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流式细胞仪常用的几种检测方法(转载?/p>

 

 

一、测定用乙醇固定?/p>

DNA

的含?/p>

 

1

、培养细胞的

DNA

含量的测?/p>

精品文档,超值下?/p>

 

 

制备单细胞悬液于

200μl

?/p>

PBS

缓冲液中?/p>

 

加入

2ml

预冷?/p>

70%

乙醇?℃保存;

 

?/p>

:

细胞固定的一般步?/p>

 

1) 

  

 

  

 

 

取单细胞悬液

1

?×106

个细胞于

PBS

?/p>

PH=7.2

)缓冲液中;

 

2) 

  

 

  

 

 

300g

离心

5

分钟,弃上清,反复两次;

 

3) 

  

 

  

 

 

重悬细胞?/p>

0.5ml PBS

缓冲液中?/p>

 

4) 

  

 

  

 

 

将细胞悬液放置于

2

?/p>

3ml

?/p>

70%

乙醇中,混匀,保存于

4℃,至少

30

?

钟。在

4℃条件下可保?/p>

2~3

周?/p>

 

注意?/p>

 

²

 

  

 

  

 

根据实验的要求,固定剂也可选用

1

?/p>

3%

多聚甲醛?/p>

 

²

 

  

 

  

 

将乙醇作为固定剂时,乙醇应预冷至

0

?℃;

 

²

 

  

 

  

 

细胞在固定时,固定剂应缓慢滴入细胞悬液中,使固定剂的浓度缓慢增加?

并不断震摇,以免细胞成团(特别是用乙醇固定时)?/p>

 

²

 

  

 

  

 300g

离心

5

分钟,去上清,再重悬?/p>

400μl PBS

中;

 

²

 

  

 

  

 

显微镜下观察,若有明显的黏附,须再用筛网过滤?/p>

 

²

 

  

 

  

 

加入

PI

(含

Rnase

),避光孵育

30

分钟?/p>

 

²

 

  

 

  

 

上机检测?/p>

 

2

、新鲜组织的

DNA

含量的测?/p>

 

1) 

  

 

  

 

 

?/p>

200mg

湿重组织用机械法制成单细胞悬液;

 

2) 

  

 

  

 

 

500g

离心

5

分钟?/p>

 

3) 

  

 

  

 

 

弃上清,重悬?/p>

10ml

染色

-

去污剂中?/p>

 

4) 

  

 

  

 

 

再过滤,?/p>

200

目的筛网?/p>

70~80μm

的筛网过滤;

 

5) 

  

 

  

 

 

上机检测?/p>

 

3

、石蜡包埋组织切片的

DNA

含量的测?/p>

 

1) 

  

 

  

 

 

从石蜡包埋切取切?/p>

50 μm

厚,

2~3

片,制成单细胞悬液;

 

2) 

  

 

  

 

 

?/p>

PBS

缓冲液洗涤,

500g

离心

5

分钟,弃上清?/p>

 

3) 

  

 

  

 

 

加入

PI

?/p>

1ml

室温避光

30

分钟?/p>

 

4) 

  

 

  

 

 

调整细胞浓度?/p>

1×106/ml?/p>

 

5) 

  

 

  

 

 

上机检测?/p>

 

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流式细胞仪常用的几种检测方法(转载?/p>

 

 

一、测定用乙醇固定?/p>

DNA

的含?/p>

 

1

、培养细胞的

DNA

含量的测?/p>

精品文档,超值下?/p>

 

 

制备单细胞悬液于

200μl

?/p>

PBS

缓冲液中?/p>

 

加入

2ml

预冷?/p>

70%

乙醇?℃保存;

 

?/p>

:

细胞固定的一般步?/p>

 

1) 

  

 

  

 

 

取单细胞悬液

1

?×106

个细胞于

PBS

?/p>

PH=7.2

)缓冲液中;

 

2) 

  

 

  

 

 

300g

离心

5

分钟,弃上清,反复两次;

 

3) 

  

 

  

 

 

重悬细胞?/p>

0.5ml PBS

缓冲液中?/p>

 

4) 

  

 

  

 

 

将细胞悬液放置于

2

?/p>

3ml

?/p>

70%

乙醇中,混匀,保存于

4℃,至少

30

?

钟。在

4℃条件下可保?/p>

2~3

周?/p>

 

注意?/p>

 

²

 

  

 

  

 

根据实验的要求,固定剂也可选用

1

?/p>

3%

多聚甲醛?/p>

 

²

 

  

 

  

 

将乙醇作为固定剂时,乙醇应预冷至

0

?℃;

 

²

 

  

 

  

 

细胞在固定时,固定剂应缓慢滴入细胞悬液中,使固定剂的浓度缓慢增加?

并不断震摇,以免细胞成团(特别是用乙醇固定时)?/p>

 

²

 

  

 

  

 300g

离心

5

分钟,去上清,再重悬?/p>

400μl PBS

中;

 

²

 

  

 

  

 

显微镜下观察,若有明显的黏附,须再用筛网过滤?/p>

 

²

 

  

 

  

 

加入

PI

(含

Rnase

),避光孵育

30

分钟?/p>

 

²

 

  

 

  

 

上机检测?/p>

 

2

、新鲜组织的

DNA

含量的测?/p>

 

1) 

  

 

  

 

 

?/p>

200mg

湿重组织用机械法制成单细胞悬液;

 

2) 

  

 

  

 

 

500g

离心

5

分钟?/p>

 

3) 

  

 

  

 

 

弃上清,重悬?/p>

10ml

染色

-

去污剂中?/p>

 

4) 

  

 

  

 

 

再过滤,?/p>

200

目的筛网?/p>

70~80μm

的筛网过滤;

 

5) 

  

 

  

 

 

上机检测?/p>

 

3

、石蜡包埋组织切片的

DNA

含量的测?/p>

 

1) 

  

 

  

 

 

从石蜡包埋切取切?/p>

50 μm

厚,

2~3

片,制成单细胞悬液;

 

2) 

  

 

  

 

 

?/p>

PBS

缓冲液洗涤,

500g

离心

5

分钟,弃上清?/p>

 

3) 

  

 

  

 

 

加入

PI

?/p>

1ml

室温避光

30

分钟?/p>

 

4) 

  

 

  

 

 

调整细胞浓度?/p>

1×106/ml?/p>

 

5) 

  

 

  

 

 

上机检测?/p>

 

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一、测定用乙醇固定?/p>

DNA

的含?/p>

 

1

、培养细胞的

DNA

含量的测?/p>

精品文档,超值下?/p>

 

 

制备单细胞悬液于

200μl

?/p>

PBS

缓冲液中?/p>

 

加入

2ml

预冷?/p>

70%

乙醇?℃保存;

 

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:

细胞固定的一般步?/p>

 

1) 

  

 

  

 

 

取单细胞悬液

1

?×106

个细胞于

PBS

?/p>

PH=7.2

)缓冲液中;

 

2) 

  

 

  

 

 

300g

离心

5

分钟,弃上清,反复两次;

 

3) 

  

 

  

 

 

重悬细胞?/p>

0.5ml PBS

缓冲液中?/p>

 

4) 

  

 

  

 

 

将细胞悬液放置于

2

?/p>

3ml

?/p>

70%

乙醇中,混匀,保存于

4℃,至少

30

?

钟。在

4℃条件下可保?/p>

2~3

周?/p>

 

注意?/p>

 

²

 

  

 

  

 

根据实验的要求,固定剂也可选用

1

?/p>

3%

多聚甲醛?/p>

 

²

 

  

 

  

 

将乙醇作为固定剂时,乙醇应预冷至

0

?℃;

 

²

 

  

 

  

 

细胞在固定时,固定剂应缓慢滴入细胞悬液中,使固定剂的浓度缓慢增加?

并不断震摇,以免细胞成团(特别是用乙醇固定时)?/p>

 

²

 

  

 

  

 300g

离心

5

分钟,去上清,再重悬?/p>

400μl PBS

中;

 

²

 

  

 

  

 

显微镜下观察,若有明显的黏附,须再用筛网过滤?/p>

 

²

 

  

 

  

 

加入

PI

(含

Rnase

),避光孵育

30

分钟?/p>

 

²

 

  

 

  

 

上机检测?/p>

 

2

、新鲜组织的

DNA

含量的测?/p>

 

1) 

  

 

  

 

 

?/p>

200mg

湿重组织用机械法制成单细胞悬液;

 

2) 

  

 

  

 

 

500g

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5

分钟?/p>

 

3) 

  

 

  

 

 

弃上清,重悬?/p>

10ml

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-

去污剂中?/p>

 

4) 

  

 

  

 

 

再过滤,?/p>

200

目的筛网?/p>

70~80μm

的筛网过滤;

 

5) 

  

 

  

 

 

上机检测?/p>

 

3

、石蜡包埋组织切片的

DNA

含量的测?/p>

 

1) 

  

 

  

 

 

从石蜡包埋切取切?/p>

50 μm

厚,

2~3

片,制成单细胞悬液;

 

2) 

  

 

  

 

 

?/p>

PBS

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500g

离心

5

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3) 

  

 

  

 

 

加入

PI

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1ml

室温避光

30

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4) 

  

 

  

 

 

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上机检测?/p>

 

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流式细胞仪常用的几种检测方?- 百度文库
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一、测定用乙醇固定?/p>

DNA

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1

、培养细胞的

DNA

含量的测?/p>

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制备单细胞悬液于

200μl

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70%

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1) 

  

 

  

 

 

取单细胞悬液

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PBS

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2) 

  

 

  

 

 

300g

离心

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3) 

  

 

  

 

 

重悬细胞?/p>

0.5ml PBS

缓冲液中?/p>

 

4) 

  

 

  

 

 

将细胞悬液放置于

2

?/p>

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?/p>

70%

乙醇中,混匀,保存于

4℃,至少

30

?

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4℃条件下可保?/p>

2~3

周?/p>

 

注意?/p>

 

²

 

  

 

  

 

根据实验的要求,固定剂也可选用

1

?/p>

3%

多聚甲醛?/p>

 

²

 

  

 

  

 

将乙醇作为固定剂时,乙醇应预冷至

0

?℃;

 

²

 

  

 

  

 

细胞在固定时,固定剂应缓慢滴入细胞悬液中,使固定剂的浓度缓慢增加?

并不断震摇,以免细胞成团(特别是用乙醇固定时)?/p>

 

²

 

  

 

  

 300g

离心

5

分钟,去上清,再重悬?/p>

400μl PBS

中;

 

²

 

  

 

  

 

显微镜下观察,若有明显的黏附,须再用筛网过滤?/p>

 

²

 

  

 

  

 

加入

PI

(含

Rnase

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30

分钟?/p>

 

²

 

  

 

  

 

上机检测?/p>

 

2

、新鲜组织的

DNA

含量的测?/p>

 

1) 

  

 

  

 

 

?/p>

200mg

湿重组织用机械法制成单细胞悬液;

 

2) 

  

 

  

 

 

500g

离心

5

分钟?/p>

 

3) 

  

 

  

 

 

弃上清,重悬?/p>

10ml

染色

-

去污剂中?/p>

 

4) 

  

 

  

 

 

再过滤,?/p>

200

目的筛网?/p>

70~80μm

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5) 

  

 

  

 

 

上机检测?/p>

 

3

、石蜡包埋组织切片的

DNA

含量的测?/p>

 

1) 

  

 

  

 

 

从石蜡包埋切取切?/p>

50 μm

厚,

2~3

片,制成单细胞悬液;

 

2) 

  

 

  

 

 

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PBS

缓冲液洗涤,

500g

离心

5

分钟,弃上清?/p>

 

3) 

  

 

  

 

 

加入

PI

?/p>

1ml

室温避光

30

分钟?/p>

 

4) 

  

 

  

 

 

调整细胞浓度?/p>

1×106/ml?/p>

 

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