产淀粉酶芽孢杆菌的分离与初步鉴定
吴月?/p>
摘要
?/p>
从土壤中分离得到一株产淀粉酶的芽孢杆?/p>
X-1
?/p>
对其进行形态学鉴定和生理生化特性分析,
包括?/p>
落形态、菌体形态、糖利用情况、生?/p>
pH
范围、耐盐范围、明胶液化和酪素的水解等,初步鉴定为芽孢?/p>
菌属枯草芽孢杆菌?/p>
Bacillus subtilis
)或地衣芽孢杆菌?/p>
Bacillus lentus
?/p>
?/p>
关键?/p>
?/p>
产淀粉酶;芽孢杆菌;分离;初步鉴?/p>
淀粉酶
(Amylase)
是指能分解淀粉糖苷键的一
类酶,主要包?/p>
α
-
淀粉酶?/p>
β
-
淀粉酶、糖化酶和异
淀粉酶等,在生物体的糖类代谢中起重要的作用?/p>
其中
α
-
淀粉酶
?/p>
1,4-
α
-D-glucan glucanohydrolase
?/p>
?/p>
水解淀粉大分子?/p>
α
-1,4-
糖苷键,
生成糊精?/p>
麦芽?/p>
糖?/p>
麦芽糖?/p>
葡萄糖等水解产物
[1]
?/p>
α
-
淀粉酶在植物?/p>
动物和微生物中都广泛存在,常见的产淀粉酶微生
物有芽孢杆菌、放线菌、黑曲霉、米曲霉、红曲霉
和根霉等
[2-7]
?/p>
芽孢杆菌?/p>
(
Bacillus
)
是一类能产生芽孢的革
兰氏阳性细菌,具有较强的抵抗不良环境的能力?/p>
如耐酸碱、耐高温的能力较强。芽孢杆菌中较多?/p>
种具有高淀粉酶、蛋白酶活性,近年来被广泛地用
于动物饲料业,特别是作为水产饲料的添加剂。例
如在银鲫饲料中添加了
0.1%
的芽孢杆菌后?/p>
银鲫?/p>
道和肝胰脏的淀粉酶活性提高了
3.7%
?/p>
129.5%
[8]
?/p>
能够有效帮助动物对饲料的消化吸收,同时作为一
种良好的免疫激活剂,能增强动物的免疫力和抗?/p>
?/p>
[9]
。此外,利用芽孢杆菌产生
α
-
淀粉酶,在食品
生产中也有广泛应用?/p>
笔者从土壤中分离得到产淀粉酶的芽孢杆菌,
进行种属的初步鉴定,以期为芽孢杆菌在动物饲料
业和食品生产中的发开应用提供理论依据?/p>
1
材料与方?/p>
1.1
材料
土壤材料采集于浙江师范大学取杏园食堂草坪土壤
表层
5~10
厘米下的肥土?/p>
1.2
培养?/p>
淀粉培养基:可溶性淀?/p>
1%
、蛋白胨
l%
、葡
萄糖
0.5%
?/p>
Nacl 0.5%
?/p>
牛肉?/p>
0.5%
?/p>
琼脂?/p>
0.8%
?/p>
生理生化鉴定培养基见文献
[10]
?/p>
1.3
方法
1.3.1
样品的采?/p>
收集校园食堂草坪处的土壤
1
?/p>
作为试验样品?/p>
1.3.2
产淀粉酶芽孢杆菌的分?/p>
?/p>
1 g
土壤样品加入
10 mL
无菌水混合,
80
℃水浴加?/p>
10 min
?/p>
取上?/p>
?/p>
1 mL
进行梯度稀释,
得到一系列不同浓度的稀?/p>
菌液。涂布于淀粉培养基上,
37
℃培?/p>
24 h
后挑?/p>
不同形态的单菌落转接至新淀粉培养基?/p>
37
℃培?/p>
48
h。用卢戈氏碘液进行染色,菌落周围有透明?/p>
的表明有淀粉酶产生。测量透明圈直?/p>
T
和菌落直
?/p>
C
?/p>
T/C
越大表明淀粉酶活性越?/p>
[11]
,选出淀?/p>
酶活性较高的菌种,在另一不加碘液的培养基选择
该菌种接种至试管斜面,于4℃保藏?/p>
1.3.3
形态学鉴定
活化后的菌株用接种针点接于淀?/p>
培养基上?/p>
37
℃培?/p>
24 h
后观察菌落形态。同时进
行革兰氏染色、鞭毛染色,在光学显微镜下观察菌
体形态。革兰氏染色、鞭毛染色方法参照文?/p>
[10]
?/p>
1.3.4
生理生化鉴定
包括菌株的乳糖发酵?/p>
pH
范围?/p>
耐盐试验、厌氧试验、明胶液化、柠檬酸盐利用?/p>
酪素水解、吲哚反应?/p>
V-P
试验、甲基红试验,方
法参照文?/p>
[10]
?/p>
2
结果与分?/p>
2.1
产淀粉酶芽孢杆菌的分?/p>
在土壤样品中初步筛选得?/p>
3
株有产生淀粉酶
能力的菌株,
其中
X-1
的淀粉酶活性较高,
平均
T/C
值达?/p>
3.32
,选取该菌株进行菌种鉴定?/p>
?/p>
1
产淀粉酶初选结?/p>
?/p>
2
X-1
革兰氏染色结?/p>
2.2
形态学鉴定
2.2.1
菌落形?/p>
X-1
菌株的菌落形态如?/p>
1
所示,

菌落扁平,圆形或近圆形,边缘不整齐,乳白色,
X-3
X-1
X-2