2015年竞赛指南(福建生物工程职业技术学院)(320)

微生物技术及应用竞赛项目操作规范(Ⅱ)

液体培养基的制备

参赛选手在规定的20min内,配备一定体积(200~500ml,由裁判组于比赛当天确定)液体培养基(培养基范围:LB培养基和沙氏葡萄糖培养基,竞赛现场将提供配方),均分于250ml的三角瓶中,并用全自动高压蒸汽灭菌锅完成灭菌准备操作。

LB培养基配方:Tryptone(胰蛋白胨):1%, Yeast Extract(酵母提取物):0.5%, NaCl(氯化钠):1% ,pH=7.0。

沙氏葡萄糖培养基配方:Tryptone(胰蛋白胨):1%, Dextrose(葡萄糖) :4%, pH=5.4。

具体操作规范详见下表。 项目 考核内容 计算 操作规范 根据所提供的培养基配方计算各组分应称量的量,并记录。 调节电子天平水平泡至中间位置。 天平的准备 称量前应先将电子天平调零。 称量 称量操作 称量纸的边角应对折防止培养基撒出。 称取不同的培养基成分应使用不同的药匙,不同的称量纸,防止交叉污染。 称量过程应减少药品浪费。 药品称量完成后应盖好瓶盖并放回原位,标签朝外。 天平使用后应关机、清扫天平盘。 将培养基各种成分按配方称量好后,及时放入烧杯中,防止部分培养基受潮粘在称量纸上。 溶化 培养基溶化 用量筒量取适当体积的蒸馏水,加入到烧杯中。 培养基在溶解过程中需不断搅拌,溶解至培养基澄清无沉淀,表明培养基溶解彻底。 57

用玻璃棒蘸取少量培养基,在试纸一端点一下即可,根据酸碱度利用1mol/L 调酸 碱度 pH的测定 NaOH和1mol/L HCl进行调节pH。 调pH值时,边滴加试剂边搅拌,并随时用pH试纸测量,避免pH回调。 将培养基平均分装入2~5个三角瓶中,分装过程中注意操作防止培养基洒出。 分装 分装和包扎 包扎 本实验提供250ml的三角瓶用于分装培养基,一般装液量不超过三角瓶装量1/2即可。 分装时应避免培养基粘附瓶口,以免引起污染。 分装完成后包好封口膜后,外面包牛皮纸一层或旧报纸二层,用绳正确捆扎,不打死结。 包扎完成后可在牛皮纸或报纸上面标注培养基名称、制备日期及制备人编号,并贴上灭菌指示带便于灭菌结束后判断培养基是否灭菌完全。 接通电源,打开开关,向锅内加入适量的水,保证水位达到标准。加水选择去离子水或蒸馏水,防止水垢产生,使锅体不容易被腐蚀。 在网框中放入培养基,将网框提入灭菌锅内,检查密封圈并加盖,采用对灭菌 灭菌锅的 操作 设置灭菌温度及时间。 检查上排气阀应处于开启状态,下排气阀和安全阀应处于关闭状态,准备灭菌。因时间限制,本实验将这一步作为实验完成标志。 实验后整理 实验过程应及时清理废弃物、各药品归位以及实验台的整理等。 文明 操作 器皿破损 器皿破损主要指操作过程出现的烧杯、三角瓶等器皿的损坏情况。 角式均匀拧紧锅盖上的螺栓,使螺栓松紧一致,勿使漏气。

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选手编号:

液体培养基制备计算结果记录(1) 培养基配方 应称取量 Tryptone(胰蛋白胨) 1% Dextrose(葡萄糖) 4% 蒸馏水 瓶数 pH=5.4

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选手编号: 液体培养基制备计算结果记录(2) 培养基配方 应称取量 Tryptone(胰蛋白胨) 1% Yeast Extract(酵母提取物) 0.5% NaCl(氯化钠) 1% 蒸馏水 瓶数 pH=7.0

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