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1 

试剂的作

?/p>

 

氯仿

的作用?

 

 

氯仿:克服酚的缺点;加速有机相与液相分层?/p>

 

最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。(酚易溶于氯仿中)

 

 

用酚

-

氯仿抽提细胞基因?/p>

 

DNA 

时,通常要在?/p>

-

氯仿中加少许异戊?/p>

?/p>

为什么?

 

 

异戊?/p>

:减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力

?/p>

 

?/p>

而减少气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层?/p>

 

DNA 

的水相?/p>

 

?/p>

间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定?/p>

 

 

用乙醇沉淀

 

DNA

 

时,为什么加入单价的

阳离?/p>

?/p>

 

 

用乙醇沉淀

 

DNA

 

时,通常要在溶液中加入单价的阳离子,?/p>

 

NaCl

 

?/p>

 

NaAc

?/p>

Na+

中和

 

DNA 

分子上的负电荷,减少

 

DNA 

分子之间的同性电荷相斥力?/p>

 

而易于聚集沉淀?/p>

 

2 DNA 

提取分为三个基本步骤

 

每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不?/p>

?/p>

 

有区别?/p>

 

.

细胞的破?/p>

 

细菌有坚硬的细胞壁,首先要破碎经胞。方法有三种

;

①机械方法:超声波处?/p>

 

法、研磨法、匀浆法

;

②化学试剂法:用

 

SDS 

处理细胞

;

③酶解法:加入溶菌酶?/p>

 

蜗牛酶,都可使细胞壁破碎?/p>

 

利用研磨或者超声破碎细胞,并通过加入去污剂以除掉膜脂?/p>

 

加入蛋白酶,醋酸盐沉淀,或者酚

/

?/p>

?/p>

抽提,以除掉细胞?/p>

?/p>

蛋白,如?/p>

 

DNA

 

结合的组蛋白?/p>

 

?/p>

 

DNA 

在冷乙醇或异丙醇中沉淀,因?/p>

 

DNA 

在醇中不可溶?/p>

 

黏在一起,这一步也能除掉盐分?/p>

 

?/p>

?/p>

,目前也有利用吸附过柱的方法提取

 

DNA 

的商业化试剂盒?/p>

 

 

DNA 

提取的几种方?/p>

 

(1).

浓盐?/p>

 

A.

 

利用

 

RNA 

?/p>

 

DNA 

在电解溶液中溶解度不

?/p>

,将二者分离,常用

?/p>

方法是用

 

1M 

氯纳抽提

,

得到?/p>

 

DNA 

粘液与含有少量蛋白质

 

氯仿一起摇?/p>

,

使乳?/p>

,

再离?/p>

 

除去

蛋白?/p>

,

?/p>

?/p>

蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,?/p>

 

DNA 

位于上层水相?/p>

,

?/p>

 

2 

?/p>

体积

 

95%

乙醇

可将

 

DNA 

钠盐沉淀出来

.

 

B.

 

也可?/p>

 

0.15 MNaCL 

液反复洗涤细胞破碎液除去

 

RNA,

?/p>

?/p>

 

1MNaCL

 

提取脱氧

 

核糖蛋白

,

再按

?/p>

?/p>

---

异醇法除去蛋?/p>

.

 

两种方法比较

,

?/p>

种方法使核酸降解可能少一?/p>

.

 

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试剂的作

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氯仿

的作用?

 

 

氯仿:克服酚的缺点;加速有机相与液相分层?/p>

 

最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。(酚易溶于氯仿中)

 

 

用酚

-

氯仿抽提细胞基因?/p>

 

DNA 

时,通常要在?/p>

-

氯仿中加少许异戊?/p>

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为什么?

 

 

异戊?/p>

:减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力

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?/p>

而减少气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层?/p>

 

DNA 

的水相?/p>

 

?/p>

间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定?/p>

 

 

用乙醇沉淀

 

DNA

 

时,为什么加入单价的

阳离?/p>

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用乙醇沉淀

 

DNA

 

时,通常要在溶液中加入单价的阳离子,?/p>

 

NaCl

 

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NaAc

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Na+

中和

 

DNA 

分子上的负电荷,减少

 

DNA 

分子之间的同性电荷相斥力?/p>

 

而易于聚集沉淀?/p>

 

2 DNA 

提取分为三个基本步骤

 

每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不?/p>

?/p>

 

有区别?/p>

 

.

细胞的破?/p>

 

细菌有坚硬的细胞壁,首先要破碎经胞。方法有三种

;

①机械方法:超声波处?/p>

 

法、研磨法、匀浆法

;

②化学试剂法:用

 

SDS 

处理细胞

;

③酶解法:加入溶菌酶?/p>

 

蜗牛酶,都可使细胞壁破碎?/p>

 

利用研磨或者超声破碎细胞,并通过加入去污剂以除掉膜脂?/p>

 

加入蛋白酶,醋酸盐沉淀,或者酚

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抽提,以除掉细胞?/p>

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蛋白,如?/p>

 

DNA

 

结合的组蛋白?/p>

 

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DNA 

在冷乙醇或异丙醇中沉淀,因?/p>

 

DNA 

在醇中不可溶?/p>

 

黏在一起,这一步也能除掉盐分?/p>

 

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?/p>

,目前也有利用吸附过柱的方法提取

 

DNA 

的商业化试剂盒?/p>

 

 

DNA 

提取的几种方?/p>

 

(1).

浓盐?/p>

 

A.

 

利用

 

RNA 

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DNA 

在电解溶液中溶解度不

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,将二者分离,常用

?/p>

方法是用

 

1M 

氯纳抽提

,

得到?/p>

 

DNA 

粘液与含有少量蛋白质

 

氯仿一起摇?/p>

,

使乳?/p>

,

再离?/p>

 

除去

蛋白?/p>

,

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蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,?/p>

 

DNA 

位于上层水相?/p>

,

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2 

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体积

 

95%

乙醇

可将

 

DNA 

钠盐沉淀出来

.

 

B.

 

也可?/p>

 

0.15 MNaCL 

液反复洗涤细胞破碎液除去

 

RNA,

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1MNaCL

 

提取脱氧

 

核糖蛋白

,

再按

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两种方法比较

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种方法使核酸降解可能少一?/p>

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试剂的作

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氯仿

的作用?

 

 

氯仿:克服酚的缺点;加速有机相与液相分层?/p>

 

最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。(酚易溶于氯仿中)

 

 

用酚

-

氯仿抽提细胞基因?/p>

 

DNA 

时,通常要在?/p>

-

氯仿中加少许异戊?/p>

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为什么?

 

 

异戊?/p>

:减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力

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而减少气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层?/p>

 

DNA 

的水相?/p>

 

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间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定?/p>

 

 

用乙醇沉淀

 

DNA

 

时,为什么加入单价的

阳离?/p>

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用乙醇沉淀

 

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时,通常要在溶液中加入单价的阳离子,?/p>

 

NaCl

 

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Na+

中和

 

DNA 

分子上的负电荷,减少

 

DNA 

分子之间的同性电荷相斥力?/p>

 

而易于聚集沉淀?/p>

 

2 DNA 

提取分为三个基本步骤

 

每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不?/p>

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有区别?/p>

 

.

细胞的破?/p>

 

细菌有坚硬的细胞壁,首先要破碎经胞。方法有三种

;

①机械方法:超声波处?/p>

 

法、研磨法、匀浆法

;

②化学试剂法:用

 

SDS 

处理细胞

;

③酶解法:加入溶菌酶?/p>

 

蜗牛酶,都可使细胞壁破碎?/p>

 

利用研磨或者超声破碎细胞,并通过加入去污剂以除掉膜脂?/p>

 

加入蛋白酶,醋酸盐沉淀,或者酚

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抽提,以除掉细胞?/p>

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结合的组蛋白?/p>

 

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在醇中不可溶?/p>

 

黏在一起,这一步也能除掉盐分?/p>

 

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,目前也有利用吸附过柱的方法提取

 

DNA 

的商业化试剂盒?/p>

 

 

DNA 

提取的几种方?/p>

 

(1).

浓盐?/p>

 

A.

 

利用

 

RNA 

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DNA 

在电解溶液中溶解度不

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,将二者分离,常用

?/p>

方法是用

 

1M 

氯纳抽提

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得到?/p>

 

DNA 

粘液与含有少量蛋白质

 

氯仿一起摇?/p>

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除去

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蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,?/p>

 

DNA 

位于上层水相?/p>

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2 

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体积

 

95%

乙醇

可将

 

DNA 

钠盐沉淀出来

.

 

B.

 

也可?/p>

 

0.15 MNaCL 

液反复洗涤细胞破碎液除去

 

RNA,

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1MNaCL

 

提取脱氧

 

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再按

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两种方法比较

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DNA提取方法和试剂作用详?- 百度文库
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试剂的作

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氯仿

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氯仿:克服酚的缺点;加速有机相与液相分层?/p>

 

最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。(酚易溶于氯仿中)

 

 

用酚

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氯仿抽提细胞基因?/p>

 

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时,通常要在?/p>

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为什么?

 

 

异戊?/p>

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时,通常要在溶液中加入单价的阳离子,?/p>

 

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中和

 

DNA 

分子上的负电荷,减少

 

DNA 

分子之间的同性电荷相斥力?/p>

 

而易于聚集沉淀?/p>

 

2 DNA 

提取分为三个基本步骤

 

每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不?/p>

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有区别?/p>

 

.

细胞的破?/p>

 

细菌有坚硬的细胞壁,首先要破碎经胞。方法有三种

;

①机械方法:超声波处?/p>

 

法、研磨法、匀浆法

;

②化学试剂法:用

 

SDS 

处理细胞

;

③酶解法:加入溶菌酶?/p>

 

蜗牛酶,都可使细胞壁破碎?/p>

 

利用研磨或者超声破碎细胞,并通过加入去污剂以除掉膜脂?/p>

 

加入蛋白酶,醋酸盐沉淀,或者酚

/

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抽提,以除掉细胞?/p>

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蛋白,如?/p>

 

DNA

 

结合的组蛋白?/p>

 

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在冷乙醇或异丙醇中沉淀,因?/p>

 

DNA 

在醇中不可溶?/p>

 

黏在一起,这一步也能除掉盐分?/p>

 

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,目前也有利用吸附过柱的方法提取

 

DNA 

的商业化试剂盒?/p>

 

 

DNA 

提取的几种方?/p>

 

(1).

浓盐?/p>

 

A.

 

利用

 

RNA 

?/p>

 

DNA 

在电解溶液中溶解度不

?/p>

,将二者分离,常用

?/p>

方法是用

 

1M 

氯纳抽提

,

得到?/p>

 

DNA 

粘液与含有少量蛋白质

 

氯仿一起摇?/p>

,

使乳?/p>

,

再离?/p>

 

除去

蛋白?/p>

,

?/p>

?/p>

蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,?/p>

 

DNA 

位于上层水相?/p>

,

?/p>

 

2 

?/p>

体积

 

95%

乙醇

可将

 

DNA 

钠盐沉淀出来

.

 

B.

 

也可?/p>

 

0.15 MNaCL 

液反复洗涤细胞破碎液除去

 

RNA,

?/p>

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1MNaCL

 

提取脱氧

 

核糖蛋白

,

再按

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两种方法比较

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