低温干燥后作为柱色谱样品。
经2.5%碳酸钠水溶液萃取后的乙醚层，继续用2.5%碳酸钠水溶液120ml分4次萃取，乙醚层经薄层色谱检查，知芦荟大黄素己除去。合并4次碳酸钠萃取液，酸化，得芦荟大黄素沉淀。
（3）经2.5%碳酸钠水溶液萃取后的乙醚层，再以0.5%氢氧化钠水溶液100ml分4次萃取至碱水层无色为止，合并氢氧化钠萃取液，酸化得沉淀，为大黄酚和大黄素甲醚混合物。
4、 硅胶柱色谱分离精制大黄素
（1）装柱：取100~200目的硅胶约10g，按干法装柱
（2）加样：将样品溶解于5ml石油醚（沸程60~90℃）-乙酸乙酯（7：3）中，用吸管吸取样品溶液于色谱柱柱床顶端。
（3）洗脱：用石油醚（沸程60~90℃）-乙酸乙酯（7：3）为洗脱剂洗脱，分段收集，每份10ml，用硅胶薄层板跟踪检查（被洗脱的成分先后顺序为：大黄酚和大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素等）。合并大黄素部分，适当浓缩，放置析晶，过滤，即得纯品大黄素。 5、大黄素的鉴定
（1）在薄层板上用点滴反应检查大黄素对NaOH、MgAc2试液的反应 （2）测定大黄素的熔点。 四、 操作要点
1、本实验多次使用乙醚，因此需注意安全防火，绝对禁止有明火的情况下使用乙醚。 2、采用梯度pH萃取法分离萃取各游离蒽醌成分时，操作不宜过分剧烈振摇，以免乳化，难以分层。
3、硅胶柱色谱整个操作过程硅胶柱表面应保持一定高度的洗脱剂，不使柱面溶液流干。 4、柱色谱洗脱时流速不应太快，以免柱交换来不及达到平衡，影响分离效果。 5、柱色谱时所用的仪器要干燥。 五、 思考题
1、大黄中五种羟基蒽醌化合物的酸性和极性大小应如何排列？为什么？ 2、梯度pH萃取法的原理是什么？适用于哪些中药化学成分的分离？ 3、试分析薄层色谱图谱中各羟基蒽醌类成分的结构与Rf值的关系。
实验三 槐花米中芦丁的提取、分离和鉴定
槐花米系豆科槐属植物sophora japonica L的花蕾，自古作为止血药。其中所含主要化学成分为芦丁，亦称芸香苷，药理实验证明芦丁具有减少毛细血管的通透性作用，临床上主要用为防治高血压病的辅助治疗药物。此外，芦丁对于放射线伤害所引起的出血症亦有一定作用。
芦丁广泛存在于植物界，已发现的含芦丁植物至少在70种以上，其中以槐花米和荞麦叶含量较高，可作为提取芦丁的原料。 一、 实验目的和要求
1、以芦丁为实例学习黄酮类化合物的提取分离方法
2、掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分的鉴定方法 3、通过槲皮素的乙酰化反应，要求得到纯品槲皮素五乙酰化物 4、掌握纸色谱和薄层色谱的方法及黄酮类化合物的色谱特点 二、实验原理
1、芦丁可溶于热水，难溶于冷水。其分子结构中具有较多的酚羟基，显弱酸性，在碱中易溶解，而在酸性条件下易析出沉淀。故可采用碱提酸沉法提取芦丁。
2、利用芦丁可被稀酸水解，生成苷元和糖。通过纸色谱和薄层色谱及苷元的乙酰化衍生物进行鉴定和确认。
OHHOOOOH三、实验方法
OHOHHOOOHOHO槲皮素
OH芸香糖芦丁O1、芦丁的提取 于1000ml烧杯中加入500ml蒸馏水，煮沸2~3min后，称取40g槐花米（粗粉），投入沸水中，直火加热煮沸约5min，在搅拌下小心加入石灰乳调至pH8~9，加热微沸30min后，注意添加水，保持原体积并维持pH8~9，趁热过滤，滤渣再加入200ml水，加石灰乳调pH8~9，煮10min，趁热过滤，合并滤液，稍冷（60~70℃），用浓HCl调至4~5，放置后析出沉淀，抽滤，用水洗3~4次，置空气自然干燥得淡黄色粗制芦丁。
2、芦丁的精制 将芦丁粗品置500ml烧杯中，加适量（约100ml）蒸馏水，再用石灰水调至pH8。加热煮沸数分钟，使充分溶解。趁热抽滤，滤液滴加3mol/L HCl调至pH7，放置
18小时以上，即析出沉淀。减压过滤，用少量蒸馏水洗涤沉淀2~3次。然后用少量乙醇洗1次。抽干，于70~80℃干燥1小时，即得精制芦丁。称重，计算产率，测mp。
3、芦丁的水解 取精制芦丁2g，研细，置于500ml圆底烧瓶中，加2%H2SO4溶液150ml，于直火上加热微沸30min（要补充蒸发掉的水分），析出的黄色沉淀为槲皮素，趁热抽滤，滤液保留作糖部分的鉴定。沉淀经水洗后再用95%乙醇重结晶1次，得黄色针状结晶，于70~80℃以下干燥，即得精制槲皮素。测mp。
4、糖的纸色谱鉴定 取水解母液20ml，用Ba(OH)2的细粉（约2.6g）中和至pH7，滤去生成的BaSO4沉淀（可用滑石粉助滤），滤液浓缩至约1ml，供纸色谱点样用。
样品：水解浓缩液 色谱滤纸：新华一号滤纸 对照品：葡萄糖、鼠李糖水溶液
展开剂：正丁醇-乙酸-水（4：1：5上层）
显色：苯胺-邻苯二甲酸盐试剂喷后105℃烘10min，显棕色和棕红色斑点。 苯胺-邻苯二甲酸的配制：将1.66g苯二甲酸和0.93g的苯胺溶于100ml水饱和的正丁醇中。
5、芦丁、槲皮素的纸色谱和聚酰胺薄层鉴定
样品：自制芦丁、槲皮素的乙醇溶液 色谱滤纸：新华一号滤纸 对照品：芦丁、槲皮素的乙醇溶液
展开剂：（1）正丁醇-乙酸-水（4：1：5上层） （2）15%乙酸水溶液
显色：（1）可见光下观察及紫外灯下观察 （2）经氨气薰后再观察 （3）喷三氯化铝试剂后再观察
聚酰胺薄层的鉴定，用90%乙醇或乙醇-水（7：3）展开，在紫外灯下观察斑点颜色，或采用纸色谱的显色方法。
6、槲皮素五乙酰化物的制备 取槲皮素结晶200mg，置于圆底烧瓶中，加4ml无水吡啶溶解，再加5ml乙酸酐摇匀，接上空气冷凝管，水浴上加热回流30min，放冷。将反应液在搅拌下倾入100ml冰水中，一直搅拌至油滴消失，白色固体沉淀析出为止，抽滤，滤饼用水洗涤，干燥后用95%乙醇重结晶，得针状结晶，测其熔点（文献值为193~195℃）。
四、操作要点
1、提取中加入硼砂，即能调节水溶液的pH，又有与芦丁分子中的邻二酚羟基结合，达到保护芦丁减少氧化的目的。但硼砂价格较贵，工业上用较大量的石灰加少量的硼砂，同样达到提高质量的要求。
2、搅拌下用石灰乳调节pH8~9，既可达到碱溶解芦丁的目的，又可除去槐花米中含有的大量果胶、粘液质、多糖等，使这些成分生成钙盐沉淀不致溶出。但pH不可过高，否则钙离子能与芦丁形成螯合物析出而降低收率。
3、用浓盐酸酸化调pH4~5，pH不宜过低，以免芦丁形成钅羊盐，重新溶解，降低收率。 4、槲皮素五乙酰化衍生物制备中，所有仪器均要干燥。 五、思考题
1、 提取芦丁工艺中影响产量与质量的因素是什么？为什么要加硼砂水沸溶液？ 2、 使用去离子水或蒸馏水的目的？为什么？ 3、 芦丁水解不完全时将产生什么结果？
4、 黄酮类化合物有哪些提取方法？芦丁的提取还可以用什么方法？ 5、 芦丁和槲皮素用不同展开剂系统展开，将出现什么结果？为什么？ 6、 芦丁和槲皮素聚酰胺薄层将出现什么结果？为什么？ 7、 槲皮素乙酰化衍生物的制备应注意什么？
如何证明芦丁分子中只含有葡萄糖和鼠李糖？如何证明苷元、葡萄糖、鼠李糖的连接位置？
实验四 薯蓣皂苷元的提取、分离和鉴定
我国薯蓣皂苷元资源极为丰富，薯蓣略的八十多种植物中大多含有薯蓣皂苷，其中可用于生产薯蓣皂苷元的植物原料有穿山龙，盾叶薯蓣，山萆解等，用其根茎提取薯蓣皂苷元。
薯蓣皂苷属于甾体皂苷，经水解后可以得到属于甾体结构的薯蓣皂苷元，是合成甾体激素的重要原料。 一、实验目的和要求
1、 掌握苷类的酸催化水解方法 2、 掌握甾体皂苷元的提取方法 3、 掌握甾体皂元的检识方法
4、 掌握索氏提取器的应用 二、已知主要成分的理化性质
穿山龙根中含有多种甾体皂苷，其中薯蓣皂苷含量最高。这些皂苷水解后大多能生成薯蓣皂苷元。
1、 薯蓣皂苷
无定形粉末或针状结晶，mp288℃，[α]D-95°。可溶于乙醇、甲醇、醋酸、难溶于乙醚等弱极性有机溶剂，不溶于水。 2、 薯蓣皂苷元
白色针状结晶（乙醇），mp204~207℃（丙酮）或202~204，[α]D-129.3°（氯仿）。可溶于一般有机溶剂及醋酸中，不溶于水。 三、实验原理
薯蓣皂苷元在植物体内与葡萄糖、鼠李糖结合成薯蓣皂苷，经酸水解生成薯蓣皂苷元和单糖。由于薯蓣皂苷元不溶于水，留存于植物残渣中，所以可用有机溶剂直接从植物原料残渣中连续回流将其提取出来。 四、实验方法
（一）薯蓣皂苷元的提取分离方法 1、苷的酸水解
取穿山龙25g，切成碎片，置500ml圆底烧瓶中，加8%酸水（水-浓硫酸230：20V/V），然后直火加热（石棉网上），回流6小时（开始用小火，以防泡沫冲出）。倒去酸水，加入常水洗涤两次，然后将药渣倒在乳钵内，加固体碳酸钠粉研磨，调pH至中性，常水洗，过滤（用尼龙布），滤渣研碎，低温干燥（不超过80℃），得干燥药渣。
2、薯蓣皂苷元的提取
将上述干燥药渣装入滤纸筒置索氏提取器内，用石油醚（沸程60~90℃）300ml，在水浴上连续回流提取4~6小时，提取液常压回收石油醚至约10~15ml，迅速用吸管转入小锥形瓶中，冷却，析出结晶，抽滤，固体用少量新鲜石油醚洗涤两次，抽干，即得薯蓣皂苷元粗品。干燥，称重，计算得率。 3、精制
将上述粗品用20~30ml 95%乙醇加热溶解（色深时可加1~2%的活性炭脱色），趁热抽滤，滤液放置，析出结晶。滤集结晶，干燥，即得薯蓣皂苷元精品。称重，计算得率，测定熔点
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