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产淀粉酶芽孢杆菌的分离与初步鉴定

 

吴月?/p>

 

 

摘要

?/p>

从土壤中分离得到一株产淀粉酶的芽孢杆?/p>

X-1

?/p>

对其进行形态学鉴定和生理生化特性分析,

包括?/p>

落形态、菌体形态、糖利用情况、生?/p>

pH

范围、耐盐范围、明胶液化和酪素的水解等,初步鉴定为芽孢?/p>

菌属枯草芽孢杆菌?/p>

Bacillus subtilis

)或地衣芽孢杆菌?/p>

Bacillus lentus

?/p>

?/p>

 

关键?/p>

?/p>

产淀粉酶;芽孢杆菌;分离;初步鉴?/p>

 

 

淀粉酶

(Amylase)

是指能分解淀粉糖苷键的一

类酶,主要包?/p>

α

-

淀粉酶?/p>

β

-

淀粉酶、糖化酶和异

淀粉酶等,在生物体的糖类代谢中起重要的作用?/p>

其中

α

-

淀粉酶

?/p>

1,4-

α

-D-glucan glucanohydrolase

?/p>

?/p>

水解淀粉大分子?/p>

α

-1,4-

糖苷键,

生成糊精?/p>

麦芽?/p>

糖?/p>

麦芽糖?/p>

葡萄糖等水解产物

[1]

?/p>

α

-

淀粉酶在植物?/p>

动物和微生物中都广泛存在,常见的产淀粉酶微生

物有芽孢杆菌、放线菌、黑曲霉、米曲霉、红曲霉

和根霉等

[2-7]

?/p>

 

芽孢杆菌?/p>

(

Bacillus

)

是一类能产生芽孢的革

兰氏阳性细菌,具有较强的抵抗不良环境的能力?/p>

如耐酸碱、耐高温的能力较强。芽孢杆菌中较多?/p>

种具有高淀粉酶、蛋白酶活性,近年来被广泛地用

于动物饲料业,特别是作为水产饲料的添加剂。例

如在银鲫饲料中添加了

0.1%

的芽孢杆菌后?/p>

银鲫?/p>

道和肝胰脏的淀粉酶活性提高了

3.7%

?/p>

129.5%

[8]

?/p>

能够有效帮助动物对饲料的消化吸收,同时作为一

种良好的免疫激活剂,能增强动物的免疫力和抗?/p>

?/p>

[9]

。此外,利用芽孢杆菌产生

α

-

淀粉酶,在食品

生产中也有广泛应用?/p>

 

笔者从土壤中分离得到产淀粉酶的芽孢杆菌,

进行种属的初步鉴定,以期为芽孢杆菌在动物饲料

业和食品生产中的发开应用提供理论依据?/p>

 

1 

材料与方?/p>

 

1.1 

材料

 

土壤材料采集于浙江师范大学取杏园食堂草坪土壤

表层

5~10

厘米下的肥土?/p>

 

1.2 

培养?/p>

 

淀粉培养基:可溶性淀?/p>

1%

、蛋白胨

l%

、葡

萄糖

0.5%

?/p>

Nacl 0.5%

?/p>

牛肉?/p>

0.5%

?/p>

琼脂?/p>

0.8%

?/p>

生理生化鉴定培养基见文献

[10]

?/p>

 

1.3 

方法

 

1.3.1 

样品的采?/p>

收集校园食堂草坪处的土壤

1

?/p>

作为试验样品?/p>

 

1.3.2 

产淀粉酶芽孢杆菌的分?/p>

?/p>

1 g

土壤样品加入

10 mL

无菌水混合,

 

80

℃水浴加?/p>

10 min

?/p>

取上?/p>

?/p>

1 mL

进行梯度稀释,

得到一系列不同浓度的稀?/p>

菌液。涂布于淀粉培养基上,

37

℃培?/p>

24 h

后挑?/p>

不同形态的单菌落转接至新淀粉培养基?/p>

37

℃培?/p>

48

h。用卢戈氏碘液进行染色,菌落周围有透明?/p>

的表明有淀粉酶产生。测量透明圈直?/p>

T

和菌落直

?/p>

C

?/p>

T/C

越大表明淀粉酶活性越?/p>

[11]

,选出淀?/p>

酶活性较高的菌种,在另一不加碘液的培养基选择

该菌种接种至试管斜面,于4℃保藏?/p>

 

1.3.3

形态学鉴定

活化后的菌株用接种针点接于淀?/p>

培养基上?/p>

37

℃培?/p>

24 h

后观察菌落形态。同时进

行革兰氏染色、鞭毛染色,在光学显微镜下观察菌

体形态。革兰氏染色、鞭毛染色方法参照文?/p>

[10]

?/p>

 

1.3.4 

生理生化鉴定

包括菌株的乳糖发酵?/p>

pH

范围?/p>

耐盐试验、厌氧试验、明胶液化、柠檬酸盐利用?/p>

酪素水解、吲哚反应?/p>

V-P

试验、甲基红试验,方

法参照文?/p>

[10]

?/p>

 

2 

结果与分?/p>

 

2.1

产淀粉酶芽孢杆菌的分?/p>

 

在土壤样品中初步筛选得?/p>

3

株有产生淀粉酶

能力的菌株,

其中

X-1

的淀粉酶活性较高,

平均

T/C

值达?/p>

3.32

,选取该菌株进行菌种鉴定?/p>

 

 

?/p>

1

产淀粉酶初选结?/p>

?/p>

2

 X-1

革兰氏染色结?/p>

 

2.2 

形态学鉴定

 

2.2.1 

菌落形?/p>

 

 

X-1

菌株的菌落形态如?/p>

1

所示,

菌落扁平,圆形或近圆形,边缘不整齐,乳白色,

X-3 

X-1 

X-2 

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产淀粉酶芽孢杆菌的分离与初步鉴定

 

吴月?/p>

 

 

摘要

?/p>

从土壤中分离得到一株产淀粉酶的芽孢杆?/p>

X-1

?/p>

对其进行形态学鉴定和生理生化特性分析,

包括?/p>

落形态、菌体形态、糖利用情况、生?/p>

pH

范围、耐盐范围、明胶液化和酪素的水解等,初步鉴定为芽孢?/p>

菌属枯草芽孢杆菌?/p>

Bacillus subtilis

)或地衣芽孢杆菌?/p>

Bacillus lentus

?/p>

?/p>

 

关键?/p>

?/p>

产淀粉酶;芽孢杆菌;分离;初步鉴?/p>

 

 

淀粉酶

(Amylase)

是指能分解淀粉糖苷键的一

类酶,主要包?/p>

α

-

淀粉酶?/p>

β

-

淀粉酶、糖化酶和异

淀粉酶等,在生物体的糖类代谢中起重要的作用?/p>

其中

α

-

淀粉酶

?/p>

1,4-

α

-D-glucan glucanohydrolase

?/p>

?/p>

水解淀粉大分子?/p>

α

-1,4-

糖苷键,

生成糊精?/p>

麦芽?/p>

糖?/p>

麦芽糖?/p>

葡萄糖等水解产物

[1]

?/p>

α

-

淀粉酶在植物?/p>

动物和微生物中都广泛存在,常见的产淀粉酶微生

物有芽孢杆菌、放线菌、黑曲霉、米曲霉、红曲霉

和根霉等

[2-7]

?/p>

 

芽孢杆菌?/p>

(

Bacillus

)

是一类能产生芽孢的革

兰氏阳性细菌,具有较强的抵抗不良环境的能力?/p>

如耐酸碱、耐高温的能力较强。芽孢杆菌中较多?/p>

种具有高淀粉酶、蛋白酶活性,近年来被广泛地用

于动物饲料业,特别是作为水产饲料的添加剂。例

如在银鲫饲料中添加了

0.1%

的芽孢杆菌后?/p>

银鲫?/p>

道和肝胰脏的淀粉酶活性提高了

3.7%

?/p>

129.5%

[8]

?/p>

能够有效帮助动物对饲料的消化吸收,同时作为一

种良好的免疫激活剂,能增强动物的免疫力和抗?/p>

?/p>

[9]

。此外,利用芽孢杆菌产生

α

-

淀粉酶,在食品

生产中也有广泛应用?/p>

 

笔者从土壤中分离得到产淀粉酶的芽孢杆菌,

进行种属的初步鉴定,以期为芽孢杆菌在动物饲料

业和食品生产中的发开应用提供理论依据?/p>

 

1 

材料与方?/p>

 

1.1 

材料

 

土壤材料采集于浙江师范大学取杏园食堂草坪土壤

表层

5~10

厘米下的肥土?/p>

 

1.2 

培养?/p>

 

淀粉培养基:可溶性淀?/p>

1%

、蛋白胨

l%

、葡

萄糖

0.5%

?/p>

Nacl 0.5%

?/p>

牛肉?/p>

0.5%

?/p>

琼脂?/p>

0.8%

?/p>

生理生化鉴定培养基见文献

[10]

?/p>

 

1.3 

方法

 

1.3.1 

样品的采?/p>

收集校园食堂草坪处的土壤

1

?/p>

作为试验样品?/p>

 

1.3.2 

产淀粉酶芽孢杆菌的分?/p>

?/p>

1 g

土壤样品加入

10 mL

无菌水混合,

 

80

℃水浴加?/p>

10 min

?/p>

取上?/p>

?/p>

1 mL

进行梯度稀释,

得到一系列不同浓度的稀?/p>

菌液。涂布于淀粉培养基上,

37

℃培?/p>

24 h

后挑?/p>

不同形态的单菌落转接至新淀粉培养基?/p>

37

℃培?/p>

48

h。用卢戈氏碘液进行染色,菌落周围有透明?/p>

的表明有淀粉酶产生。测量透明圈直?/p>

T

和菌落直

?/p>

C

?/p>

T/C

越大表明淀粉酶活性越?/p>

[11]

,选出淀?/p>

酶活性较高的菌种,在另一不加碘液的培养基选择

该菌种接种至试管斜面,于4℃保藏?/p>

 

1.3.3

形态学鉴定

活化后的菌株用接种针点接于淀?/p>

培养基上?/p>

37

℃培?/p>

24 h

后观察菌落形态。同时进

行革兰氏染色、鞭毛染色,在光学显微镜下观察菌

体形态。革兰氏染色、鞭毛染色方法参照文?/p>

[10]

?/p>

 

1.3.4 

生理生化鉴定

包括菌株的乳糖发酵?/p>

pH

范围?/p>

耐盐试验、厌氧试验、明胶液化、柠檬酸盐利用?/p>

酪素水解、吲哚反应?/p>

V-P

试验、甲基红试验,方

法参照文?/p>

[10]

?/p>

 

2 

结果与分?/p>

 

2.1

产淀粉酶芽孢杆菌的分?/p>

 

在土壤样品中初步筛选得?/p>

3

株有产生淀粉酶

能力的菌株,

其中

X-1

的淀粉酶活性较高,

平均

T/C

值达?/p>

3.32

,选取该菌株进行菌种鉴定?/p>

 

 

?/p>

1

产淀粉酶初选结?/p>

?/p>

2

 X-1

革兰氏染色结?/p>

 

2.2 

形态学鉴定

 

2.2.1 

菌落形?/p>

 

 

X-1

菌株的菌落形态如?/p>

1

所示,

菌落扁平,圆形或近圆形,边缘不整齐,乳白色,

X-3 

X-1 

X-2 

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产淀粉酶芽孢杆菌的分离与初步鉴定

 

吴月?/p>

 

 

摘要

?/p>

从土壤中分离得到一株产淀粉酶的芽孢杆?/p>

X-1

?/p>

对其进行形态学鉴定和生理生化特性分析,

包括?/p>

落形态、菌体形态、糖利用情况、生?/p>

pH

范围、耐盐范围、明胶液化和酪素的水解等,初步鉴定为芽孢?/p>

菌属枯草芽孢杆菌?/p>

Bacillus subtilis

)或地衣芽孢杆菌?/p>

Bacillus lentus

?/p>

?/p>

 

关键?/p>

?/p>

产淀粉酶;芽孢杆菌;分离;初步鉴?/p>

 

 

淀粉酶

(Amylase)

是指能分解淀粉糖苷键的一

类酶,主要包?/p>

α

-

淀粉酶?/p>

β

-

淀粉酶、糖化酶和异

淀粉酶等,在生物体的糖类代谢中起重要的作用?/p>

其中

α

-

淀粉酶

?/p>

1,4-

α

-D-glucan glucanohydrolase

?/p>

?/p>

水解淀粉大分子?/p>

α

-1,4-

糖苷键,

生成糊精?/p>

麦芽?/p>

糖?/p>

麦芽糖?/p>

葡萄糖等水解产物

[1]

?/p>

α

-

淀粉酶在植物?/p>

动物和微生物中都广泛存在,常见的产淀粉酶微生

物有芽孢杆菌、放线菌、黑曲霉、米曲霉、红曲霉

和根霉等

[2-7]

?/p>

 

芽孢杆菌?/p>

(

Bacillus

)

是一类能产生芽孢的革

兰氏阳性细菌,具有较强的抵抗不良环境的能力?/p>

如耐酸碱、耐高温的能力较强。芽孢杆菌中较多?/p>

种具有高淀粉酶、蛋白酶活性,近年来被广泛地用

于动物饲料业,特别是作为水产饲料的添加剂。例

如在银鲫饲料中添加了

0.1%

的芽孢杆菌后?/p>

银鲫?/p>

道和肝胰脏的淀粉酶活性提高了

3.7%

?/p>

129.5%

[8]

?/p>

能够有效帮助动物对饲料的消化吸收,同时作为一

种良好的免疫激活剂,能增强动物的免疫力和抗?/p>

?/p>

[9]

。此外,利用芽孢杆菌产生

α

-

淀粉酶,在食品

生产中也有广泛应用?/p>

 

笔者从土壤中分离得到产淀粉酶的芽孢杆菌,

进行种属的初步鉴定,以期为芽孢杆菌在动物饲料

业和食品生产中的发开应用提供理论依据?/p>

 

1 

材料与方?/p>

 

1.1 

材料

 

土壤材料采集于浙江师范大学取杏园食堂草坪土壤

表层

5~10

厘米下的肥土?/p>

 

1.2 

培养?/p>

 

淀粉培养基:可溶性淀?/p>

1%

、蛋白胨

l%

、葡

萄糖

0.5%

?/p>

Nacl 0.5%

?/p>

牛肉?/p>

0.5%

?/p>

琼脂?/p>

0.8%

?/p>

生理生化鉴定培养基见文献

[10]

?/p>

 

1.3 

方法

 

1.3.1 

样品的采?/p>

收集校园食堂草坪处的土壤

1

?/p>

作为试验样品?/p>

 

1.3.2 

产淀粉酶芽孢杆菌的分?/p>

?/p>

1 g

土壤样品加入

10 mL

无菌水混合,

 

80

℃水浴加?/p>

10 min

?/p>

取上?/p>

?/p>

1 mL

进行梯度稀释,

得到一系列不同浓度的稀?/p>

菌液。涂布于淀粉培养基上,

37

℃培?/p>

24 h

后挑?/p>

不同形态的单菌落转接至新淀粉培养基?/p>

37

℃培?/p>

48

h。用卢戈氏碘液进行染色,菌落周围有透明?/p>

的表明有淀粉酶产生。测量透明圈直?/p>

T

和菌落直

?/p>

C

?/p>

T/C

越大表明淀粉酶活性越?/p>

[11]

,选出淀?/p>

酶活性较高的菌种,在另一不加碘液的培养基选择

该菌种接种至试管斜面,于4℃保藏?/p>

 

1.3.3

形态学鉴定

活化后的菌株用接种针点接于淀?/p>

培养基上?/p>

37

℃培?/p>

24 h

后观察菌落形态。同时进

行革兰氏染色、鞭毛染色,在光学显微镜下观察菌

体形态。革兰氏染色、鞭毛染色方法参照文?/p>

[10]

?/p>

 

1.3.4 

生理生化鉴定

包括菌株的乳糖发酵?/p>

pH

范围?/p>

耐盐试验、厌氧试验、明胶液化、柠檬酸盐利用?/p>

酪素水解、吲哚反应?/p>

V-P

试验、甲基红试验,方

法参照文?/p>

[10]

?/p>

 

2 

结果与分?/p>

 

2.1

产淀粉酶芽孢杆菌的分?/p>

 

在土壤样品中初步筛选得?/p>

3

株有产生淀粉酶

能力的菌株,

其中

X-1

的淀粉酶活性较高,

平均

T/C

值达?/p>

3.32

,选取该菌株进行菌种鉴定?/p>

 

 

?/p>

1

产淀粉酶初选结?/p>

?/p>

2

 X-1

革兰氏染色结?/p>

 

2.2 

形态学鉴定

 

2.2.1 

菌落形?/p>

 

 

X-1

菌株的菌落形态如?/p>

1

所示,

菌落扁平,圆形或近圆形,边缘不整齐,乳白色,

X-3 

X-1 

X-2 

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浙江师范大学微生物实验报?产淀粉酶芽孢杆菌的分离与初步鉴定 - 百度文库
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产淀粉酶芽孢杆菌的分离与初步鉴定

 

吴月?/p>

 

 

摘要

?/p>

从土壤中分离得到一株产淀粉酶的芽孢杆?/p>

X-1

?/p>

对其进行形态学鉴定和生理生化特性分析,

包括?/p>

落形态、菌体形态、糖利用情况、生?/p>

pH

范围、耐盐范围、明胶液化和酪素的水解等,初步鉴定为芽孢?/p>

菌属枯草芽孢杆菌?/p>

Bacillus subtilis

)或地衣芽孢杆菌?/p>

Bacillus lentus

?/p>

?/p>

 

关键?/p>

?/p>

产淀粉酶;芽孢杆菌;分离;初步鉴?/p>

 

 

淀粉酶

(Amylase)

是指能分解淀粉糖苷键的一

类酶,主要包?/p>

α

-

淀粉酶?/p>

β

-

淀粉酶、糖化酶和异

淀粉酶等,在生物体的糖类代谢中起重要的作用?/p>

其中

α

-

淀粉酶

?/p>

1,4-

α

-D-glucan glucanohydrolase

?/p>

?/p>

水解淀粉大分子?/p>

α

-1,4-

糖苷键,

生成糊精?/p>

麦芽?/p>

糖?/p>

麦芽糖?/p>

葡萄糖等水解产物

[1]

?/p>

α

-

淀粉酶在植物?/p>

动物和微生物中都广泛存在,常见的产淀粉酶微生

物有芽孢杆菌、放线菌、黑曲霉、米曲霉、红曲霉

和根霉等

[2-7]

?/p>

 

芽孢杆菌?/p>

(

Bacillus

)

是一类能产生芽孢的革

兰氏阳性细菌,具有较强的抵抗不良环境的能力?/p>

如耐酸碱、耐高温的能力较强。芽孢杆菌中较多?/p>

种具有高淀粉酶、蛋白酶活性,近年来被广泛地用

于动物饲料业,特别是作为水产饲料的添加剂。例

如在银鲫饲料中添加了

0.1%

的芽孢杆菌后?/p>

银鲫?/p>

道和肝胰脏的淀粉酶活性提高了

3.7%

?/p>

129.5%

[8]

?/p>

能够有效帮助动物对饲料的消化吸收,同时作为一

种良好的免疫激活剂,能增强动物的免疫力和抗?/p>

?/p>

[9]

。此外,利用芽孢杆菌产生

α

-

淀粉酶,在食品

生产中也有广泛应用?/p>

 

笔者从土壤中分离得到产淀粉酶的芽孢杆菌,

进行种属的初步鉴定,以期为芽孢杆菌在动物饲料

业和食品生产中的发开应用提供理论依据?/p>

 

1 

材料与方?/p>

 

1.1 

材料

 

土壤材料采集于浙江师范大学取杏园食堂草坪土壤

表层

5~10

厘米下的肥土?/p>

 

1.2 

培养?/p>

 

淀粉培养基:可溶性淀?/p>

1%

、蛋白胨

l%

、葡

萄糖

0.5%

?/p>

Nacl 0.5%

?/p>

牛肉?/p>

0.5%

?/p>

琼脂?/p>

0.8%

?/p>

生理生化鉴定培养基见文献

[10]

?/p>

 

1.3 

方法

 

1.3.1 

样品的采?/p>

收集校园食堂草坪处的土壤

1

?/p>

作为试验样品?/p>

 

1.3.2 

产淀粉酶芽孢杆菌的分?/p>

?/p>

1 g

土壤样品加入

10 mL

无菌水混合,

 

80

℃水浴加?/p>

10 min

?/p>

取上?/p>

?/p>

1 mL

进行梯度稀释,

得到一系列不同浓度的稀?/p>

菌液。涂布于淀粉培养基上,

37

℃培?/p>

24 h

后挑?/p>

不同形态的单菌落转接至新淀粉培养基?/p>

37

℃培?/p>

48

h。用卢戈氏碘液进行染色,菌落周围有透明?/p>

的表明有淀粉酶产生。测量透明圈直?/p>

T

和菌落直

?/p>

C

?/p>

T/C

越大表明淀粉酶活性越?/p>

[11]

,选出淀?/p>

酶活性较高的菌种,在另一不加碘液的培养基选择

该菌种接种至试管斜面,于4℃保藏?/p>

 

1.3.3

形态学鉴定

活化后的菌株用接种针点接于淀?/p>

培养基上?/p>

37

℃培?/p>

24 h

后观察菌落形态。同时进

行革兰氏染色、鞭毛染色,在光学显微镜下观察菌

体形态。革兰氏染色、鞭毛染色方法参照文?/p>

[10]

?/p>

 

1.3.4 

生理生化鉴定

包括菌株的乳糖发酵?/p>

pH

范围?/p>

耐盐试验、厌氧试验、明胶液化、柠檬酸盐利用?/p>

酪素水解、吲哚反应?/p>

V-P

试验、甲基红试验,方

法参照文?/p>

[10]

?/p>

 

2 

结果与分?/p>

 

2.1

产淀粉酶芽孢杆菌的分?/p>

 

在土壤样品中初步筛选得?/p>

3

株有产生淀粉酶

能力的菌株,

其中

X-1

的淀粉酶活性较高,

平均

T/C

值达?/p>

3.32

,选取该菌株进行菌种鉴定?/p>

 

 

?/p>

1

产淀粉酶初选结?/p>

?/p>

2

 X-1

革兰氏染色结?/p>

 

2.2 

形态学鉴定

 

2.2.1 

菌落形?/p>

 

 

X-1

菌株的菌落形态如?/p>

1

所示,

菌落扁平,圆形或近圆形,边缘不整齐,乳白色,

X-3 

X-1 

X-2 



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