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蛋白质印迹(

Western blot

)实验方?/p>

 

溶液和试?/p>

 

裂解缓冲?/p>

 

这些缓冲液可?/p>

 4 

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下保存数周,或者以分装形式?/p>

 -20 

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下保存长?/p>

 1 

年?/p>

 

Nonidet-P40 (NP40) 

缓冲?/p>

 

150 mM NaCl 

1.0% NP40

(可?/p>

 0.1% Triton X-100 

替代?/p>

 

50 mM Tris-HCl pH 8.0 

蛋白酶抑制剂

 

RIPA 

缓冲液(放射免疫沉淀试验缓冲液)

 

150 mM NaCl 

1.0% NP-40 

?/p>

 

0.1% Triton X-100 

0.5% 

脱氧胆酸?/p>

 

0.1% SDS

(十二烷基硫酸钠?/p>

 

50 mM Tris-HCl pH 8.0 

蛋白酶抑制剂

 

Tris-HCl 

缓冲?/p>

 

20 mM Tris-HCl pH 7.5 

蛋白酶抑制剂

 

电泳、转膜、封闭缓冲液

 

Laemmli 2×

 

缓冲?/p>

/

上样缓冲?/p>

 

4% SDS 

10% 2-

巯基乙醇

 

20% 

甘油

 

0.004% 

溴酚?/p>

 

0.125 M Tris-HCl

 

测定

 pH 

并调节至

 pH 6.8

?/p>

 

 

电泳缓冲液(

Tris-

甘氨?/p>

/SDS

?/p>

 

25 mM Tris 

?/p>

 

190 mM 

甘氨?/p>

 

0.1% SDS

 

测定

 pH

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pH 

应为?/p>

 

8.3

。必要时进行调节?/p>

 

转膜缓冲液(湿转?/p>

 

25 mM Tris 

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20% 

甲醇

 

测定

 pH

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应为?/p>

 

8.3

。必要时进行调节?/p>

 

对于大于

 80 kDa 

的蛋白质,我们推荐加入最终浓度为

 0.1% 

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 SDS

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转膜缓冲液(半干转)

 

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150 mM NaCl 

1.0% NP40

(可?/p>

 0.1% Triton X-100 

替代?/p>

 

50 mM Tris-HCl pH 8.0 

蛋白酶抑制剂

 

RIPA 

缓冲液(放射免疫沉淀试验缓冲液)

 

150 mM NaCl 

1.0% NP-40 

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0.1% Triton X-100 

0.5% 

脱氧胆酸?/p>

 

0.1% SDS

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50 mM Tris-HCl pH 8.0 

蛋白酶抑制剂

 

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20 mM Tris-HCl pH 7.5 

蛋白酶抑制剂

 

电泳、转膜、封闭缓冲液

 

Laemmli 2×

 

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4% SDS 

10% 2-

巯基乙醇

 

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甘油

 

0.004% 

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0.125 M Tris-HCl

 

测定

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并调节至

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对于大于

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的蛋白质,我们推荐加入最终浓度为

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转膜缓冲液(半干转)

 

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1.0% NP40

(可?/p>

 0.1% Triton X-100 

替代?/p>

 

50 mM Tris-HCl pH 8.0 

蛋白酶抑制剂

 

RIPA 

缓冲液(放射免疫沉淀试验缓冲液)

 

150 mM NaCl 

1.0% NP-40 

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0.1% Triton X-100 

0.5% 

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50 mM Tris-HCl pH 8.0 

蛋白酶抑制剂

 

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20 mM Tris-HCl pH 7.5 

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电泳、转膜、封闭缓冲液

 

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4% SDS 

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蛋白质印?Western blot)实验方案 - 百度文库
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Nonidet-P40 (NP40) 

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150 mM NaCl 

1.0% NP40

(可?/p>

 0.1% Triton X-100 

替代?/p>

 

50 mM Tris-HCl pH 8.0 

蛋白酶抑制剂

 

RIPA 

缓冲液(放射免疫沉淀试验缓冲液)

 

150 mM NaCl 

1.0% NP-40 

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0.1% Triton X-100 

0.5% 

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0.1% SDS

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50 mM Tris-HCl pH 8.0 

蛋白酶抑制剂

 

Tris-HCl 

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20 mM Tris-HCl pH 7.5 

蛋白酶抑制剂

 

电泳、转膜、封闭缓冲液

 

Laemmli 2×

 

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4% SDS 

10% 2-

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20% 

甘油

 

0.004% 

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