水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法
1. 适用范围
本方法规定了生活饮用水中粪大肠菌群的滤膜测定方法。
本方法适用于生活饮用水和低浊度的水源水中粪大肠菌群数的测定。 2. 原理
滤膜是一种微孔性薄膜。将水样注入已灭菌的放油滤膜的率其中，经过抽虑，细菌即被截留在膜上，然后将滤膜贴于M-FC培养基上，44.5℃温度下进行培养，计数滤膜上生长的此特性的菌落数，计算出每1L水样中含有粪大肠菌群数。 3. 培养基与试剂 3.1 MF-C培养基
成份： A 胰胨 10g B 多胨 5g C 酵母浸膏 3g D 氯化钠 5g E 乳糖 12.5g
F 胆盐3号(Bile salt No.3) G 琼脂 15g H 苯胺蓝 0.2g I 蒸馏水 1000mL
制法：在1000mL蒸馏水中先加入玫红酸(10g/L)的氢氧化钠溶液[C(NaOH)＝0.2mol/L] 10mL，混合后，取500mL加入琼脂煮沸溶解，于另外500mL 蒸馏水中，加入除苯胺蓝以外的其他试剂，加热溶解，倒入已溶解的琼脂，混匀后调pH为7.4，加入苯胺蓝煮沸，迅速离开热源，待冷却至60℃左右，制成平板， 不可高压灭菌。
制好的培养基应存放于2～10℃，不超过96h。
本培养基也可不加琼脂，制成液体培养基，使用时加2mL于灭菌吸收垫上， 再将滤膜置于培养垫上培养。
3.2 EC培养基
成份：
A 胰蛋白胨 20g B 乳糖 5g
C 3号胆盐或混合胆盐 1.5g D 磷酸氢二钾 4g E 磷酸二氢钾 1.5g F 氯化钠 5g G 蒸馏水 1000mL
制法：将上述成份溶解于蒸馏水中， 分装到带有倒管的试管中， 115℃高压灭菌20min，最终pH为6.9±0.2。 4. 仪器
隔水式恒温培养箱或恒温水浴。
塑料培养皿： 60mm×15mm或50mm×12mm。 其他仪器同总大肠菌群滤膜法。 5. 步骤
准备工作：
5.1 滤膜灭菌：将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌三次，每次15min。前两次煮沸后需更换水洗涤2～3次，以除去残留溶剂。 5.2 滤器灭菌：用点燃的酒精棉球，火焰灭菌。也可用121℃高压灭菌20min。 5.3 过滤水样
用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，帖放在已灭菌的滤床上、，固定好滤器，将100mL水浴(如水样含菌数较多，可减少过滤水样量，或将水样稀释)注入滤器中，打开滤器阀门，在负0.5大气压下抽滤。 5.4 培养
水样滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在MF-C培养基上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全帖紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入44.5℃隔水式培养箱内培养22～24h。如使用恒温水浴，则需用塑料平皿，将皿盖紧，或用防水胶带贴封
每个平皿，将培养皿成叠封入塑料袋内，浸到44.5℃恒温水浴里，培养24±1h。粪大肠菌群在此培养基上菌落为蓝色，非粪大肠菌群菌落为灰色或奶油色。 5.5 对可疑菌落转种EC培养基，44.5℃培养24±2h，如产气则证实为粪大肠菌群。5.6 计数被证实的粪大肠菌落数，计算每100mL 水样中的粪大肠菌密度。
6. 参考文献
HJ/T 347-2007《水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法和滤膜法》（试行）