PEG沉淀法_病毒提纯方法

专业资料

1. Viruses such as baculovirus can be concentrated by polyethylene glycol precipitation.

2. Adjust the pH of the virus-containing supernatant to 7.2-7.5. Polyethylene glycol (PEG, MW 6,000) is added to a final concentration of 8% (w/v). 3. Stir at 4℃for 2 hours.

4. Centrifuge at 10,000 x g for 2 hours.

5. Resuspend the pellet in a small volume of appropriate buffer ( e.g., RNase-free ddH2 for virus RNA prep).

沉淀法-病毒提纯方法

主要是从稀的悬浮液中浓缩病毒,有中性盐沉淀法、聚乙二醇(PEG)沉淀法、有机溶剂沉淀 法、等电点沉淀法、皂土法和鱼精蛋白沉淀法等。

1.中性盐沉淀法:病毒一般在45%以上饱和度的硫酸铵溶液中沉淀,且保持其感染性。在含有病毒的组织培养液中加入等体积的饱和硫酸铵,可以很容易地沉淀某些病毒如狂犬病毒、鸡新城疫病毒等。

2.聚乙二醇沉淀法:聚乙二醇(PEG)为水溶性非离子型聚合物,具有各种不同的分子量,用于病毒沉淀的主 要是分子量为2 000~6000的PEG。将PEG配成50%左右的溶液,或直接将固体PEG加于病毒悬液中,使其达到所需浓度,通常在4℃搅拌过夜,然后离心使病毒沉淀。Tanncock(1985年) 成功地用PEG浓缩了禽脑脊髓炎病毒。 3.有机溶剂沉淀法:甲醇、氯仿、正丁醇、氟碳化合物等都可用于提纯病毒,但乙醚、氯仿等脂溶剂对于具有脂质囊膜的病毒具有破坏和灭活作用,故不适于这类病毒的浓缩提纯。

4.等电点沉淀法:病毒粒子在等电点时,所携带的正电荷与负电荷相互中和,因而失去相互排斥的作用而发生沉淀。多数病毒的等电点在pH4.5~5.5之间,因此在pH3~6范围内均可沉淀,由于一部分细胞成份在等电点时亦发生沉淀,此法效果不太理想,但从感染的组织培养液中浓缩病毒,可以获得较好结果。应用酸性范围的等电点沉淀或分级沉淀病毒时,必须注意pH对病毒活性的影响及病毒粒子电荷与组织蛋白电荷的差异。

5.皂土法:Girin(1989年)应用皂土在酸性条件下(pH4~4.5)吸附轮状病毒SA-11,再在碱性条 件下(pH8.5),又使其洗脱下来,从而达到纯化目的。

6.鱼精蛋白沉淀法:鱼精蛋白为碱性蛋白,具有携带其它蛋白质共沉淀的作用,能和直径大于50nm的病毒共同沉淀而不影响病毒的感染力。当向这种沉淀物加入1mol/LNaCl时,病毒又重新释放到悬液中,而鱼精蛋白仍然沉淀。直径小于50nm的小型病毒则不与鱼精蛋白共同沉淀。因此,可利用鱼精蛋白去除病毒材料中直径大于50nm的异种蛋白质。

聚乙二醇HOCH2(CH2OCH2)nCH2OH(n>4)( Polyethylene Glycol 简写为 PEG),它的亲水性强,溶于水和许多有机溶剂,对热稳定,有广泛围的分子量,在生物大分子制备中,用的较多的是分子量为6000~20000的 PEG。

PEG 的沉淀效果主要与其本身的浓度和分子量有关,同时还受离子强度、溶液pH 和温度等因素的影响。在一定的pH 值下,盐浓度越高,所需PEG 的浓度越低,溶液的pH 越接近目的物的等电点,沉淀所需PEG 的浓度越低。在一定范围内,高分子量和高浓度的PEG 沉淀的效率高。以上这些现象的理论解释还都仅仅是假设,未得到充分的证实,其解释主要有:①认为沉淀作用是聚合物与生物大分子发生共沉淀作用。②由于聚合物有较强的亲水性,使生物大分子脱水而发生沉淀。③聚合物与生物大分子之间以氢键相互作用形成复合物,在重力作用下形成沉淀析出。④通过空间位置排斥,使液体中生物大分子被迫挤聚在一起而发生沉淀。

有机聚合物沉淀的优点是:①操作条件温和,不易引起生物大分子变性;②沉淀效能高,使用很少量的PEG 即可以沉淀相当多的生物大分子;③沉淀后有机聚合物容易去除。

水溶性非离子型聚合物沉淀法常用的聚合物为聚乙二醇(PEG)及硫酸葡聚糖。水溶性聚合物沉淀蛋白质的机制尚不清楚,大致有如下解释:①聚合物与蛋白质形成共沉物;①聚合物与蛋白质之间发生水的重分配;①聚合物与蛋白质形成复合物。此法受许多因素影响,主要是pH、离子强度、蛋白质浓度和PEG的分子量等。分子量为 2000~6000的PEG皆适宜于做蛋白沉淀用。如若使用得当,效果甚为满意。一般认为,PEG浓度在3%~4%时沉淀免疫复合物,6%~7%可沉淀 IgM,8%~12%可沉淀IgG,12%~15%可沉淀其他球蛋白,25%可沉淀白蛋白。最突出的应用是用3%~4%的PEG沉淀免疫复合物,未结合的抗原和抗体留在溶液中。按此原理设计了快速测定法和循环免疫复合物测定法

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从网上搜索到得关于PEG沉淀提纯病毒的方法,先汇总至此贴,希望大家支持本版 1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒; 2、慢慢搅动并加入NaCl终浓度是0.5mol/L,有助于病毒的沉淀,再等量加入10%PEG(一般使用的是PEG6000就可以了。如果对样品的纯度不是严格要求的话,可以建议使用Millpore公司的离心浓缩柱,Amicon系列的可以一次浓缩15ml样品。);

3、4℃过夜或放置一段时间;

4、8000/min离心30分钟,收集病毒沉淀; 5、将病毒沉淀加入适量的pbs中,4℃过夜;

6、10000r/min离心1小时,沉淀即为浓缩的病毒。 还可以用梯度离心或其他方法进一步纯化 。

PEG沉淀法提纯病毒

1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒;

2、慢慢搅动并加入NaCl终浓度是0.5mol/L,有助于病毒的沉淀,再等量加入10%PEG(一般使用的是PEG6000就可以了。如果对样品的纯度不是严格要求的话,可以建议使用Millpore公司的离心浓缩柱,Amicon系列的可以一次浓缩15ml样品。);

3、4℃过夜或放置一段时间;

4、8000/min离心30分钟,收集病毒沉淀; 5、将病毒沉淀加入适量的pbs中,4℃过夜;

6、10000r/min离心1小时,沉淀即为浓缩的病毒。 还可以用梯度离心或其他方法进一步纯化 。

Concentrating virus (PEG6000)

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1. Viruses such as baculovirus can be concentrated by polyethylene glycol precipitation.

2. Adjust the pH of the virus-containing supernatant to 7.2-7.5. Polyethylene glycol (PEG, MW 6,000) is added to a final concentration of 8% (w/v).

0

3. Stir at 4 Cfor 2 hours.

4. Centrifuge at 10,000 x g for 2 hours.

5. Resuspend the pellet in a small volume of appropriate buffer ( e.g., RNase-free ddH2 for virus RNA prep).

PEG-it?慢病毒浓缩试剂 ? 价 格: ¥3802.5 ? 说 明: 欢迎询价详谈 ? 货 号:LV810A-1

PEG-it?慢病毒浓缩试剂

原理

PEG是高分子聚合物,具有高亲水性,在溶液中会吸收大量水分,减少病毒之间的距离,使病毒与病毒能够很容易的聚合在一起,病毒的相对浓度提高,达到沉淀浓缩的目的。

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PEG-it?中还含有特定的(SBI专属的)缓冲液,它能够保持病毒的活性。少量残留的PEG-it?还会提高感染效率,使病毒更稳定。 图1 使用简便快捷

只需将5倍的PEG-it?溶液与包含病毒颗粒的细胞培养基混合离心30分钟,即可得到10-100倍的病毒浓缩液 特点

?快捷:全程只需30min

高效:?能使病毒颗粒浓缩10-100倍

安全:?对所有靶细胞,包括胚胎干细胞是无毒的

?使用方便:无需使用特别的仪器,避免了昂贵的超高速离心机的使用,?只需普通离心机,低速离心即可 无残留:?没有细胞残片的残留,避免对细胞的毒性和免疫原性 ?提高转导效率:为动物转导提供高滴度的病毒 特别?适合大体积的病毒浓缩,解除了超滤管小量的限制 产品信息 货号 产品名称 包装体积 价格(¥) 说明 LV810A-1 PEG-it? Virus Precipitation 100 mL 3802.5 适用于400ml慢病毒细胞上清液浓Solution (100 mL aliquot) 缩 LV825A-1 PEG-it? Virus Precipitation 250 mL 8287.5 适用于1L慢病毒细胞上清液浓缩 Solution (250 mL aliquot)

纯化病毒用终浓度10%PEG处理后8000g离心,溶解于PBS。这样的方法对吗? PEG沉淀的原理是什么啊? 是这样的,纯化病毒和噬菌体都可以,原理就是PEG8000是一种高度的网状聚合物,很粘稠,可以把病毒沉淀下来。 Catalog # Product Name+ Size Price Buy Now K904-200 K904-50 中文名称 供应商 产品报价 PEG Virus Precipitation Kit PEG Virus Precipitation Kit 200 preparations $725.00 50 preparations $245.00 PEG Virus Precipitation Kit PEG病毒沉淀试剂盒(200次) Biovision ¥11600/200次分析 包装出来的重组病毒常常含量很少,因此通常需要浓缩之后才能进行储存或其它应用。另外,在病毒包装过程中,可能会产生有毒的蛋白或生物分子杂质。因此需要一种快速、简单而便宜的方法来浓缩病毒,同时去除杂质。 BioVision的PEG病毒沉淀试剂盒提供了一种简单方便省时的方法来浓缩病毒,无需超速离心。本试剂盒可用于小实验样品处理或者大规模高产出、高生物量病毒制备。本试剂盒可利用细胞培养液或者环境样品浓缩逆转录病毒、杆状病毒、慢病毒、噬菌体等。浓缩倍数可达100倍以上。试剂盒产品货号 K904-200 背景资料 产品描述 精心整理

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