华南农业大学 综合实验报告
实验项目名称：糖化酶活力测定 实验项目性质：综合实验 计 划 学 时 ：2学时
所属课程名称：食品与发酵工业分析 班 级： 10级生物工程1班 姓 名：肖佩
学 号：201030620124 指 导 老 师：沈玉栋 徐振林
一．实验原理
采用可溶性淀粉为底物，在一定的pH值与温度下，使之水解为葡萄糖 (还原糖)，以直接滴定法测定。
二．试剂及仪器
（1） 碱性酒石酸铜甲溶液（使用时等体积混合甲、乙溶液）： 甲液：称取15.693g硫酸铜(Cu2SO4·5H2O)，0.05g次甲基蓝，用水溶解并稀释定容至1000mL； 乙液：称取50g酒石酸钠钾，54g氢氧化钠，4g亚铁氰化钾，用水溶解并稀释定容至1000mL
（2） 0.1%标准葡萄糖溶液：准确称取1g无水葡萄糖（预先在100-1050C烘干），用水溶解，加5mL浓盐酸，用水定容至1000mL。
（3） pH4.6乙酸-乙酸钠缓冲溶液：
0.2mol/L乙酸溶液：量取11.8mL冰乙酸，用水稀释至1000mL； 0.2mol/L 乙酸钠溶液：称取27.2g乙酸钠（CH3COONa·3H2O），用水定容至1000mL；
pH4.6乙酸-乙酸钠缓冲液：取0.2mol/L的乙酸溶液和0.2mol/L的乙酸钠溶液等体积混合。
（4） 0.1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g氢氧化钠，用水溶解并定容至1000mL。 （5） 2%可溶性淀粉溶液：准确称取2g可溶性淀粉（预先于10-105 0C烘干），加少量水调匀，倾入80mL沸水中，继续煮沸至透明，冷却后用水定容至100mL。
（6） 固体曲
（7） 滴定管、电子天平、烧杯、恒温水浴锅、脱脂棉、容量瓶、移液管、三角瓶
三．测定步骤
（1） 5%固体曲浸出液制备：称取5.0g固体曲（以绝干曲计），置于250mL烧杯中，加90mL水和10mL pH4.6乙酸－乙酸钠缓冲溶液，搅匀，于30℃水浴
中保温浸1小时，每隔15min搅拌一次。用脱脂棉过滤，滤液为5％固体曲浸出液。
（2）固体曲糖化液的制备：吸取25mL 2％可溶性淀粉溶液，置于50mL容量瓶中，于30℃水浴预热10min。准确加入5mL 5％固体曲浸出液，摇匀，立即记下时间。于30℃水浴准确保温糖化1小时。迅速加入15mL 0.1mol/L氢氧化钠溶液，终止酶解反应。冷却至室温，用水定容至刻度。
同时作一空白液：吸取25mL 2％可溶性淀粉溶液，置于50mL容量瓶中，先加入15mL 0.1mol/L氢氧化钠溶液，然后准确加入5mL 5％固体曲浸出液，用水定容至刻度。
（3）定糖
空白液测定：吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5mL，置于100-150mL三角瓶中，准确加入5mL空白液，并用滴定管预先加入适量的0.1%标准葡萄糖溶液，使滴定时消耗的0.1%标准葡萄糖溶液在1mL以内，摇匀。于电炉上加热至沸腾，立即用0.1%标准葡萄糖溶液滴定至蓝色消失，此滴定操作需在1min内完成。
糖化液测定：准确吸取5mL糖化液代替5mL空白液，其余操作同上。
四．计算
固体曲糖化酶活力定义：1g绝干固体曲，在30℃、pH4.6、1小时内水解可溶性淀粉为葡萄糖的毫克数。
糖化酶活力?（V0-V）?C?5001001???1000 55W式中：V0——5mL空白液消耗0.1%标准葡萄糖溶液的体积（mL）
V——5mL糖化液消耗0.1%标准葡萄糖溶液的体积（mL） C——标准葡萄糖溶液浓度（g/mL）
50/0.5——0.5mL糖化液换算成50mL糖化液中的糖量（g） 100/5——5mL浸出液换算成100mL浸出液中的糖量（g） W——绝干曲称取量（5.0g） 1000——g换算成mg
五．数据处理与分析