陕西威水饮品有限公司质量管理文件
题 目 制 定 制定日期 颁发部门 分发单位 菌落总数测定作业指导书 质量管理部 编 码 WI-ZL-009 审 核 批 准 审核日期 批准日期 颁发数量 3份 生效日期 质量管理部、综合管理部、生产供应部 共5页 第1页 1目的：规定了菌落总数检测方法。
2适用范围：适用于固体、液体类样品菌落总数的检测。
3编写依据：GB4789.2-2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数的测定》 4术语和定义： 4.1 菌落总数
食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。 5.设备和材料：
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 5.1 恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃ 5.2 冰箱：2℃～5℃ 5.3 恒温水浴箱：46℃±1℃ 5.4 天平：感量为0.1g 5.5 均质器 5.6 振荡器
5.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头
5.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL 3.9 无菌培养皿：直径90 mm
5.10 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸 5.11 放大镜或/和菌落计数器 6.培养基和试剂:
6.1 平板计数琼脂培养基：见附录A 中A.1 6.2 磷酸盐缓冲液：见附录A 中A.2 6.3 无菌生理盐水：见附录A 中A.3
题 目 菌落总数测定作业指导书 编码：WI-ZL-009 共5页 第2页 7.检验程序：
菌落总数的检验程序见图1。
检 样 25g（mL）样品+225mL稀释液，均质 10倍系列稀释 选择适宜2个～3个连续稀释度的样品匀液， 各取1mL分别加入无菌培养皿内 每皿中加入15mL～20mL 平板计数琼脂培养基，混匀 培养 计数各平板菌落数 计算菌落总数 报告
图1 菌落总数的检验程序
8.操作步骤： 8.1 样品的稀释
8.1.1 固体和半固体样品：称取25g 样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min 均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。
8.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25mL 样品置盛有225mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀
题 目 菌落总数测定作业指导书 编码：WI-ZL-009 共5页 第3页 液。
8.1.3 用1mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
8.1.4 按6.1.3 操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。
8.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 8.1.6 及时将15mL～20mL 冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。 8.2 培养
8.2.1 待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。
8.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按8.2.1 条件进行培养。 8.3 菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。
8.3.1 选取菌落数在30CFU～300CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU 的平板记录具体菌落数，大于300CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
8.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。
8.3.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。
9.结果与报告：