细胞免疫组化染色步骤
1
?/p>
细胞爬片?/p>
取出后,
PBS
洗三遍,
每次
3
分钟?/p>
4
℃冷丙酮固定
10
分钟?/p>
(或?/p>
4
%
多聚甲醛固定
30
分钟?/p>
,干?/p>
30
分钟?/p>
2.
?/p>
PBS
洗三次,每次
5
分钟,加
3%
过氧化氢
30
μl
,室温孵?/p>
10
分钟?/p>
(以消除内源性过氧化物酶的活性)蒸馏水冲洗,
PBS
洗三次,每次
5
分钟?/p>
3
.加
1%
?/p>
Triton X-100
30
μl
,室温孵?/p>
10
分钟,增加细胞膜的通透性?/p>
蒸馏水冲洗,
PBS
洗三次,每次
5
分钟?/p>
4
?/p>
滴加正常山羊血?/p>
30
μl
?/p>
封闭非特异性结合位点,
以消除非特异性染色,
室温孵育
30
分钟,倾去勿洗?/p>
5
.滴加适当稀释度的一抗,空白对照组以
PBS
代替一抗,
4
℃湿盒孵育过
夜?/p>
PBS
洗三次,每次
5
分钟?/p>
6
.滴加生物素标记的二抗工作液
30
μl
,室温孵?/p>
30
分钟?/p>
PBS
洗三次,
每次
5
分钟?/p>
7
.滴加辣根酶标记链酶卵白?/p>
30
μl
,室温孵?/p>
30
分钟?/p>
PBS
洗三次,?/p>
?/p>
5
分钟?/p>
8
.滴?/p>
DAB
显色?/p>
30
μl
,显微镜下观察显色,自来水冲洗?/p>
9.
将处理好的玻片细胞核衬染:浸入苏木精染液染色
2min
,自来水洗,?/p>
速过盐酸酒精溶液,自来水洗,过氨水溶液,自来水洗?/p>
10.
梯度酒精脱水,过
70%
酒精
1
次,
95%
酒精
2
次,无水乙醇
3
次,每次
1min
11.
二甲苯透明,过二甲苯溶?/p>
3
次,每次?/p>
min
?/p>
12.
中性树胶封片将有细胞的一面向下,用中性树脂封片?/p>
稀盐酸酒精溶液:用
75%
酒精配制
1%
盐酸?/p>
淡氨水溶液:?/p>
400ml
自来水中?/p>
2
滴浓氨水
(
使细胞核蓝化
)
另外?/p>
需
1%TritonX-100
增加细胞膜通透性?/p>
苏木素复染时间和盐酸酒精脱色时间需自己?/p>
索,我是?/p>
5-6
秒脱?/p>
1-2
秒?/p>
盐酸酒精还可?/p>
70%
乙醇配制
1%
盐酸?/p>
我没用淡氨水
溶液。若为悬浮细胞则需涂片?/p>
20
µ
l
即可?/p>