水溶液，即析出黄色沉淀，滴加试剂至沉淀完全，抽滤，收集沉淀，依次以少量水、乙醇、乙醚洗涤，再经乙醇重结晶，可得苦味酸盐，mp241~246℃。
（2）粉防己甲素二碘甲烷盐（汉肌松）的制备：取粉防己甲素200mg，加甲醇10ml溶解，加碘甲烷1ml，回流加热15min，蒸去甲醇，残留物以水或乙醇重结晶，得白色鳞片状结晶，即粉防己甲素二碘甲烷盐（汉肌松），mp216.5℃。 四、操作要点
1、 提取总碱时，回收乙醇至稀浸膏即可。过干时，当加入1%盐酸水后，会结成胶状团块，
影响提取效果。
2、 滴加浓氨水中和至pH9~10时，若有发热现象，应设法冷却，以免加入的氯仿挥发。 3、 去甲粉防己碱虽然也有酚羟基，但不溶于一般浓度的NaOH液，故称之为隐性酚羟基，
用2%NaOH萃提时，仍留在CHCl3液中。
4、 纯化时，若溶剂量太大，不易析晶，可再蒸去一些溶剂后，放置，以利结晶析出。 五、思考题
1、 提取总生物碱的常用方法有哪几种？各有何缺点？
2、 粉防己碱和去甲粉防己碱在结构上有哪些异同点？实验中如何利用它们的共性和个
性？
3、 什么叫生物碱的假阳性反应？能消除吗？
4、 萃取操作的好坏对实验结果有什么影响？怎样防止产生乳化？怎样消除乳化？
为什么有机溶剂必须洗至中性方能浓缩或放置？
实验二 大黄中大黄素的提取、分离和鉴定
大黄为蓼科多年生草本植物掌叶大黄，药用大黄和唐古物大黄的根茎。具有泻下、健胃、抗菌、清热、解毒、收敛和利胆等作用。此外，还有止血、降低血清胆甾醇的作用。
大黄中含有多种羟基蒽醌类化合物，其中有较少量的游离羟基蒽醌（约为大黄的0.5%左右），它们在植物中主要以苷的形式存在。 一、 实验目的和要求
1、 掌握PH梯度萃取法的原理和操作技术
2、 学习用硅胶柱色谱法分离精制大黄素 3、 学习羟基蒽醌类化合物的鉴定方法 二、 实验原理
根据大黄中蒽醌类成分酸性强弱不同的特性，以乙醚提取脂溶性成分后，利用碱度递增的碱水液，自乙醚提取液中萃取酸度递减的游离蒽醌类成分，本实验主要分离其大黄素。
OHOOHR2OR11，8-二羟基蒽醌衍生物酸性： E > B > D > C、A 极性： E > D > B > C > A 三、 实验方法
R1 R2H CH3OH CH3OCH3 CH3 H CH2OH H COOH大黄酚大黄素大黄素甲醚芦荟大黄素大黄酸ABCDE
1、酸水解 取大黄粉10g，加20%硫酸水溶液100ml，在水浴上加热3~4小时，抽滤，滤饼水洗后于70℃左右干燥。
2、总羟基蒽醌苷元的提取 滤饼经干燥后，置索氏提取器中，加入乙醚150ml，回流提取3~4小时，得乙醚提取液。
乙醚提取液经薄层色谱检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚。薄层板为硅胶-CMC-Na，展开剂为石油醚（沸程60~90℃）-乙酸乙酯（7：3），近水平或直立展开，在可见光下可看到4个斑点，Rf为0.9的黄色斑点为大黄酚和大黄素甲醚混合物，在此条件下分不开，其余3个斑点，依Rf值由大到小分别为大黄素（橙色斑点）、芦荟大黄素（黄色斑点）、大黄酸（黄色斑点）。 3、pH梯度萃取分离
（1）置乙醚提取液于250ml分液漏斗中，以2.5%碳酸氢钠水溶液120ml分3次萃取，乙醚层经薄层色谱检查（薄层条件同上），知大黄酸己除去。合并3次碳酸氢钠萃取液，酸化，可得大黄酸沉淀。
（2）经2.5%碳酸氢钠水溶液萃取后的乙醚层，以2.5%碳酸钠水溶液120ml分3次萃取，乙醚层经薄层色谱检查，知大黄素己除去。合并3次碳酸钠萃取液，酸化，主要得大黄素沉淀，另含有少量大黄酚、大黄素甲醚和芦荟大黄素等。水洗沉淀物至洗出液呈中性，