精品文档,放心下载,放心阅读
流式细胞仪常用的几种检测方法(转载?/p>
一、测定用乙醇固定?/p>
DNA
的含?/p>
1
、培养细胞的
DNA
含量的测?/p>
精品文档,超值下?/p>
制备单细胞悬液于
200μl
?/p>
PBS
缓冲液中?/p>
加入
2ml
预冷?/p>
70%
乙醇?℃保存;
?/p>
:
细胞固定的一般步?/p>
1)
取单细胞悬液
1
?×106
个细胞于
PBS
?/p>
PH=7.2
)缓冲液中;
2)
300g
离心
5
分钟,弃上清,反复两次;
3)
重悬细胞?/p>
0.5ml PBS
缓冲液中?/p>
4)
将细胞悬液放置于
2
?/p>
3ml
?/p>
70%
乙醇中,混匀,保存于
4℃,至少
30
?
钟。在
4℃条件下可保?/p>
2~3
周?/p>
注意?/p>
²
根据实验的要求,固定剂也可选用
1
?/p>
3%
多聚甲醛?/p>
²
将乙醇作为固定剂时,乙醇应预冷至
0
?℃;
²
细胞在固定时,固定剂应缓慢滴入细胞悬液中,使固定剂的浓度缓慢增加?
并不断震摇,以免细胞成团(特别是用乙醇固定时)?/p>
²
300g
离心
5
分钟,去上清,再重悬?/p>
400μl PBS
中;
²
显微镜下观察,若有明显的黏附,须再用筛网过滤?/p>
²
加入
PI
(含
Rnase
),避光孵育
30
分钟?/p>
²
上机检测?/p>
2
、新鲜组织的
DNA
含量的测?/p>
1)
?/p>
200mg
湿重组织用机械法制成单细胞悬液;
2)
500g
离心
5
分钟?/p>
3)
弃上清,重悬?/p>
10ml
染色
-
去污剂中?/p>
4)
再过滤,?/p>
200
目的筛网?/p>
70~80μm
的筛网过滤;
5)
上机检测?/p>
3
、石蜡包埋组织切片的
DNA
含量的测?/p>
1)
从石蜡包埋切取切?/p>
50 μm
厚,
2~3
片,制成单细胞悬液;
2)
?/p>
PBS
缓冲液洗涤,
500g
离心
5
分钟,弃上清?/p>
3)
加入
PI
?/p>
1ml
室温避光
30
分钟?/p>
4)
调整细胞浓度?/p>
1×106/ml?/p>
5)
上机检测?/p>