蛋白质印迹(
Western blot
)实验方?/p>
溶液和试?/p>
裂解缓冲?/p>
这些缓冲液可?/p>
4
?/p>
下保存数周,或者以分装形式?/p>
-20
?/p>
下保存长?/p>
1
年?/p>
Nonidet-P40 (NP40)
缓冲?/p>
150 mM NaCl
1.0% NP40
(可?/p>
0.1% Triton X-100
替代?/p>
50 mM Tris-HCl pH 8.0
蛋白酶抑制剂
RIPA
缓冲液(放射免疫沉淀试验缓冲液)
150 mM NaCl
1.0% NP-40
?/p>
0.1% Triton X-100
0.5%
脱氧胆酸?/p>
0.1% SDS
(十二烷基硫酸钠?/p>
50 mM Tris-HCl pH 8.0
蛋白酶抑制剂
Tris-HCl
缓冲?/p>
20 mM Tris-HCl pH 7.5
蛋白酶抑制剂
电泳、转膜、封闭缓冲液
Laemmli 2×
缓冲?/p>
/
上样缓冲?/p>
4% SDS
10% 2-
巯基乙醇
20%
甘油
0.004%
溴酚?/p>
0.125 M Tris-HCl
测定
pH
并调节至
pH 6.8
?/p>
电泳缓冲液(
Tris-
甘氨?/p>
/SDS
?/p>
25 mM Tris
?/p>
190 mM
甘氨?/p>
0.1% SDS
测定
pH
?/p>
pH
应为?/p>
8.3
。必要时进行调节?/p>
转膜缓冲液(湿转?/p>
25 mM Tris
?/p>
190 mM
甘氨?/p>
20%
甲醇
测定
pH
?/p>
pH
应为?/p>
8.3
。必要时进行调节?/p>
对于大于
80 kDa
的蛋白质,我们推荐加入最终浓度为
0.1%
?/p>
SDS
?/p>
转膜缓冲液(半干转)