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M13

噬菌体空斑实?/p>

 

一、实验目的:

1

、了?/p>

M13

噬菌体载体的一般结构、性质及感染特征?/p>

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2

、学习并掌握

M13

噬菌体载体的空斑纯化技术?/p>

 

二、实验原理:一?/p>

M13

噬菌体的病毒颗粒感染一个细菌后形成一个噬菌斑。从感染细菌

释放出来的子代病毒颗粒感染临近细菌,

后者又可释放下一代病毒颗粒;

如果细菌在半固体

培养基上生长?/p>

自带病毒颗粒的扩散受到一定限制,

诸如

M13

等丝状噬菌体并不裂解细菌?/p>

但可以使细菌生长速度降低至原来的

1/2

,在上层琼脂中生长的菌台的背景下,生长缓慢细

菌形成了一个不断扩大到肉眼可见的噬菌斑?/p>

 

三、材料与试剂?/p>

1

?/p>

M13

噬菌?/p>

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2

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菌种

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3

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LB

培养?/p>

 

四、实验步?/p>

 

1.

 

1

、取

5ml LB

液体培养基于

10ml

的试管中,加?/p>

5ul 

四环素(

20mg/ml

?/p>

,将大肠杆菌

接入?/p>

3

7

℃震荡(

80-100rpm

)培养过夜(

12h

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2.

 

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2ml

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1:10

稀释)

,继?/p>

3

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℃震?/p>

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80-100rpm

)培?/p>

4.5h

(不宜过快,否则,细菌性毛被破坏,噬菌体无法导入)

,即

成为感受态细?/p>

 

3.

 

培养细菌时将水浴锅打开?/p>

43

℃预热,并将

LB 

平板置于

37

℃预热备?/p>

 

4.

 

用装?/p>

LB

培养基的

EP

?/p>

10

倍稀释噬菌体?/p>

理想的稀释范围:

扩增过的噬菌?/p>

10

8

-10

10

倍稀释,未扩增过?/p>

10

4

-10

5

倍稀?/p>

 

5.

 

将顶层琼脂用微波炉或者电磁炉沸水融化,置于水浴锅中保温待?/p>

 

6.

 

当大肠杆菌达到对数成长期,取大肠杆菌

ER2738

感受态细?/p>

200ul

?/p>

EP

管中

 

7.

 

加入

10ul-100 

ul

?/p>

或者一定体积)

一定稀释度的噬菌体溶液?/p>

快速混合,

室温孵育

1-5min 

8.

 

将感染过的大肠杆菌的培养液倒入

43

℃顶层琼脂中,用

vortex

迅速混匀,立刻在预热

?/p>

LB

培养基上倒平板,迅速摇晃平板使顶层琼脂均匀展开并铺满表?/p>

 

9.

 

室温静置

5min

左右使平板冷却凝固,将培养皿倒置

37

℃培养过?/p>

 

10.

 

第二天观察平板,对培养皿中的噬菌斑进行计数,计算约含?/p>

10-100

个数量级的平?

噬菌斑的具体数目?/p>

y

?/p>

,计算噬菌体效价?/p>

pfu/ml

)噬菌体效价

=y*10

x+2

puf/ml 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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噬菌体空斑实?/p>

 

一、实验目的:

1

、了?/p>

M13

噬菌体载体的一般结构、性质及感染特征?/p>

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2

、学习并掌握

M13

噬菌体载体的空斑纯化技术?/p>

 

二、实验原理:一?/p>

M13

噬菌体的病毒颗粒感染一个细菌后形成一个噬菌斑。从感染细菌

释放出来的子代病毒颗粒感染临近细菌,

后者又可释放下一代病毒颗粒;

如果细菌在半固体

培养基上生长?/p>

自带病毒颗粒的扩散受到一定限制,

诸如

M13

等丝状噬菌体并不裂解细菌?/p>

但可以使细菌生长速度降低至原来的

1/2

,在上层琼脂中生长的菌台的背景下,生长缓慢细

菌形成了一个不断扩大到肉眼可见的噬菌斑?/p>

 

三、材料与试剂?/p>

1

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M13

噬菌?/p>

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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四、实验步?/p>

 

1.

 

1

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(不宜过快,否则,细菌性毛被破坏,噬菌体无法导入)

,即

成为感受态细?/p>

 

3.

 

培养细菌时将水浴锅打开?/p>

43

℃预热,并将

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平板置于

37

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4.

 

用装?/p>

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10

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理想的稀释范围:

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10

8

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倍稀释,未扩增过?/p>

10

4

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5

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5.

 

将顶层琼脂用微波炉或者电磁炉沸水融化,置于水浴锅中保温待?/p>

 

6.

 

当大肠杆菌达到对数成长期,取大肠杆菌

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加入

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或者一定体积)

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快速混合,

室温孵育

1-5min 

8.

 

将感染过的大肠杆菌的培养液倒入

43

℃顶层琼脂中,用

vortex

迅速混匀,立刻在预热

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9.

 

室温静置

5min

左右使平板冷却凝固,将培养皿倒置

37

℃培养过?/p>

 

10.

 

第二天观察平板,对培养皿中的噬菌斑进行计数,计算约含?/p>

10-100

个数量级的平?

噬菌斑的具体数目?/p>

y

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,计算噬菌体效价?/p>

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)噬菌体效价

=y*10

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一、实验目的:

1

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噬菌体载体的一般结构、性质及感染特征?/p>

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2

、学习并掌握

M13

噬菌体载体的空斑纯化技术?/p>

 

二、实验原理:一?/p>

M13

噬菌体的病毒颗粒感染一个细菌后形成一个噬菌斑。从感染细菌

释放出来的子代病毒颗粒感染临近细菌,

后者又可释放下一代病毒颗粒;

如果细菌在半固体

培养基上生长?/p>

自带病毒颗粒的扩散受到一定限制,

诸如

M13

等丝状噬菌体并不裂解细菌?/p>

但可以使细菌生长速度降低至原来的

1/2

,在上层琼脂中生长的菌台的背景下,生长缓慢细

菌形成了一个不断扩大到肉眼可见的噬菌斑?/p>

 

三、材料与试剂?/p>

1

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四、实验步?/p>

 

1.

 

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,将大肠杆菌

接入?/p>

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80-100rpm

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12h

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2.

 

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4.5h

(不宜过快,否则,细菌性毛被破坏,噬菌体无法导入)

,即

成为感受态细?/p>

 

3.

 

培养细菌时将水浴锅打开?/p>

43

℃预热,并将

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平板置于

37

℃预热备?/p>

 

4.

 

用装?/p>

LB

培养基的

EP

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10

倍稀释噬菌体?/p>

理想的稀释范围:

扩增过的噬菌?/p>

10

8

-10

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倍稀释,未扩增过?/p>

10

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5

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5.

 

将顶层琼脂用微波炉或者电磁炉沸水融化,置于水浴锅中保温待?/p>

 

6.

 

当大肠杆菌达到对数成长期,取大肠杆菌

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200ul

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7.

 

加入

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或者一定体积)

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快速混合,

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1-5min 

8.

 

将感染过的大肠杆菌的培养液倒入

43

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9.

 

室温静置

5min

左右使平板冷却凝固,将培养皿倒置

37

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10.

 

第二天观察平板,对培养皿中的噬菌斑进行计数,计算约含?/p>

10-100

个数量级的平?

噬菌斑的具体数目?/p>

y

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,计算噬菌体效价?/p>

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M13噬菌体空斑实?- 百度文库
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噬菌体空斑实?/p>

 

一、实验目的:

1

、了?/p>

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噬菌体载体的一般结构、性质及感染特征?/p>

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2

、学习并掌握

M13

噬菌体载体的空斑纯化技术?/p>

 

二、实验原理:一?/p>

M13

噬菌体的病毒颗粒感染一个细菌后形成一个噬菌斑。从感染细菌

释放出来的子代病毒颗粒感染临近细菌,

后者又可释放下一代病毒颗粒;

如果细菌在半固体

培养基上生长?/p>

自带病毒颗粒的扩散受到一定限制,

诸如

M13

等丝状噬菌体并不裂解细菌?/p>

但可以使细菌生长速度降低至原来的

1/2

,在上层琼脂中生长的菌台的背景下,生长缓慢细

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三、材料与试剂?/p>

1

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噬菌?/p>

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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培养?/p>

 

四、实验步?/p>

 

1.

 

1

、取

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液体培养基于

10ml

的试管中,加?/p>

5ul 

四环素(

20mg/ml

?/p>

,将大肠杆菌

接入?/p>

3

7

℃震荡(

80-100rpm

)培养过夜(

12h

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2.

 

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培养液转?/p>

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培养基中?/p>

1:10

稀释)

,继?/p>

3

7

℃震?/p>

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80-100rpm

)培?/p>

4.5h

(不宜过快,否则,细菌性毛被破坏,噬菌体无法导入)

,即

成为感受态细?/p>

 

3.

 

培养细菌时将水浴锅打开?/p>

43

℃预热,并将

LB 

平板置于

37

℃预热备?/p>

 

4.

 

用装?/p>

LB

培养基的

EP

?/p>

10

倍稀释噬菌体?/p>

理想的稀释范围:

扩增过的噬菌?/p>

10

8

-10

10

倍稀释,未扩增过?/p>

10

4

-10

5

倍稀?/p>

 

5.

 

将顶层琼脂用微波炉或者电磁炉沸水融化,置于水浴锅中保温待?/p>

 

6.

 

当大肠杆菌达到对数成长期,取大肠杆菌

ER2738

感受态细?/p>

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管中

 

7.

 

加入

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或者一定体积)

一定稀释度的噬菌体溶液?/p>

快速混合,

室温孵育

1-5min 

8.

 

将感染过的大肠杆菌的培养液倒入

43

℃顶层琼脂中,用

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迅速混匀,立刻在预热

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培养基上倒平板,迅速摇晃平板使顶层琼脂均匀展开并铺满表?/p>

 

9.

 

室温静置

5min

左右使平板冷却凝固,将培养皿倒置

37

℃培养过?/p>

 

10.

 

第二天观察平板,对培养皿中的噬菌斑进行计数,计算约含?/p>

10-100

个数量级的平?

噬菌斑的具体数目?/p>

y

?/p>

,计算噬菌体效价?/p>

pfu/ml

)噬菌体效价

=y*10

x+2

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