新建
上传
首页
助手
最?/div>
资料?/div>
工具

实验一

 

载体与目的基因的连接与转化以?/p>

 

重组

DNA

的提取与酶切鉴定

 

一、实验目?/p>

 

1.CaCl

2

法制备感受态细?/p>

 

2.

目的基因与载体连接(

c-myc+pSV2

;粘端连接)

 

3.

重组质粒转化大肠杆菌并筛选转化体?/p>

HB101

?/p>

Amp

r

?/p>

 

4.

质粒

DNA

的小量快速制?/p>

 

5.

质粒

DNA

的限制性内切酶酶切

 

6.DNA

的琼脂糖凝胶电泳

 

二、实验原?/p>

 

通过粘端连接法将具有相同粘性末端的

DNA

分子连接在一起,通过碱基?/p>

对氢键形成一个相对稳定的结构?/p>

利用连接酶发挥间断修复的功能?/p>

从而获得重

组的

DNA

分子?/p>

 

受体细胞经处理后

(电击或

CaCl

2

等处理)

?/p>

细胞膜通透性发生变化,

从而使

外源的载体分子通过感受态细胞,

并使受体细胞获得新的稳定遗传的性状?/p>

该过

程称为转化。由于本实验?/p>

pSV

带有抗氨苄青霉素的基因,因而转化后的细?/p>

在含氨苄青霉素的平板上培养可以筛选出转化成功的受体细胞?/p>

 

分离质粒

DNA

的步骤包括:培养细菌使质粒扩增、收集和裂解细菌以及?/p>

离和纯化质粒

DNA

?/p>

SDS

可以使细胞壁裂解,碱变性抽提质?/p>

DNA

的原理是

利用染色?/p>

DNA

与质?/p>

DNA

的变性复性的差异达到分离目的?/p>

?/p>

pH

?/p>

12.6

时,

染色?/p>

DNA

氢键断裂,双螺旋结构解开而变性,质粒

DNA

由于超螺旋共价闭

合环状结构,

两条互补链不会完全分离?/p>

当采?/p>

pH 4.8

?/p>

NaAc

高盐缓冲液调?/p>

pH

至中性时,质?/p>

DNA

恢复原有的构型,而染色体

DNA

则不能复性而缠绕形

成网状结构。通过离心可将染色?/p>

DNA

及大分子

RNA

、蛋白质等去除?/p>

 

 

三、实验器材和试剂

 

?/p>

.

器材

 

恒温摇床、电热恒温培养箱、电热恒温水浴、台式离心机、低温离心机、涡

旋振荡器、移液枪及枪头?/p>

1.5 ml

离心管、制冰机、三角推棒、酒精灯、细菌培

Ͼλ
新建
上传
首页
助手
最?/div>
资料?/div>
工具

实验一

 

载体与目的基因的连接与转化以?/p>

 

重组

DNA

的提取与酶切鉴定

 

一、实验目?/p>

 

1.CaCl

2

法制备感受态细?/p>

 

2.

目的基因与载体连接(

c-myc+pSV2

;粘端连接)

 

3.

重组质粒转化大肠杆菌并筛选转化体?/p>

HB101

?/p>

Amp

r

?/p>

 

4.

质粒

DNA

的小量快速制?/p>

 

5.

质粒

DNA

的限制性内切酶酶切

 

6.DNA

的琼脂糖凝胶电泳

 

二、实验原?/p>

 

通过粘端连接法将具有相同粘性末端的

DNA

分子连接在一起,通过碱基?/p>

对氢键形成一个相对稳定的结构?/p>

利用连接酶发挥间断修复的功能?/p>

从而获得重

组的

DNA

分子?/p>

 

受体细胞经处理后

(电击或

CaCl

2

等处理)

?/p>

细胞膜通透性发生变化,

从而使

外源的载体分子通过感受态细胞,

并使受体细胞获得新的稳定遗传的性状?/p>

该过

程称为转化。由于本实验?/p>

pSV

带有抗氨苄青霉素的基因,因而转化后的细?/p>

在含氨苄青霉素的平板上培养可以筛选出转化成功的受体细胞?/p>

 

分离质粒

DNA

的步骤包括:培养细菌使质粒扩增、收集和裂解细菌以及?/p>

离和纯化质粒

DNA

?/p>

SDS

可以使细胞壁裂解,碱变性抽提质?/p>

DNA

的原理是

利用染色?/p>

DNA

与质?/p>

DNA

的变性复性的差异达到分离目的?/p>

?/p>

pH

?/p>

12.6

时,

染色?/p>

DNA

氢键断裂,双螺旋结构解开而变性,质粒

DNA

由于超螺旋共价闭

合环状结构,

两条互补链不会完全分离?/p>

当采?/p>

pH 4.8

?/p>

NaAc

高盐缓冲液调?/p>

pH

至中性时,质?/p>

DNA

恢复原有的构型,而染色体

DNA

则不能复性而缠绕形

成网状结构。通过离心可将染色?/p>

DNA

及大分子

RNA

、蛋白质等去除?/p>

 

 

三、实验器材和试剂

 

?/p>

.

器材

 

恒温摇床、电热恒温培养箱、电热恒温水浴、台式离心机、低温离心机、涡

旋振荡器、移液枪及枪头?/p>

1.5 ml

离心管、制冰机、三角推棒、酒精灯、细菌培

">
新建
上传
首页
助手
最?/div>
资料?/div>
工具

实验一

 

载体与目的基因的连接与转化以?/p>

 

重组

DNA

的提取与酶切鉴定

 

一、实验目?/p>

 

1.CaCl

2

法制备感受态细?/p>

 

2.

目的基因与载体连接(

c-myc+pSV2

;粘端连接)

 

3.

重组质粒转化大肠杆菌并筛选转化体?/p>

HB101

?/p>

Amp

r

?/p>

 

4.

质粒

DNA

的小量快速制?/p>

 

5.

质粒

DNA

的限制性内切酶酶切

 

6.DNA

的琼脂糖凝胶电泳

 

二、实验原?/p>

 

通过粘端连接法将具有相同粘性末端的

DNA

分子连接在一起,通过碱基?/p>

对氢键形成一个相对稳定的结构?/p>

利用连接酶发挥间断修复的功能?/p>

从而获得重

组的

DNA

分子?/p>

 

受体细胞经处理后

(电击或

CaCl

2

等处理)

?/p>

细胞膜通透性发生变化,

从而使

外源的载体分子通过感受态细胞,

并使受体细胞获得新的稳定遗传的性状?/p>

该过

程称为转化。由于本实验?/p>

pSV

带有抗氨苄青霉素的基因,因而转化后的细?/p>

在含氨苄青霉素的平板上培养可以筛选出转化成功的受体细胞?/p>

 

分离质粒

DNA

的步骤包括:培养细菌使质粒扩增、收集和裂解细菌以及?/p>

离和纯化质粒

DNA

?/p>

SDS

可以使细胞壁裂解,碱变性抽提质?/p>

DNA

的原理是

利用染色?/p>

DNA

与质?/p>

DNA

的变性复性的差异达到分离目的?/p>

?/p>

pH

?/p>

12.6

时,

染色?/p>

DNA

氢键断裂,双螺旋结构解开而变性,质粒

DNA

由于超螺旋共价闭

合环状结构,

两条互补链不会完全分离?/p>

当采?/p>

pH 4.8

?/p>

NaAc

高盐缓冲液调?/p>

pH

至中性时,质?/p>

DNA

恢复原有的构型,而染色体

DNA

则不能复性而缠绕形

成网状结构。通过离心可将染色?/p>

DNA

及大分子

RNA

、蛋白质等去除?/p>

 

 

三、实验器材和试剂

 

?/p>

.

器材

 

恒温摇床、电热恒温培养箱、电热恒温水浴、台式离心机、低温离心机、涡

旋振荡器、移液枪及枪头?/p>

1.5 ml

离心管、制冰机、三角推棒、酒精灯、细菌培

Ͼλ">
Ͼλ
Ŀ

载体与目的基因的连接与转化以及重组DNA的提取与酶切鉴定 - 百度文库
新建
上传
首页
助手
最?/div>
资料?/div>
工具

实验一

 

载体与目的基因的连接与转化以?/p>

 

重组

DNA

的提取与酶切鉴定

 

一、实验目?/p>

 

1.CaCl

2

法制备感受态细?/p>

 

2.

目的基因与载体连接(

c-myc+pSV2

;粘端连接)

 

3.

重组质粒转化大肠杆菌并筛选转化体?/p>

HB101

?/p>

Amp

r

?/p>

 

4.

质粒

DNA

的小量快速制?/p>

 

5.

质粒

DNA

的限制性内切酶酶切

 

6.DNA

的琼脂糖凝胶电泳

 

二、实验原?/p>

 

通过粘端连接法将具有相同粘性末端的

DNA

分子连接在一起,通过碱基?/p>

对氢键形成一个相对稳定的结构?/p>

利用连接酶发挥间断修复的功能?/p>

从而获得重

组的

DNA

分子?/p>

 

受体细胞经处理后

(电击或

CaCl

2

等处理)

?/p>

细胞膜通透性发生变化,

从而使

外源的载体分子通过感受态细胞,

并使受体细胞获得新的稳定遗传的性状?/p>

该过

程称为转化。由于本实验?/p>

pSV

带有抗氨苄青霉素的基因,因而转化后的细?/p>

在含氨苄青霉素的平板上培养可以筛选出转化成功的受体细胞?/p>

 

分离质粒

DNA

的步骤包括:培养细菌使质粒扩增、收集和裂解细菌以及?/p>

离和纯化质粒

DNA

?/p>

SDS

可以使细胞壁裂解,碱变性抽提质?/p>

DNA

的原理是

利用染色?/p>

DNA

与质?/p>

DNA

的变性复性的差异达到分离目的?/p>

?/p>

pH

?/p>

12.6

时,

染色?/p>

DNA

氢键断裂,双螺旋结构解开而变性,质粒

DNA

由于超螺旋共价闭

合环状结构,

两条互补链不会完全分离?/p>

当采?/p>

pH 4.8

?/p>

NaAc

高盐缓冲液调?/p>

pH

至中性时,质?/p>

DNA

恢复原有的构型,而染色体

DNA

则不能复性而缠绕形

成网状结构。通过离心可将染色?/p>

DNA

及大分子

RNA

、蛋白质等去除?/p>

 

 

三、实验器材和试剂

 

?/p>

.

器材

 

恒温摇床、电热恒温培养箱、电热恒温水浴、台式离心机、低温离心机、涡

旋振荡器、移液枪及枪头?/p>

1.5 ml

离心管、制冰机、三角推棒、酒精灯、细菌培



ļ׺.doc޸Ϊ.docĶ

  • 2017ϰʡִҵҽʦѧ
  • ۲ָ
  • ΢ѧѧϰ8ο
  • ʦСѧ꼶ϲڶԪһΡʫסѧ
  • ڲЧ˰취
  • ʷǡʼʱ ԭ+
  • (word)ҰѧӢ˵̳4ڶ(unit test)
  • ʡ߿ѧϰ֪ʶ㰴Ѷ͹ܽ
  • 6.˽⣩
  • дһ100鵥

վ

԰ Ͼλ
ϵͷ779662525#qq.com(#滻Ϊ@)