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实验方法原理

 

 

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1

:间接法测抗体示意图

 

间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是?/p>

微小的颗粒,

经洗涤,

加入含有被测抗体之标本,

再经孵育洗涤后,

加入酶标记抗抗体?/p>

(

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人的标本来说即加酶标抗人球蛋?/p>

IgG

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IgM)

,再经孵育洗涤后,加底物显色,底物降解的

量,

即为欲测抗体的量?/p>

其结果可用目测或用分光光度计定量测定?/p>

本法用同种抗原包被固

相载体后?/p>

只要用一种酶标记抗人球蛋白,

即可作多种人的传染病?/p>

寄生虫病以及其他疾病

的血清学诊断。如用酶标记抗人

IgM

,则可用于早期诊断?/p>

 

 

实验材料

 

血?/p>

 

 

血?/p>

 

 

体液

 

试剂、试剂盒

 

PBS 

 

 

包被缓冲?/p>

 

 

硫酸

 

 

 

柠檬?/p>

 

仪器、耗材

 

96

孔板

 

 

酶标比色?/p>

 

 

移液?/p>

 

 

离心?/p>

 

 

 

离心管盒

 

实验步骤

 

一、包被抗原:用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度(

5

?/p>

20 

μ

g/ml

)各

0.3 ml

加于微反应板

每个凹孔?/p>

,4

℃过夜或

37

℃水?/p>

2

?/p>

3

小时,贮存冰箱?/p>

 

 

二、洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含

0.05%

吐温

-20

)洗

3

次,每次

5

分钟?/p>

 

 

三?/p>

加被检标本?/p>

每凹孔加入用含有

0.05%

吐温

-20

的稀释缓冲液稀释的被检血清各

0. 2ml

?/p>

37

℃,作用

1

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2

小时?/p>

 

 

四、洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含

0.05%

吐温

-20

)洗

3

次,每次

5

分钟?/p>

 

 

五、加入酶结合物:每凹孔加入稀释缓冲液稀释的酶结合物

0.2 ml 37

℃作?/p>

1

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2

小时?/p>

 

 

六、洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含

0.05%

吐温

-20

)洗

3

次,每次

5

分钟?/p>

 

 

七、加?/p>

0.2 ml

底物溶液于每个凹?/p>

(OPD

?/p>

OT)

,室温作?/p>

30

分钟(另作一空白对照?/p>

0.4 ml

底物?/p>

0.1 ml

终止剂)

?/p>

 

 

八、加终止剂:每凹孔加

2 M H2SO4

?/p>

2 M

柠檬?/p>

0.05 ml

?/p>

 

 

九、观察记录结果:目测或用酶标比色计测定(

OPD

?/p>

492nm

?/p>

OD

值?/p>

 

其他

 

一?/p>

ELISA

影响因素

 

1. 

 

试验样品

 

血清、血浆或其他体液,均可作?/p>

ELISA

的试验样品(标本?/p>

。但应注意分离血清时,血?/p>

要求放置室温中凝固收缩,不宜置冰箱(

4

℃)中凝固,否则会使大部?/p>

IgM

和少?/p>

IgG

?/p>

失活性。关于人血清在保存过程中抗体的稳定性报导尚不多。但一般认为作

ELISA

血清最

好要新鲜?/p>

若要贮藏,必须少量分装保存于低温冰箱,并防止反复冻融。血浆可用肝素毛?/p>

管法采血,而血清可用滤纸片法采血?/p>

 

 

被检血清或血浆标本,可用含保护性封阻剂(吐?/p>

-20

)或称湿润剂的缓冲液来稀释。也?/p>

加入一些蛋白质,如

1%

牛血清白蛋白等来稀释。然后再加到已经用抗原或抗体包被的固?/p>

载体中进行孵育?/p>

此种被试标本可作一系列稀释度测定?/p>

也可用一个稀释度测定?/p>

对于作某

一个传染病的诊断来说,

最好先用一系列稀释度作一批标本测定,

求出对诊断有意义的一?/p>

稀释度(即测定剂量反应曲线?/p>

,然后用一个稀释测定即可。最适稀释度和孵育时间均需?

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1

:间接法测抗体示意图

 

间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是?/p>

微小的颗粒,

经洗涤,

加入含有被测抗体之标本,

再经孵育洗涤后,

加入酶标记抗抗体?/p>

(

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人的标本来说即加酶标抗人球蛋?/p>

IgG

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IgM)

,再经孵育洗涤后,加底物显色,底物降解的

量,

即为欲测抗体的量?/p>

其结果可用目测或用分光光度计定量测定?/p>

本法用同种抗原包被固

相载体后?/p>

只要用一种酶标记抗人球蛋白,

即可作多种人的传染病?/p>

寄生虫病以及其他疾病

的血清学诊断。如用酶标记抗人

IgM

,则可用于早期诊断?/p>

 

 

实验材料

 

血?/p>

 

 

血?/p>

 

 

体液

 

试剂、试剂盒

 

PBS 

 

 

包被缓冲?/p>

 

 

硫酸

 

 

 

柠檬?/p>

 

仪器、耗材

 

96

孔板

 

 

酶标比色?/p>

 

 

移液?/p>

 

 

离心?/p>

 

 

 

离心管盒

 

实验步骤

 

一、包被抗原:用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度(

5

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20 

μ

g/ml

)各

0.3 ml

加于微反应板

每个凹孔?/p>

,4

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37

℃水?/p>

2

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小时,贮存冰箱?/p>

 

 

二、洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含

0.05%

吐温

-20

)洗

3

次,每次

5

分钟?/p>

 

 

三?/p>

加被检标本?/p>

每凹孔加入用含有

0.05%

吐温

-20

的稀释缓冲液稀释的被检血清各

0. 2ml

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37

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1

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2

小时?/p>

 

 

四、洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含

0.05%

吐温

-20

)洗

3

次,每次

5

分钟?/p>

 

 

五、加入酶结合物:每凹孔加入稀释缓冲液稀释的酶结合物

0.2 ml 37

℃作?/p>

1

?/p>

2

小时?/p>

 

 

六、洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含

0.05%

吐温

-20

)洗

3

次,每次

5

分钟?/p>

 

 

七、加?/p>

0.2 ml

底物溶液于每个凹?/p>

(OPD

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OT)

,室温作?/p>

30

分钟(另作一空白对照?/p>

0.4 ml

底物?/p>

0.1 ml

终止剂)

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八、加终止剂:每凹孔加

2 M H2SO4

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九、观察记录结果:目测或用酶标比色计测定(

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492nm

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值?/p>

 

其他

 

一?/p>

ELISA

影响因素

 

1. 

 

试验样品

 

血清、血浆或其他体液,均可作?/p>

ELISA

的试验样品(标本?/p>

。但应注意分离血清时,血?/p>

要求放置室温中凝固收缩,不宜置冰箱(

4

℃)中凝固,否则会使大部?/p>

IgM

和少?/p>

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失活性。关于人血清在保存过程中抗体的稳定性报导尚不多。但一般认为作

ELISA

血清最

好要新鲜?/p>

若要贮藏,必须少量分装保存于低温冰箱,并防止反复冻融。血浆可用肝素毛?/p>

管法采血,而血清可用滤纸片法采血?/p>

 

 

被检血清或血浆标本,可用含保护性封阻剂(吐?/p>

-20

)或称湿润剂的缓冲液来稀释。也?/p>

加入一些蛋白质,如

1%

牛血清白蛋白等来稀释。然后再加到已经用抗原或抗体包被的固?/p>

载体中进行孵育?/p>

此种被试标本可作一系列稀释度测定?/p>

也可用一个稀释度测定?/p>

对于作某

一个传染病的诊断来说,

最好先用一系列稀释度作一批标本测定,

求出对诊断有意义的一?/p>

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,然后用一个稀释测定即可。最适稀释度和孵育时间均需?

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:间接法测抗体示意图

 

间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是?/p>

微小的颗粒,

经洗涤,

加入含有被测抗体之标本,

再经孵育洗涤后,

加入酶标记抗抗体?/p>

(

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人的标本来说即加酶标抗人球蛋?/p>

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,再经孵育洗涤后,加底物显色,底物降解的

量,

即为欲测抗体的量?/p>

其结果可用目测或用分光光度计定量测定?/p>

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相载体后?/p>

只要用一种酶标记抗人球蛋白,

即可作多种人的传染病?/p>

寄生虫病以及其他疾病

的血清学诊断。如用酶标记抗人

IgM

,则可用于早期诊断?/p>

 

 

实验材料

 

血?/p>

 

 

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体液

 

试剂、试剂盒

 

PBS 

 

 

包被缓冲?/p>

 

 

硫酸

 

 

 

柠檬?/p>

 

仪器、耗材

 

96

孔板

 

 

酶标比色?/p>

 

 

移液?/p>

 

 

离心?/p>

 

 

 

离心管盒

 

实验步骤

 

一、包被抗原:用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度(

5

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20 

μ

g/ml

)各

0.3 ml

加于微反应板

每个凹孔?/p>

,4

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37

℃水?/p>

2

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3

小时,贮存冰箱?/p>

 

 

二、洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含

0.05%

吐温

-20

)洗

3

次,每次

5

分钟?/p>

 

 

三?/p>

加被检标本?/p>

每凹孔加入用含有

0.05%

吐温

-20

的稀释缓冲液稀释的被检血清各

0. 2ml

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37

℃,作用

1

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2

小时?/p>

 

 

四、洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含

0.05%

吐温

-20

)洗

3

次,每次

5

分钟?/p>

 

 

五、加入酶结合物:每凹孔加入稀释缓冲液稀释的酶结合物

0.2 ml 37

℃作?/p>

1

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2

小时?/p>

 

 

六、洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含

0.05%

吐温

-20

)洗

3

次,每次

5

分钟?/p>

 

 

七、加?/p>

0.2 ml

底物溶液于每个凹?/p>

(OPD

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OT)

,室温作?/p>

30

分钟(另作一空白对照?/p>

0.4 ml

底物?/p>

0.1 ml

终止剂)

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八、加终止剂:每凹孔加

2 M H2SO4

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2 M

柠檬?/p>

0.05 ml

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九、观察记录结果:目测或用酶标比色计测定(

OPD

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492nm

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OD

值?/p>

 

其他

 

一?/p>

ELISA

影响因素

 

1. 

 

试验样品

 

血清、血浆或其他体液,均可作?/p>

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。但应注意分离血清时,血?/p>

要求放置室温中凝固收缩,不宜置冰箱(

4

℃)中凝固,否则会使大部?/p>

IgM

和少?/p>

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失活性。关于人血清在保存过程中抗体的稳定性报导尚不多。但一般认为作

ELISA

血清最

好要新鲜?/p>

若要贮藏,必须少量分装保存于低温冰箱,并防止反复冻融。血浆可用肝素毛?/p>

管法采血,而血清可用滤纸片法采血?/p>

 

 

被检血清或血浆标本,可用含保护性封阻剂(吐?/p>

-20

)或称湿润剂的缓冲液来稀释。也?/p>

加入一些蛋白质,如

1%

牛血清白蛋白等来稀释。然后再加到已经用抗原或抗体包被的固?/p>

载体中进行孵育?/p>

此种被试标本可作一系列稀释度测定?/p>

也可用一个稀释度测定?/p>

对于作某

一个传染病的诊断来说,

最好先用一系列稀释度作一批标本测定,

求出对诊断有意义的一?/p>

稀释度(即测定剂量反应曲线?/p>

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实验方法原理 - 百度文库
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实验方法原理

 

 

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1

:间接法测抗体示意图

 

间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是?/p>

微小的颗粒,

经洗涤,

加入含有被测抗体之标本,

再经孵育洗涤后,

加入酶标记抗抗体?/p>

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人的标本来说即加酶标抗人球蛋?/p>

IgG

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IgM)

,再经孵育洗涤后,加底物显色,底物降解的

量,

即为欲测抗体的量?/p>

其结果可用目测或用分光光度计定量测定?/p>

本法用同种抗原包被固

相载体后?/p>

只要用一种酶标记抗人球蛋白,

即可作多种人的传染病?/p>

寄生虫病以及其他疾病

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IgM

,则可用于早期诊断?/p>

 

 

实验材料

 

血?/p>

 

 

血?/p>

 

 

体液

 

试剂、试剂盒

 

PBS 

 

 

包被缓冲?/p>

 

 

硫酸

 

 

 

柠檬?/p>

 

仪器、耗材

 

96

孔板

 

 

酶标比色?/p>

 

 

移液?/p>

 

 

离心?/p>

 

 

 

离心管盒

 

实验步骤

 

一、包被抗原:用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度(

5

?/p>

20 

μ

g/ml

)各

0.3 ml

加于微反应板

每个凹孔?/p>

,4

℃过夜或

37

℃水?/p>

2

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3

小时,贮存冰箱?/p>

 

 

二、洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含

0.05%

吐温

-20

)洗

3

次,每次

5

分钟?/p>

 

 

三?/p>

加被检标本?/p>

每凹孔加入用含有

0.05%

吐温

-20

的稀释缓冲液稀释的被检血清各

0. 2ml

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37

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1

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2

小时?/p>

 

 

四、洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含

0.05%

吐温

-20

)洗

3

次,每次

5

分钟?/p>

 

 

五、加入酶结合物:每凹孔加入稀释缓冲液稀释的酶结合物

0.2 ml 37

℃作?/p>

1

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小时?/p>

 

 

六、洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含

0.05%

吐温

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3

次,每次

5

分钟?/p>

 

 

七、加?/p>

0.2 ml

底物溶液于每个凹?/p>

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分钟(另作一空白对照?/p>

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八、加终止剂:每凹孔加

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九、观察记录结果:目测或用酶标比色计测定(

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值?/p>

 

其他

 

一?/p>

ELISA

影响因素

 

1. 

 

试验样品

 

血清、血浆或其他体液,均可作?/p>

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的试验样品(标本?/p>

。但应注意分离血清时,血?/p>

要求放置室温中凝固收缩,不宜置冰箱(

4

℃)中凝固,否则会使大部?/p>

IgM

和少?/p>

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失活性。关于人血清在保存过程中抗体的稳定性报导尚不多。但一般认为作

ELISA

血清最

好要新鲜?/p>

若要贮藏,必须少量分装保存于低温冰箱,并防止反复冻融。血浆可用肝素毛?/p>

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被检血清或血浆标本,可用含保护性封阻剂(吐?/p>

-20

)或称湿润剂的缓冲液来稀释。也?/p>

加入一些蛋白质,如

1%

牛血清白蛋白等来稀释。然后再加到已经用抗原或抗体包被的固?/p>

载体中进行孵育?/p>

此种被试标本可作一系列稀释度测定?/p>

也可用一个稀释度测定?/p>

对于作某

一个传染病的诊断来说,

最好先用一系列稀释度作一批标本测定,

求出对诊断有意义的一?/p>

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,然后用一个稀释测定即可。最适稀释度和孵育时间均需?



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