I.6.1 溶剂水
要求去离子水或蒸馏水，防止有抑制物（如Cu++离子）。测定物引进的有机碳不得超过10%。更高纯度的水用来消除高的空白值是有必要的。杂质可能来源于不纯的样品，或是离子交换树脂，或细菌的溶解物。每次测定应用同一种水。即先用DOC方法分析，但这种分析对密封瓶是没有必要的。淡水的耗氧量必须比较低。
I.6.2矿物元素储备液。
为了制备测定液，先必须制备合适浓度的储备液。制备好的储备液可用于各种分析方法（稀释不同倍数）:DOC消耗法，修正OECD法，二氧化碳评估法，呼吸机测压力法，密封瓶法。
MITIDE稀释倍数，特殊矿物介质的准备工作在每一个实验方法标题下给出。 储备液
用分析纯试剂制备下列储备液： （a)
KH2PO4 8.50g
K2HPO4 21.75g Na2HPO4 33.40g NH4Cl 0.50g 溶于水，稀释到1升，pH为7.4 （b)
CaCl2 27.50g
或CaCl2·2H2O 36.40g 溶于水稀释到1升。 （c)
MgSO4·7H2O 22.50g
溶于水稀释到1升。 （d)
FeCl3·6H2O 0.25g
溶于水稀释到1升。
注意：为了避免使用前立刻准备以上溶液，每升溶液中加入一滴浓盐酸或0.4克EDTA。
I.6.3矿物质储备液
举例来说，如果溶解度超过1g/L,可将测定物或参照物1-10克溶于去离子水，稀释到1升。
否则，在矿物质溶液中配置储备液，或直接将测定物加入矿物质溶液中。处理难溶物质的见附录II,但对于MITI方法，溶剂和乳化剂都不得使用。 I.6..4疫苗
疫苗可从多种途径得到：活化淤泥，下水道污水（未经氯化消毒），地表水以及泥沙，以上几个的混合物。对于DOC消耗法，二氧化碳评估法，和呼吸计法，如果使用了污泥，必须是从植物根部或是处理生活污水设备的泥土。从其他地方取回的已经发现实验结果有较高的分散度。对于修正的OECD粉末法，和密封瓶法，需要一些稀释过的没有经过污染的疫苗。更好的是从植物根部或处理污水设备的排出的污水。对于MITI测定，疫苗来自于各种资源，在该方法的标题下有描述。
I.6.4.1 活化污泥的疫苗
从通风透气长有污水处理植物的水槽或是实验室污水处理设备搜集活化污泥。如有必要用筛子除去粗的粒子，保证沉淀物在有氧环境中。
在过筛后可选择自然沉淀或是离心分离（例如：1000g分离10分钟），抛弃表层物质，可用无机介质洗涤沉淀物，将浓的沉淀物悬浮于矿物环境，使之超过3-5克悬浮物/升，活化直到达到要求。
沉淀物必须取之于一合适的普通的工作植物，如果沉淀物不得不采自于高处理效率的植物，或被认为可能携带抑制物，则必须洗干净。沉淀或离心，经完全混匀后，重新悬浮，去表面，再次在更大空间悬浮洗涤，直到污水没有催化剂或抑制剂。
在完全悬浮化完成后，或是未处理的沉淀，使用前先称量干重。
更进一步的处理方法，是纯化活化沉淀物（3-5g悬浮物/升），在机械搅拌器中等速度处理沉淀物2分钟。沉淀搅拌后，澄清30分钟。或视情况更长。倒出其中的液体做疫苗使用。 I.6.4.2疫苗的其他来源。
同样可以用处理植物的排放污水或是实验室污水处理设备得到疫苗，收集新鲜的
疫苗，在运输时保证有氧活化。
澄清疫苗1小时或用粗糙滤纸过滤，活化滤液直到满足要求。这种疫苗可能每升矿物培养液中可能要用100mL。
更进一步的疫苗是地表水，用此方法时，收集合适的地表水，例如：河流湖泊。保证活化直到满足要求，过滤或离心浓缩疫苗。 I.6.5疫苗的预处理
疫苗可能预处理适应了实验条件，但不一定适应了测定物。预处理主要在矿物介质中氧化污泥或污水5到7天。预处理有时可将减少空白值，提高测定方法的精密度。而对MITI方法，预处理是没有必要的。 I.6.6无机对照组
需修改如有需要，可检查测定物的无机降解（非生物降解），方法是通过测量无菌对照组的DOC消耗量，或二氧化碳评估法。无菌花可用膜过滤，或加入一定量的毒性物质。如果是用膜过滤，给样品消毒以保证无菌。除非测定物的吸附可能已被排除，否则检测样品的DOC变化。特别是用活化污泥中的细菌测量生物降解程度，必须包括一个无菌对照组。 I.6.7长颈瓶数量
长颈瓶数量在每个实验标题下有描叙。 下列类型的组合可能会用到： ? 悬浮测定组：包括测定物和疫苗。 ? 疫苗空白组：只有疫苗。 ? 步骤对照组：包括参照物和疫苗 ? 无菌对照组：包括测定物，无菌
? 吸附对照组：包括测定物，疫苗，无菌设备。 ? 毒性对照组包括测定物，参照物和疫苗。
对于悬浮组和疫苗空白组，必须是平行实验。建议在其他长颈瓶也采用平行实验。 但这不一定能做到。只要保证样本和仪器以确保10天观测期数据变化能读出。 I.7.实验数据和评估
为了计算Dt,，我们使用了容器和疫苗的两个参数测量的平均值。特殊测定的公式
在下节给出。降解的过程用图表形式表示，10天的视察期也说明清楚。计算和实验结果报告10天观测期的百分数值，稳定期，测定结束时的值，也是合理应该的。
在呼吸计测定中，含氮化合物可能因为硝化作用影响耗氧量（见附录II和IV）。 I.7.1.用DOC消耗法测定降解度
几个样品每次生物降解百分数必须分开计算，因为每个测定瓶含有测定物是使用的DOC测量平均值，以保证测定的有效性。Dt可用小列公式计算：
ThODNH4?16?2C?1/2(h?c1?3n)?3s?5/2p?1/2na?o?MWmg/mg
上式中：
Dt =%时间t生物降解百分数
C0 =在有测定物时代疫苗介质中开始时平均DOC浓度（mg DOC/L）。 Ct =在有测定物时代疫苗介质中时间t时平均DOC浓度（mg DOC/L）。 Cb0 =在空白无菌矿物介质中起始DOC浓度（mg DOC/L）。 Cbt = 在空白无菌矿物介质中时间t时DOC浓度（mg DOC/L）。 I.7.2 测定生物降解度的特殊分析方法
当特殊分析方法数据是可靠的，可以从下式计算主要生物降解度：
Dt?Sb?SaSb?100
上式中：
Dt =%时间t时生物降解度，正常为28天。 Sa =实验结束时带疫苗介质中生育测定物的量。 Sb =空白测定溶液中测定物之加入的量。 I.7.3 无机降解
如做了无菌对照组，可从下式计算无机降解百分数：
CS(0)?Cs(t)?100%无机降解百分数=上式中：
Cs(t)
Cs(t) 天数为0时无菌对照组的DOC浓度。 Cs(0) 天数为t时无菌对照组的DOC浓度。
I.8.实验结果报告
测定结果报告应包括(如可能)： ? 测定物与参照物的浓度； ? 测定条件；
? 污泥中工业废物含量和性质，如果知道的话； ? 测定持续时间和温度； ? 对于难溶物的处理方法；
? 使用何种方法，如有修正给出科学解释和理由； ? 数据记录纸；
? 任何观察到的抑制现象；
? 特殊的化学分析数据，如果有的话； ? 中间物的分析数据，如有的话；
测定物和参考物生物降解百分数对时间作图，延迟阶段，降解阶段，10天观测期，斜坡期能明显判断出。测定包括多个实验的有效数据，图中应使用生物降解百分数的平均值。
10天观测期后，以及高稳定期，实验结束时的百分数变化。